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문제 정의
- 이 연구의 목적은 분만 전후의 산모의 구강 검사를 통하여 치주질환 활성도(periodontal disease activity) 측정으로서 치주낭 깊이 , 부착 상실도, 치은지수, 치은 열구액양(GCF: gingival crevicular fluid) 및 치은연하치태내치주 병인균 검정 등을 통하여 치주질환 활성도와 조산과의 상관관계를 규명하고자 하는 데 있다.
가설 설정
- 이와 같은 이론적 배경 하에서 세울 수 있는 가설은 만성 치주질환은 그람음성 혐기성 세균의 저장소로 작용하여 세균내독소와 PGE2, TNF-a와 같은염증매체를 분비시켜 태아 태반 단위의 조산유발 기전에 영향을 주어 조산을 일으킨다는 것이다. 이러한 가설을 뒷받침하는 동물실험 모델로 치주질환의 병인 균인 Porphyromonas gingivalis를 임 신한 hamster 의 피하에 감염시키면 태아의 체중을 25% 감소시킨다는 연구결과가 있고, 태아발육 지연의 정도에 따라 PGE2와 TNF-a 농도가 증가된다는 연구도 보고되 었다18.
제안 방법
- gingivalis (strain W50), P intermedia(ATCC 25611), A . actino -myecetemcomitans(strain Y4)를 각각 가토에 면역감작시켜 특이항체를 생산하였다. 각각의 특이항체는 타균간의 항원, 항체 교차반응 검사를 실시하여 교차반응이 없음을 확인한 후 냉동 보관하였다.
- 각 환자의 대상 치 아는 Ramfjord(#16, 21, 24, 36, 41, 44) 의 치 아로 정 하고 각각 치은지수(GI: Gingival Index, L & Silness), 치주낭깊이(PPD:probing pocket depth), 부착상실도 (LA: loss of attachment), 치은 열구액(GCF: gingival crevicular fluid) 양을 측정하였다. 치은의 염증 정도는 치은지수를 이용하여 근심협면, 협면, 원심협면, 설면에서 측정하고 상태를 0에서 3까지 기록하였다.
- actino -myecetemcomitans(strain Y4)를 각각 가토에 면역감작시켜 특이항체를 생산하였다. 각각의 특이항체는 타균간의 항원, 항체 교차반응 검사를 실시하여 교차반응이 없음을 확인한 후 냉동 보관하였다. 환자당 치주낭이 가장 깊은 두 부위를 선택하여 치은연상치태를 조심스럽게 제거하고 방습한 후, #35 paper point 1개를 저항감이 느껴질 때까지 치은연하로 삽입하고 30초 후 PBS용액이 들어있는 시험관에 넣고 균일하게 혼합하였다.
- , Cochranvile, PA, USA) 와 함께 37 C 에서 30분간 배양시킨 다음 PBS에서 1시간 동안 세척하였다. 간접면역형광법 관찰은 이ympus BH-2 현미경(Olympus Inc. Co., Osaka, Japan)을 이용하였고 HBO 200 mercury light source와 적절한 excitation filters(BG 38, GB 23, TK 495 dichronic mirror, KP 490 filters) 에서 나오는 incident light 를 사용하여 형 광의 강도를 측정하였다. 세포 외 형 이 정 확히 나타나고, 중등도 내지 현란한 형광을 나타낼 경우 양성 반응으로 간주하여 그 수를 관찰하였다.
- , Chon ju, Korea) 3개를 저항감이 느껴질 때까지 치은연하로 삽입하고 30초후 2ml의 VMGA Ⅲ 용액이 들어있는 시 험관에 넣고 vortex로 균일하게 혼합하였다. 그 후 80% N2, 10% CO2, 10% H2가 들어있는 혐 기성 배양기 (Anaerobic system 1024, Forma, Marieta, Oh., U.S.A.)안에서 10배 단계로 희석하여 세균의 종류에 따라 다음과 같은 방법을 시행한다.
- 1996년 Offenbacher 등은 치주질환의 활성도를 나타내는 치주낭 깊이와 부착상실을 이용하여 조산과 치주질환과의 관련성을 규명하였는데22 이러 한 결과는 본 연구에서도 비슷한 양상으로 나타나 조산한 산모에서 정상 분만한 산모보다 더 깊은 치주낭과 더 큰 부착상실을 보여 통계학적인 유의성을 나타냈다. 그러나, Offenbacher 등의 연구에서는 임상지수의 측정에 manual probe(UNC-15)를 사용하였는데 본 연구에서는 객관성과 정밀성을 얻기 위해 0.2 mm 단위로 되어있는 전기 탐침인 Florida probe를 이용하였고, 임상지수로 치은열구액 양을 추가하여 실험군과 대조군간에 약간의 차이를 관찰했으며 , 또한 세균 배양과 간접 면역형광법에 의해 치주질환의 병인 균들을 검증하여 치주질환 활성도와 조산과의 상관관계를 보다 직접 적으로 규명 하고자 하였다.
- 첫 번째 방법은 이미 조산한 경험이 있거나 이번에 조산한 산모들을 합하여 실험군(any PLBW cases)으로, 조산한 경험이 없고 이번에도 정상 분만한 산모들을 대조군(all Normal Birth Weight controls) 으로 정 하였다. 두 번째는 이미 조산한 경험과는 상관없이 이번에만 조산한 산모들을 실험군(PLBW cases)으로, 그리고 이번에 정상 분만한 산모들을 대조군(NBW controls)으로 하였다.
- 서울대학교 산부인과 병동에 입원한 분만 전후의 산모 100명을 대상으로 동의를 받은 후 구강 내의 임상 검사와 치은연하치태세균 검사를 시행하였다. 이때 산모의 구강검사는 서울대학교 치과 병원의 치주과 의사가 방문하여시행하였으며, 산모의 분만결과를 알 수 없는 상태에서 검사하였다.
- 세균 분석도 혐기성 세균과 호기성세균, 그리고 치주질환의 대표적인 병인균인 P.gingivalis, P. intermedia, A.actinomycetem -comitans에 대해 측정한 두 부위 에서의 평균값을 구하였다. 실험결과의 분석은 SPSS for Windows(SPSS Inc.
- , Osaka, Japan)을 이용하였고 HBO 200 mercury light source와 적절한 excitation filters(BG 38, GB 23, TK 495 dichronic mirror, KP 490 filters) 에서 나오는 incident light 를 사용하여 형 광의 강도를 측정하였다. 세포 외 형 이 정 확히 나타나고, 중등도 내지 현란한 형광을 나타낼 경우 양성 반응으로 간주하여 그 수를 관찰하였다.
- 실험에 참여 한 모든 산모들의 분만 결과를 조사하여 두 가지 방법으로 실험군과 대조군을 설정하였다. 첫 번째 방법은 이미 조산한 경험이 있거나 이번에 조산한 산모들을 합하여 실험군(any PLBW cases)으로, 조산한 경험이 없고 이번에도 정상 분만한 산모들을 대조군(all Normal Birth Weight controls) 으로 정 하였다.
- 시행하였다. 이때 산모의 구강검사는 서울대학교 치과 병원의 치주과 의사가 방문하여시행하였으며, 산모의 분만결과를 알 수 없는 상태에서 검사하였다.
- 임 상지수에서 , 치주낭 깊 이와 부착 상실은 가장 깊은 두 부위를 가진 치 아를 택해서 각 치 아의 모든 면의 평균값으로 정리했고, 치은지수와 치은 열구액양은 측정한 모든 부위의 값을 평균하였다. 세균 분석도 혐기성 세균과 호기성세균, 그리고 치주질환의 대표적인 병인균인 P.
- 첫 번째 방법은 이미 조산한 경험이 있거나 이번에 조산한 산모들을 합하여 실험군(any PLBW cases)으로, 조산한 경험이 없고 이번에도 정상 분만한 산모들을 대조군(all Normal Birth Weight controls) 으로 정 하였다. 두 번째는 이미 조산한 경험과는 상관없이 이번에만 조산한 산모들을 실험군(PLBW cases)으로, 그리고 이번에 정상 분만한 산모들을 대조군(NBW controls)으로 하였다.
- 치은 열구액양의 측정은 면봉, 거즈와 압축공기를 이용하여 치은연상치태를 제거한 후 Periopaper strip(Harco, Tustin, Ca., U.S.A.)을 이용하여 각 환자당 실험 대상 치아에서 가장 치주낭 깊이가 깊은 부위 두 군데를 선택하여 30초간 삽입한 후 꺼낸 다음 Periotron 8000(Harco, Tustin, Ca., U.S.A.) 에서 측정하였다.
- 치은의 염증 정도는 치은지수를 이용하여 근심협면, 협면, 원심협면, 설면에서 측정하고 상태를 0에서 3까지 기록하였다. 치주낭 깊이는 0.
- 치은의 염증 정도는 치은지수를 이용하여 근심협면, 협면, 원심협면, 설면에서 측정하고 상태를 0에서 3까지 기록하였다. 치주낭 깊이는 0.2 mm 단위로 설정된 전자 탐침기의 일종인 Florida Probe(Florida Probe Co., Fl., U.S.A.)를 이용하여 각 치아마다 근심협 면, 협 면, 원심협면, 근심설면, 설면, 원심설면의 여섯 부위 에서 측정하였고, 치은퇴축량도 백악법랑경계에서 치은변연까지의 거리를 같은 부위 에서 탐침 (Marquis Probe)을 이용하여 측정한 다음, 치주낭 깊이와 치은퇴축량을 합하여 부착 상실 값을 얻었다.
- 혐기성 세균에 대해서는 100以의 희석용액을 5% 가토 혈액, Hemin, Vitamin K 가 함유된 Blood agar plate에 접종하여 혐기성 세균배양기에서 37℃ 상태로 7일간 배양 후 그 수를 관찰하였다. 호기성 세균 동정은 100 以의 희석 용액을 5% sheep blood가 함유된 Blood agar plate에 접종하여 10% CO2 배양기(VWR)에서 37C 상태로 3일간 배양 후 세균의 수를 관찰하였다.
- 관찰하였다. 호기성 세균 동정은 100 以의 희석 용액을 5% sheep blood가 함유된 Blood agar plate에 접종하여 10% CO2 배양기(VWR)에서 37C 상태로 3일간 배양 후 세균의 수를 관찰하였다.
- 환자당 가장 깊은 치주낭을 가진 치 아를 선정하여 두 부위를 택한 후 치은연상 치태를 조심스럽게 제거하고 방습한 후, #35 paper point(Diamond Dental Industrial Co., Chon ju, Korea) 3개를 저항감이 느껴질 때까지 치은연하로 삽입하고 30초후 2ml의 VMGA Ⅲ 용액이 들어있는 시 험관에 넣고 vortex로 균일하게 혼합하였다. 그 후 80% N2, 10% CO2, 10% H2가 들어있는 혐 기성 배양기 (Anaerobic system 1024, Forma, Marieta, Oh.
데이터처리
- actinomycetem -comitans에 대해 측정한 두 부위 에서의 평균값을 구하였다. 실험결과의 분석은 SPSS for Windows(SPSS Inc. Chicago, U.S.A.) 6.01 version을 사용하여 Mann-Whitney U test로 실험 군과 대조군간의 차이를 검 증하였다.
성능/효과
- 결론적으로, 조산과 치주질환과의 상관관계를 알아보기 위해 임상 검사와 세균 검사를 함께 시행한 본 연구에서는 치주낭 깊이와 부착 상실에서 조산한 산모가 정 상 분만한 산모보다 더 큰 값을 가져서 치주질환이 조산을 일으키는 유발인자가 될 수 있다는 최근의 연구 결과들을 다시 한번 입증할 수 있었고 세균 검사시 혐기성 세균의 수가 증가한 사실도 치주질환의 활성도와 조산과의 상관관계를 나타내는데 도움을 주었다.
- Table 2는 혐 기 성 세균과 호기 성 세균 그리 고 치주질환의 대표적인 병인균이라고 할 수 있는 세균들에 대해 실험군과 대조군간의 결과를 비교해 본 것이다. 대부분의 세균에 대해 실험군과 대조군간에는 유의 할 만한 차이가 없었으나(p>0.05) 혐기성 세균에 있어서 Any PLBW 실험군이 51.10, All NBW 대조군이 46.48로 통계학적으로 유의한 차이를 나타냈으며 (p<0.05) PLBW 실험군과 대조군에서도 혐기성세균은 다소 차이를 보였다(Figure 3). 다른 세균들에서는 실험군과 대조군이 거의 비슷하거나 오히려 대조군에서 수치가 더 크게 나타나 임상 지수중 치주낭 깊이와 부착상실과는 연관성 을 보이지 않았다.
- 본 연구에 따르면 조산한 산모들에서 혐 기성 세균만 약간 더 많았을 뿐 다른 세균들의 수는 전혀 차이가 없었다. 이러한 결과는 앞서 나온 임상 결과와는 다른 양상을 띠고 있는데 그 원인을 생각해 보면, 먼저 paper point로 세균을 채취할 때 타액에 오염될 가능성이 매우 크고, 또 현미경으로 관찰할 때 어떤 부위를 관찰하느냐에 따른 변이가 너무 커서 안정성이 없고, 마지막으로 임상지수를 통해서 본 전체 산모들의 치주상태가 진행된 치주염의 단계가 아니 었기 때문에 세균학적 구성의 변화가 그리 크지 않았음을 예측할 수 있었다.
후속연구
- 본 실험에서는 치은 열구액양의 측정에 그쳤지만 계속되는 연구에서는 cytokine 측정이 필요하리라고 생각된다.
- 향후 치은 열구액 내의 cytokine 측정을 포함한 치주질환의 활성도 조사와 함께 분만 전의 양수검사를 통한 cytokine 농도를 측정하여 치주질환과 조산과의 관계를 더욱 분명 히 규명 할 수 있는 세 심한 연구가 필요하리라 생각된다.
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