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제안 방법
- 고정된 조직은 paraffin 포매후 3~5pm의 절편을' 제작하고 각 부위를 확인하기 위하여 hematoxylin-eosin 염색을 실시하였다.
- 그러나 현재까지 어류의 소화기계에 있어서 S-100 protein 면역반응세포에 관한 연구는 찾아볼 수 없는 바, 본 연구에서는 메기의 소화관에 있어서 면역조직화학적방법으로 S-100 protein 면역반응세포의 부위 별 분포 및출현빈도를 관찰하였다.
- 면역조직화학적 검색을 위하여 조직절편을 탈paraffin 한 후, 100% methanol 과 0.1% H2O2 phosphate buffered saline(PBS, 0.01M, pH 7, 3)에 각각 30분씩 침적하고 PBS 로 10분씩 3회 세척하였다. 이어 조직내 비특이적 반응을 차단하기 위해 normal goat serum으로 실온에서 1시 간처 리후 peroxidase anti-peroxidase(PAP)법17에 의해 1차 항혈 청 (S-100 protein, BioGenex, PU0580695, 1: 25)으로 4℃ 냉장고에서 24시간 반응시 킨 후 PBS로 10분씩 3회 세척하였다.
- 이후 2차 항체 인 anti-rabbit IgG goat seruin(l: 100)으로 실온에서 1시간 반응시킨 후 PBS로 10분씩 3회 세척하였다. 이어 PAP complex(Sigma, USA)로 실온에서 1시간 반웅시 킨 후 DAB(3, 3-diaminobenzidine containing 0.01% H2O2 in HC1 buffer)로 발색시켰으며 Mayefs hematoxylin으로 핵염색을 실시하여 광학현미경으로 관찰하였다. 대조군은 1차 항체인 S-100 protein 대신 에 normal goat serum으로 반응시 켰 다.
대상 데이터
- 시중에서 구입한 5마리의 메기에서 위와 장의 상부, 중간부 및 하부의 각 조직을 절취하여 Bouin 액에 고정하였다. 고정된 조직은 paraffin 포매후 3~5pm의 절편을' 제작하고 각 부위를 확인하기 위하여 hematoxylin-eosin 염색을 실시하였다.
이론/모형
- 01M, pH 7, 3)에 각각 30분씩 침적하고 PBS 로 10분씩 3회 세척하였다. 이어 조직내 비특이적 반응을 차단하기 위해 normal goat serum으로 실온에서 1시 간처 리후 peroxidase anti-peroxidase(PAP)법17에 의해 1차 항혈 청 (S-100 protein, BioGenex, PU0580695, 1: 25)으로 4℃ 냉장고에서 24시간 반응시 킨 후 PBS로 10분씩 3회 세척하였다. 이후 2차 항체 인 anti-rabbit IgG goat seruin(l: 100)으로 실온에서 1시간 반응시킨 후 PBS로 10분씩 3회 세척하였다.
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