선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 전보에서 이미 홍삼의 갈색화 반응이 초기에서 효소적 갈색 화반응, 증삼후에는 비효소적 갈색화반응이 관련된 복합적 반응에 의해 이루어지며, 홍삼의 갈변물질은 대부분 수용성 물질임을 밝혔고, 幻)또한 홍삼 분말을 물로 추출한 뒤, column chromatography 등의 방법에 의해 분리한 후 부분적 구조분석 결과를 보고하였다.22)따라서 본 연구에서는 고려 홍삼에서 분리한 수용성 갈변물질의 항산화 활성을 linoleic acid, Ox-brain autoxidant, Fe2+ ADP/NADP 및 cumene hydroperoxide sys tem 중심으로 조사한 그 결과를 보고하고자 한다.
제안 방법
- 이렇게 제거된 수용 성 갈변물질 분획에 55%에탄올을 가하여 침전물을 제거한 후 (Spectra, M.W Cut-off 3, 500)투석막으로 4。(:에서 1일씩 3회 투석하여 투석내액(L이라고 명명)과 투석외액으로 나누었다. 투 석외액의 저분자 갈변물질을 분리하기 위하여 Bio-Gel P-2로 gel chromatography상에서 분리하여 갈변물질 분획을 얻었다.
- T Baker; USA)에 통과시키고, 증류수 세척하여 최종 2 ㎖로 정용하였다. 20 B를 취하여 RP-HPLC를 이용하여 2-hydroxypyrimidine으 로서 MDA를 정량 분석하였다. 이때 HPLC의 조건은 C18 columnQiBondapak 18, 0.
- Afanasev 등의 방법에 따라 먼저 150 mM Iris HC1 buffer(pH 7.4) 285 [0, niicrosome(10 mg protein/mZ) 65 W, 0.2 mM F©2+을 포함하는 5 mM ADP 34 p/, 1 mM NADP 66에 수용성 갈변물질을 50 ㎕ 첨가하여 총량 500 B의 시료 용액을 제조하였다. 이 시료 용액 100 B을 Bidlack 등29)의 방법에 따라 3기에서 각각 5, 10, 20, 30 및 60분 동안 반응시켜 지질과산화를 유도하고 L2% TBA 500 ㎕ 20% acetic acid 750 B, 8.
- Ox-brain homogenates를 사용하여 ox-brain이 자동산화에 의해 생성되는 MDA를 수용성 갈변물질을 농도별로 첨가하여 그 자동산화의 저해 여부를 상대 antioxidant 활성으로 조사한 결과는 Fig. 4와 같다. 즉, 투석내액인 L은 10 농도에서 21.
- Tris-HCl buffer(pH 7.4, 30 mM)와 SDS(0.2%)가 첨가된 linoleic acid(l%) 수용액에 수용성 갈변물질 분획을 0~1500 ppm 농도로 가하고, 2324)400 ㎛ H2O2를 첨가 30분전에 미 리 혼합한 후 가하여 최종 잔류물의 용량을 5 ㎖로 한 후 37°C에서 16시간 동안 진탕하며 산화반응 시켰다. 16시간 후1.
- 2 m/를 각 시험관으로 옮기고, 수용성 갈변물질을 농도별로 첨가하였 다. 대조군은 phosphatesaline bu任er를 사용하였으며, 각 시험 관을 37°C incubator에서 1시간 동안 반응시키고 28% trichloroacetic acid(TCA) 375 p/을 첨가한 후 원심분리(3, 000 rpm, 20분)하여 상징액 600 [11 취해서 1.2% 2-thiobarbituric acid(TBA) 150 ㎕를 첨가하였다. 이 용액을 lOVC에서 20분 동안 열처리한 후 532 nm에서 흡광도를 측정하여 항산화성을 조사하였다.
- 2 mg BHT를 가하여 산화반응을 종결시켰다. 산화된 시료 중에 생성된 MDA(malondialdehyde)의 양은 Osawa 와 Shiba- moto의 방법을25) 일부 변경하여 다음과 같이 HPLC(Waters, USA)로 분석 측정하였다. 즉, 산화된 시료(1 m2)에 0.
- 수용성 갈변물질이 ox-brain내의 지방질 항산화성은 지방질 로서 ox-brain homogenates를 이용하여 자동산화를 시킨 후 MDA의 양을 상대적으로 비교하였다.26) 즉, 단백질 농도가 6.
- 6) 375 B와 microsome(10 mg protein/m/) 65㎕ CHR/MeOH 10㎕ 에 수용성 갈변물질을 50㎕을 첨가하여 총량을 500㎕로 하였다. 이 반응액을 Bidlack29) 등의 방법에 따라 잘 혼합하여 37℃(3에 서 각각 5, 10, 20, 30 및 60분 동안 반응시켜 지질과산화를 유도하고 1.2% TBA 용액 500㎕ 와 20% acetic acid 750 ㎕, 8.1% SDS 100 ㎕ 시료용액 100 W를 첨가한 후 원심분리(l, 000Xg, 10분)하였다. 그 상징액을 취하여 끓는 물에 30분 간 가열하여 발색시키고, 냉각하여 532 nm에서 흡광도를 측정 하였다.
- 2 mM F©2+을 포함하는 5 mM ADP 34 p/, 1 mM NADP 66에 수용성 갈변물질을 50 ㎕ 첨가하여 총량 500 B의 시료 용액을 제조하였다. 이 시료 용액 100 B을 Bidlack 등29)의 방법에 따라 3기에서 각각 5, 10, 20, 30 및 60분 동안 반응시켜 지질과산화를 유도하고 L2% TBA 500 ㎕ 20% acetic acid 750 B, 8.1% SDS 100 B를 첨가한 후 원 심분리(LOOOXg, 10분)하였다. 그 상징액을 취하여 끓는 물에 30분간 가열하여 발색시키고, 냉각하여 532 nm에서 흡광도를 측정하였다.
- 2% 2-thiobarbituric acid(TBA) 150 ㎕를 첨가하였다. 이 용액을 lOVC에서 20분 동안 열처리한 후 532 nm에서 흡광도를 측정하여 항산화성을 조사하였다.
- 산화된 시료 중에 생성된 MDA(malondialdehyde)의 양은 Osawa 와 Shiba- moto의 방법을25) 일부 변경하여 다음과 같이 HPLC(Waters, USA)로 분석 측정하였다. 즉, 산화된 시료(1 m2)에 0.8 ㎖ urea(6M)와 0.2 ml HC1(1.2N)을 가하여 100°C에서 1시간 동안 가열한 후, 이 반응액을 C18-SPE colunm(J.T Baker; USA)에 통과시키고, 증류수 세척하여 최종 2 ㎖로 정용하였다. 20 B를 취하여 RP-HPLC를 이용하여 2-hydroxypyrimidine으 로서 MDA를 정량 분석하였다.
- 그 상징액을 취하여 끓는 물에 30분간 가열하여 발색시키고, 냉각하여 532 nm에서 흡광도를 측정하였다. 지질과산화 억제율은 대조군의 흡광도에 대한 저해율(%)로 비교 분석하였다.
- 그 상징액을 취하여 끓는 물에 30분간 가열하여 발색시키고, 냉각하여 532 nm에서 흡광도를 측정하였다. 지질과산화 억제율은 대조군의 흡광도에 대한 저해율(%)로 비교 분석하였다.
- W Cut-off 3, 500)투석막으로 4。(:에서 1일씩 3회 투석하여 투석내액(L이라고 명명)과 투석외액으로 나누었다. 투 석외액의 저분자 갈변물질을 분리하기 위하여 Bio-Gel P-2로 gel chromatography상에서 분리하여 갈변물질 분획을 얻었다. Column상에서 먼저 유출되는 갈변물질 분획을 S-1, 그 다음에 유출되는 갈변물질 분획을 S-2로 명명한 후 각 시료를 동결건조하여 사용하였다.
이론/모형
- Lake 등27)의 방법에 따라 쥐의 간으로 부터 microsome을 분리하였다. 즉, 체중 180~200g의 웅성 Sprague Dawley rat로 부터 간조직을 절단하여 잘게 자른 후, Fig.
성능/효과
- 1. Lin이eic acid : 투석내액의 갈변물질보다 투석외액의 갈변 물질 쪽에서 hydroperoxy radical 저해율이 높은 것으로 나타났으며, 이때 S・2의 산화저해율은S・l, L 시험구보다 적은 농도에서 저해율이 높았다. S-2의 산화저해율은 49.
- 2. Ox-brain autoxidant : 자동산화에의한 항산화활성을 조사한 결과, 투석내액의 갈변물질보다 투석외액의 갈변물질 쪽에서 자동산화에의한 항산화활성이 높은 것으로 나타났다. 특히 S-2의 항산화활성은 22.
- 3. Fe2+ ADP/NADP 및 cumene hydroperoxide : 흰쥐 간의 microsome 분획을 분리하여 수용성 갈변물질의 ADP/ NADP 및 cumene hydroperoxide 항산화 활성을 조사한 결과, 모든 시험구에서 반응 초기에 항산화 활성이 있으나, 반응 시간이 길수록 항산화 활성은 감소하였다. 그 활성의 순서는 S- 2그S-1>L순으로 나타났으나 항산화 활성의 강도는 전체적으로 약하게 나타났다.
- ° 또한 유해활성산소는 체내의 지방질(lipids)과 쉽게 결합하여 연쇄적으로 제2의 산화를 유발시켜 여러 가지 free radical들과 산화생성물들을 생성 한다.6)유해활성산소의 해독을 막을 수 있는 방법으로는 인체에서 발생하는 유해활성산소의 양을 줄이거나, 이미 발생한 유 해활성산소를 제거하는 것이며, 유해활성산소를 제거하는 방법으로는 P-carotene, ascorbic acid, tocopherol0] 함유된 신선한 야채, 과일, 견과류 및 산화방지제를 먹는것이 좋다고 권장 하고 있다.7-9)
- 97.5%로 나타나 첨가농도가 증가함에 따라 linoleic acid 산화 저해율은 높았다.
- 3에 나타냈다. MDA 생성량으로 비교 측정한 항산화 효과는 S-2, S-1 및 L 순으로 나타났다. 투석내액 갈변 물질보다 투석외액 갈변물질 쪽에서 산화저해율이 높은 것으로 나타났으며, 이때 S-2의 산화저해율은 L, S-1 시험구보다 적은 농도에서 산화억제율이 높았다.
- 고려인삼에서 분리한 polyacetylene 성분인 panaxydol, panax- ynol, panaxytriol0] CCI4로 유도된 흰쥐의 지질과산화와 효소적 또는 비효소적으로 유도된 시험관내 과산화지질 형성에 미치는 영향을 조사한 결과에서 polyacetylene 성분들은 CCI4로 유도된 간의 과산화지질 형성에 대한 보호작용을 나타내었다. 그리고 panaxynol은 혈청 지질과산화 수준을 저하시켰으며, CC14 처리 에 의해 cytochrome P-450 함량과 aniline hydroxylase, ami- nopyrine, demethylase 활성이 저하되지만, panaxydol과 panax- ynol은 aniline hydroxylase, polyacetylene 성분은 aminopyrine demethylase 생성을 유도하는 등 polyacetylene 성분은 CC*로 유도된 간독성에 대한 보호작용이 있다고 하였다.
- 고려인삼에서 분리한 polyacetylene 성분인 panaxydol, panax- ynol, panaxytriol0] CCI4로 유도된 흰쥐의 지질과산화와 효소적 또는 비효소적으로 유도된 시험관내 과산화지질 형성에 미치는 영향을 조사한 결과에서 polyacetylene 성분들은 CCI4로 유도된 간의 과산화지질 형성에 대한 보호작용을 나타내었다. 그리고 panaxynol은 혈청 지질과산화 수준을 저하시켰으며, CC14 처리 에 의해 cytochrome P-450 함량과 aniline hydroxylase, ami- nopyrine, demethylase 활성이 저하되지만, panaxydol과 panax- ynol은 aniline hydroxylase, polyacetylene 성분은 aminopyrine demethylase 생성을 유도하는 등 polyacetylene 성분은 CC*로 유도된 간독성에 대한 보호작용이 있다고 하였다.37)
- 000)가 있음이 확인되었다. 상기의 방법으로 TEP를 이용하여 MDA(100 nmoj/m/)와 urea(6M)를 반응시킨 시험결과 2-hydroxypyrimidine으로 85% 이상의 수율을 나타냈다. 이 HPLC 방법은 종래의 TBA 방법과 비교하여, 32)MDA 만의 순수 단독 정량분석이 가능하며 시료 간 비교 가능한 재현성(무 첨가군 측정시, SD=14.
- 상기의 방법으로 TEP를 이용하여 MDA(100 nmoj/m/)와 urea(6M)를 반응시킨 시험결과 2-hydroxypyrimidine으로 85% 이상의 수율을 나타냈다. 이 HPLC 방법은 종래의 TBA 방법과 비교하여, 32)MDA 만의 순수 단독 정량분석이 가능하며 시료 간 비교 가능한 재현성(무 첨가군 측정시, SD=14.8%, n=5)과 시료의 분리, 정제면에서 용매를 사용하지 않는 우수한 방법임이 확인되었다.
- 4와 같다. 즉, 투석내액인 L은 10 농도에서 21.65%, 30 W에서 32.45%, 60 |㎕에서는 52.98%의 활성을 보였으며, 투석외액인 S-1 는 10 B 농도에서 32.28%, 30 B에 서 43.19%, 60 B에서는 95.72%였고, S-2의 경우는 10 gZ 농도에서 49.52%, 30 에서 62.44%, 60 ㎕에서는 97.54%로 항산화 활성이 아주 강하였으며, 시료의 농도가 증가할수록 항산화 활성이 증가하였다. 갈변물질의 항산화성은 여러 인자가 있지만 hydroxide, amine 및 carboxyl acid 구조에 의한 것으 로 생각된다.
- MDA 생성량으로 비교 측정한 항산화 효과는 S-2, S-1 및 L 순으로 나타났다. 투석내액 갈변 물질보다 투석외액 갈변물질 쪽에서 산화저해율이 높은 것으로 나타났으며, 이때 S-2의 산화저해율은 L, S-1 시험구보다 적은 농도에서 산화억제율이 높았다. 투석외액인 S-1 는 18.
- 투석내액 갈변 물질보다 투석외액 갈변물질 쪽에서 산화저해율이 높은 것으로 나타났으며, 이때 S-2의 산화저해율은 L, S-1 시험구보다 적은 농도에서 산화억제율이 높았다. 투석외액인 S-1 는 18.5, 22.8,25.4, 25.7% 이고, S-2의 산화저해율은 22.5, 31.7, 31.9 및33.5%였고, 투석내액인 g 산화저해율은 0.2, 5.9 및 10.0% 로 나타나 첨가농도가 증가함에 따라 산화저해율은 높았다. 그러나 g 첨가구에서는 S-1, S-2보다 산화저해율이 현저히 낮았다.
- 81%로 시간이 증가함에 따라 지질과산화의 항산화 활성은 감소하였다. 투석외액인 S-1는 5분이내 5.36%, 60 분 0.85%였고, S-2의 경우 5분일 때 17.44%에서 60분일 때2.74%로 모든 시험구에서 반응초기에 항산화 활성이 강하였으 며, 반응시간이 길수록 항산화력은 감소하였다. 수용성 갈변물 질의 항산화 활성은 S-2, S-1, L 순으로 나타났다.
- 2와 깉다. 표준품을 사용하여 시료 용리 시 55분에서의 peak가 2-hydrox-ypyrimidine임을 확인하였으며, 2-hydroxypyrimidine의 표준품 용액(0~100 nmol/m/)을 사용한 시험에서 peak area와 2- hydroxypyrimidine 의 농도 사이에는 우수한 직선관계 (K=1.000)가 있음이 확인되었다. 상기의 방법으로 TEP를 이용하여 MDA(100 nmoj/m/)와 urea(6M)를 반응시킨 시험결과 2-hydroxypyrimidine으로 85% 이상의 수율을 나타냈다.
후속연구
- } ascorbic acid, benzoic acid, />-oxy- benzoic ester는 오랫동안 이용되어 왔으나 다량 섭취하면 유해하다는 설 U)등에 기인하여 합성 식품첨가물에 대한 소비자의 거부반응으로 그의 수요■가 급격히 감소되고 있는 추세에 있다. 따라서 이러한 Melanodine의 항산화적 특성을 이용한 새 로운 천연 항산화제 개발 및 그 이용을 적극 검토 할 수 있을 것이다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.