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문제 정의
- 분배추출함으로써 얻어지는데, 이 과정에서 70% methanol 추출물 중에 포함되어 있던 다량의 유리당 중 상당량이 n-butanol 층으로 넘어오게 되며 이것이 조사포닌 중 순수 사포닌 함량을 낮추는 한 요인이 된다. 따라서 본 연구에서는 유리당 유입을 줄이기 위한 방법으로 BuOH법 이외에 HP-20법, AG 50W법 등을 이용하여 조사포닌을 분리하고 각각의 유리당 함량을 TLC 및 HPLC로 비교 확인하였다. 유리당 분석시료의 TLC 결과는 Fig.
제안 방법
- 본 연구에서는 인삼 사포닌의 분리 방법으로서 시료를 methanol로 환류 추출한 후 "-butanol로 분획 추출하거나, methanol로 환류 추출 후 Diaion HP-20 수지에 흡착시킨 후 methanol로 용출하는 기존의 방법 외에 고온추출에 따른 사포닌의 화학적 변화를 막거나 사포닌의 순도를 높이거나 또는 추출단계를 줄이기 위한 세 가지 새로운 방법 즉, 상온에서 methanol로 추출한 후 Diaion HP-20 수지에 흡착시켜 methanol로 용출하는 방법, methanol 추출 후 양이온교환수지 AG 50W 흡착시켜 물로 용출하고 n-butanol로 분획분리하는 방법, ethyl acetate와 n-butanol로 직접 주출하는 방법등 5가지 방법에 의해 조사포닌을 분리하고, 이들의 ginseno-side 함량 및 화학성분 조성을 비교하였다.
- 물층은 다시 200 mL의 n-butanol로 2회 반복 추출하였다. 3회에 걸쳐 추출한 n-butanol 층은 모두 합쳐 증류수 200 mL로 세척 후 약 900 mL의 butanol 층을 취하여 진공농축한 다음 무게를 측정하고 조사포닌 시료로 사용하였다(Fig. 1, Method A).
- EtOAc/n-BuOH 직접추출에 의한 분리: 인삼분말 시료 50 g에 물을 포화시킨 ethyl acetate/w-butanol(4 : 1) 용매 300 mL을 가하고 8WC에서 2시간씩 2회 환류 추출한 추출액을 여과한 후 진공농축하고 무게를 측정한 다음 조사포닌 분석시료로 사용하였다. 이상의 5가지 방법으로 분리한 각 조사포닌의 중량을 각 방법에 따른 인삼분말 중 조사포닌의 함량 (%)으로 나타내었다.
- 고온 MeOH 추출/n-BuOH 분획에 의한 분리: 한국산 홍삼과 백삼 분말(80 mesh)을 100 g씩 취하여 70% methanol 900 mL로 80℃에서 3회 반복 환류 추출하였다. 추출액은 60℃에서 감압농축기로 농축하여 용액이 100 mL될 때까지 meth-anol을 제거한 후 여기에 물을 가하여 200mL로 정용하였다.
- 6 mL이었다. 분리한 조사포닌 1 mg을 1 mL의 50% metha-nol에 용해하고 0.45 ㎛ nylon syringe filter(Waters)로 여과하여 NH2 column(Φ4.6×250mm)에 주입한 후 분리되는 각 ginsenoside 피크면적을 표준품의 면적과 비교하여 함량을 계산하였다.
- 분해장치의 온도를 서서히 올려 흰 연기가 나기 시작하여 파란색이 될 때까지 분해하였다. 분해된 시료는 실온으로 냉각시켜 증류되어 나오는 암모니아를 3% H3BO3 40mL에 흡수시킨 후 이를 0.1 N HCI 용액으로 적정하여 다음과 같은 식으로 총질소함량(%)을 구하였다.
- 상온 MeOH 추출/Diaion HP-20 흡착/MeOH 용출에 의한 분리: 인삼분말 시료 100 g에 70% methanol 300 mL를 넣고실온에서 24시간 진탕시켜 3회 반복 추출하였다. 추출물은40℃ 이하에서 진공농축하여 methan아을 제거하고 Diaion HP-20(Φ2.
- 아미노산의 TLC 분석: 총아미노산 및 유리아미노산의 시료를 최종 100μL로 하여 silica gel TLC plate에 5μL씩 점적하였다. 전개용매는 CHCI3/CH3OH/7N NH4OH(4 :4 :1)를 사용하였으며(17) 1% ninhydrin/ethanol을 분무하여 110℃에서 10분간 발색하였다.
- 5 N NH4OH 5 mL로 용출하여 감압농축 후 최종 100μL로 조정하여 총아미노산 분석시료로 사용하였다. 유리 아미노산의 경우는 조사포닌 시료 200 mg을 물 에 용해시킨 후 양이온교환수지 AG 50W를 이용하여 총아 미노산 시료조제 방법과 동일한 방법으로 조제하였다.
- 유리당 분석을 위한 시료 전처리: 조사포닌 시료 각 10 mg을 증류수 1 mL에 용해시켜 C18 Sep-Pak(Waters)에 통과시 킨 후 2mL의 증류수를 통과시켜 질소 기류하에서 최종 1 mL로 하여 TLC, HPLC 분석 시료로 사용하였다
- 유리딩의 HPLC 분석 : 유리당 시료를 0.45 ㎛ membrane filter로 여과 후 HPLC로 유리당을 분석하였다. Column은 NH2(Φ4.
- 인삼분말로부터 추출 용매의 종류와 온도, 흡착수지의 종 류 등을 달리한 다섯 가지 방법, 즉 이미 알려진 방법인 고온 MeOH 추출/n-BuOH 분획법 (BuOH법)과 고온 MeOH 추 출/Diaion HP-20 흡착/MeOH 용출법 (HP-20법) 그리고 본 실험에서 새로이 시도된 방법으로 고온 MeOH 추출/cation AG 50W 흡착/H2O 용출/n-BuOH 추출법 (AG 50W법), 상온 MeOH 추출/Diaion HP-20 흡착/MeOH 용출법(상온추출법)과 EtOAc/n-BuOH 직접 추출법으로 분리한 조사포닌의 함량을 비교한 결과는 Table 1과 같다. AG 50W법의 경우 조사포닌 의 함량이 4.
- 인삼사포닌의 분획분리 방법으로서 일반적인 고온 MeOH/n-BuOH추출법 (BuOH법) 및 고온 MeOH/Diaion HP-20법 (HP-20법) 이외에도 새로운 3가지 방법, 즉 고온 MeOH 추출/cation AG 50W 흡착/HQ 용출/*BuOH 추출법(AG 50W법), 상온 MeOH/Diaion HP-20법(상온추출법), EtOAc/n-BuOH 직접 추출법으로 조사포닌을 분리하였다. AG 50W법에 의한 조사포닌 중 총 ginsenoside 함량은 61.
- 인삼의 약리활성 성분인 사포닌 성분의 추출분획 중 gin-senoside 함량을 높이거나 화학적 성분 변화를 줄이거나 또는 추출과정을 간편화하기 위한 새로운 추출 분획 방법을 정립하고 기존의 방법과 화학적 조성을 비교하였다. 인삼사포닌의 분획분리 방법으로서 일반적인 고온 MeOH/n-BuOH추출법 (BuOH법) 및 고온 MeOH/Diaion HP-20법 (HP-20법) 이외에도 새로운 3가지 방법, 즉 고온 MeOH 추출/cation AG 50W 흡착/HQ 용출/*BuOH 추출법(AG 50W법), 상온 MeOH/Diaion HP-20법(상온추출법), EtOAc/n-BuOH 직접 추출법으로 조사포닌을 분리하였다.
- 총 phenol의 비색정량: 조사포닌 시료 1 mg을 증류수 1 mL에 용해시킨 후 Folin-Ciocalteu 시약 2mL과 Na2CO3 7 mL를 넣은 다음 상온에서 2시간 방치한 후 765nm에서 흡 광도를 측정하였다. 표준물질로는 gallic acid를 사용하였으며 총 phenol 물질의 양은 gallic acid equivalent[GAE mg/L (W/V)]로 나타내었다.
- 페놀계 화합물의 TLC 분석: 조사포닌 100 mg을 증류수 10mL에 용해시킨 다음 ethyl acetate를 10mL씩 2회 가하여 추출한 다음 유기용매층에 1 N NaOH 10mL를 가하여 산성 성분을 추출하였다. 이 알칼리층은 pH 3.
- 5×35 cm)에 흡착시켰다(16). 흡착 후 증류수(500 mL)로 수지를 충분히 세척한 다음 90% methanol(300 mL)로 용출하고 진공농축기로 농축한 다음 무게를 측정하고 조사포닌으로 사용하였다(Fig. 1, Method B).
대상 데이터
- 5×35cm) 수지에 흡착시킨 후 30% methanol로 수지를 세척하고 90% methanol 500 mL로 용출하였다. 90% methanol 분획을 40℃ 이하에서 진공농죽하여 methanol을 제거한 후 냉동 건조(-45℃, 10mmHg)한 다음 무게를 측정하고 조사포닌 시료로 사용하였다.
- 45 ㎛ membrane filter로 여과 후 HPLC로 유리당을 분석하였다. Column은 NH2(Φ4.6×250 mm), flow rate는 1.2mL/min, mobile phase 는 CH3CN : H2O(17 : 3),(21) detector는 ELSD(Evaporative Lights Cattering Detector)를 사용하였다.
- Ginsenoside 표준품은 한국인 삼연초연구원 품질 검증실에서 분리한 Rb[ 등 11종을 사용하였고 methanol, n-butanol 등주줄용매는 일급 또는 특급 시약을 사용하였다. ferulic acid 등 페놀성 표준물질은 미국 Sigma사 제품을, 다공성 흡착수지 Diaion HP-20은 일본 Mitsubishi Kasei사 제품을 사용하였다.
- Ginsenoside: 조사포닌 중 개별 ginsenoside는 HPLC(미국 Waters Model 244)를 사용하여 정량하였는데, 사용한 column은 YMC-Pack NH2(Φ4.6mm×250), 전개용매는 CH3CN/H2O/ n-BuOH(8 : 2 : 1), 검출기는 RI(Refractive Index), flow rate는 1.6 mL이었다. 분리한 조사포닌 1 mg을 1 mL의 50% metha-nol에 용해하고 0.
- 5 g을 취하여 분해 촉매제 5 g을 넣고 시료의 20% 정도가 되게 cone. H2SO2를 첨가하였다. 분해장치의 온도를 서서히 올려 흰 연기가 나기 시작하여 파란색이 될 때까지 분해하였다.
- 일급 또는 특급 시약을 사용하였다. ferulic acid 등 페놀성 표준물질은 미국 Sigma사 제품을, 다공성 흡착수지 Diaion HP-20은 일본 Mitsubishi Kasei사 제품을 사용하였다. 양이온교환수지 (Cation AG 50W, 200-400 mesh)는 미국 BIO-RAD사 제품을, TLC plate는 silica gel 60F254 precoated aluminum sheet(두께 0.
- 물층은 n-butanol 300 mL로 3회 반복 추출하였다. n-Butanol층 900 mL를 진공농축한 다음 무게를 측정하고 조사포닌 시료로 사용하였다(Fig. 1, Method C).
- 본 실험에서 사용한 백삼(4년근)은 금산산 직삼과 반곡삼 20편 및 피부백삼 50편(표피가 부착됨)을 시중에서 구입하였고 홍삼은 한국담배인삼공사에서 제조한 양삼 30지를 사용하였다.
- 5mL를 넣고 10(TC에서 30분간 반응시킨 다음 질소 기류 하에서 건조시 킨 후 TFAA(trifluoroacetic anhydride) 200 μL를 넣고, 140℃에서 10분간 반응시킨 다음 질소 기류하에 건조시킨 후 acetone 200μL로 정용하였다. 사용한 GC 기종은 미국 Hewlett Packard 5890, column은 fused silica capillaiy SPB1(0.25 mm i.d.×30m, 0.25 mm thickness)을 사용하였고, 온도 는 80℃에서 5분간 유지한 후 분당 5℃의 비율로 280℃까지 승온시켰다.
- ferulic acid 등 페놀성 표준물질은 미국 Sigma사 제품을, 다공성 흡착수지 Diaion HP-20은 일본 Mitsubishi Kasei사 제품을 사용하였다. 양이온교환수지 (Cation AG 50W, 200-400 mesh)는 미국 BIO-RAD사 제품을, TLC plate는 silica gel 60F254 precoated aluminum sheet(두께 0.2 mm, 20 cm X 20 cm)로서 독일 Merck사 제품을 사용하였다.
- 아미노산의 TLC 분석: 총아미노산 및 유리아미노산의 시료를 최종 100μL로 하여 silica gel TLC plate에 5μL씩 점적하였다. 전개용매는 CHCI3/CH3OH/7N NH4OH(4 :4 :1)를 사용하였으며(17) 1% ninhydrin/ethanol을 분무하여 110℃에서 10분간 발색하였다.
- 유리당의 TLC 분석: 유리당 시료를 silica gel TLC plate 에 15 μL씩 점 적 하였다. 전개용매로는 n-BuOH/CH3COOH/ ethyl ether/H2O : 6 : 3 : 1)를 사용하였으며(20) 발색시 약은 anaphthol을 분무한 후 110℃에서 10분간 가열하여 발색하였다.
- 0으로 조절 후 ethyl acetate 5mL를 넣고 세차게 흔든 다음 ethyl acetate층을 분획하여 질소 기류하에 날린 후 최종 200 μL로 하여 silica gelTLC plate에 10 μL씩 점적하였다. 전개용매로는 toluene/ethyl acetate/HCOOH(5 :4 : 1)를 사용하였으며, 발색시 약은 FolinCiocalteu 시약(Sigma)을 사용하였다.
- 3333px;">3 7 mL를 넣은 다음 상온에서 2시간 방치한 후 765nm에서 흡 광도를 측정하였다. 표준물질로는 gallic acid를 사용하였으며 총 phenol 물질의 양은 gallic acid equivalent[GAE mg/L (W/V)]로 나타내었다.
이론/모형
- 아미노산의 GC 분석: 총아미노산 및 유리아미노산 시료를 Islam과 DarbreS(18)의 방법 및 Knapp(19)의 방법에 따라 질소 기류하에서 건조시킨 후 3N HCI/MeOH 0.5mL를 넣고 10(TC에서 30분간 반응시킨 다음 질소 기류 하에서 건조시 킨 후 TFAA(trifluoroacetic anhydride) 200 μL를 넣고, 140℃에서 10분간 반응시킨 다음 질소 기류하에 건조시킨 후 acetone 200μL로 정용하였다. 사용한 GC 기종은 미국 Hewlett Packard 5890, column은 fused silica capillaiy SPB1(0.
- 총질소: 조사포닌 중 총질소 분석은 Auto Kjeldahl System (Buchi 339)을 사용하여 실시하였다. 조사포닌 시료 0.
성능/효과
- 인삼사포닌의 분획분리 방법으로서 일반적인 고온 MeOH/n-BuOH추출법 (BuOH법) 및 고온 MeOH/Diaion HP-20법 (HP-20법) 이외에도 새로운 3가지 방법, 즉 고온 MeOH 추출/cation AG 50W 흡착/HQ 용출/*BuOH 추출법(AG 50W법), 상온 MeOH/Diaion HP-20법(상온추출법), EtOAc/n-BuOH 직접 추출법으로 조사포닌을 분리하였다. AG 50W법에 의한 조사포닌 중 총 ginsenoside 함량은 61.5%로 가장 높았으며 반대로 단백질과 유리 아미노산 함량은 각각 0.93과 0.19%로 다른 방법에 비해 현저히 낮게 나타났다. 단백질의 함량은 HP-20법 에 의한 분리가 14.
- O 용출/n-BuOH 추출법 (AG 50W법), 상온 MeOH 추출/Diaion HP-20 흡착/MeOH 용출법(상온추출법)과 EtOAc/n-BuOH 직접 추출법으로 분리한 조사포닌의 함량을 비교한 결과는 Table 1과 같다. AG 50W법의 경우 조사포닌 의 함량이 4.2%로서 5가지 실험방법 중 가장 높았으며 EtOAc/n-BuOH 직접 추출의 경우는 1.7%로 가장 낮은 것을 알 수 있는데, 이는 이 혼합 용매의 극성이 n-butamol에 비해 상대적으로 낮은 데서 오는 예상된 결과이다. 인삼 사포닌은 종류에 따라 결합된 당의 수가 다른데, ginsenoside Ra1 등은 5개, ginsenoside Rb1, Rc 등은 4개, ginsenoside Rg1 등은 2개, ginsenoside Rh1 등은 1개로서 이에 따라 극성이 크게 다 르다.
- 4와 같이 나타났다. BuOH법으로 분리된 조사포닌 중에는 다량의 sucrose가 존재함을 알 수 있었으나 HP-20법, 상온추출법 그리고 AG 50W법으로 분리된 조사포닌 중에는 유리당이 많이 제거됨을 알 수 있었다. 이러한 결과는 추출방법에 따라 조사포닌 중 유리당 함량이 현저한 차이가 있음을 시사한다.
- 방법임을 알 수 있었다. EtOAc/n-BuOH 직접추출에 의한 조사포닌 중에는 페놀계 화합물이 거의 없는 것으로 나타났다 (Fig. 5).
- AG 50W법으로 분리된 조사포닌은 ginsenoside Rg1 이상에서 prosapogenin으로 추정되는 spot이 많이 생성됨을 볼 수 있는데, 이들은 강산성의 양이온교환수지 AG 50W 칼럼을 통과하는 과정에서 Rb1, Rb2 Rc, Rd 및 Rg1의 비당부의 위치의 당이 떨어져 생성된 것으로 추정된다. EtOAc/n-BuOH 직접추출에 의한 조사포닌은 다른 조사포닌과는 대조적으로 ginsenoside Rh1, Rgl 및 Re 등의 발색강도가 상대적으로 높게 나타나는 것으로 보아 이 방법에 의해 당이 1~3개 결합된 저극성 사포닌이 주로 추출되었음을 알 수 있었다. 이상의 결과에서 살펴보았듯이 malonyl ginsenoside, prosapogenin, ginsenoside Re 또는 Rg1 등 실험 목적에 따라 원하는 사포닌을 상대적으로 많이 얻을 수 있는 추출방법을 사용할 수 있음을 알 수 있다.
- 54%로 사포닌 중 조단백질 함량이 매우 낮았다. EtOAc/n-BuOH 추출의 경우 Table 1에서 볼 수 있듯이 사포닌의 추출율 자체가 낮으므로 방법간 상호비교에서 제외한다면, 4가지 방법 증 AG 50W법으로 분리한 조사포닌 수득율이 4.2%로 가장 높으면서도 단백질 함량은 가장 낮게 나타나는 것으로 보아 이 방법이 단백질을 비롯한 함질소 화합물의 혼입을 가장 줄일 수 있는 방법임을 알 수 있다.
- 5%와 유사한 비율을 나타내었다. EtOAc/n-BuOH로 직접 추출한 조사포닌의 경우는 24.7%로서 사포닌 이외의 지질로 추정되는 물질이 많이 함유되어 있음을 알 수 있었다 (Table 2).
- 3%로서 대부분의 유리당은 sucrose라고 하였는데, 상당량의 sucrose가 수포화 n-butaimol로 분배 추출시 사포닌과 함께 추출되어 조사포닌 분획으로 이행됨을 알 수 있었다. HP-20법으로 분리된 조사포닌에서는 sucrose의 피크가 거의 나타나지 않는 것으로 보아 다공성 흡착수지인 Diaion HP-20은 유리당과 사포닌을 분리할 수 있는 좋은 흡착제임을 알 수 있었다.
- TLC에 나타난 결과를 확인하기 위하여 조사포닌으로부터 유리당 시료를 조제하여 HPLC한 결과 BuOH법으로 분리한 조사포닌에서만 sucrose 피크가 현저하게 나타나 TLC에서 나타난 spot이 sucrose임을 알 수 있었다. 함량을 계산한 결과는 Table 5와 같다.
- 각 조사포닌 중 총phenol 함량을 비색정량한 결과는 Table 6과 같은데, HP-20법으로 분리된 조사포닌 중 총 페놀함량이 2.2%로서 가장 높은 것을 알 수 있었다. 이러한 결과는 TLC에서 나타난 결과와도 일치하는 경향이었다.
- 19%로 다른 방법에 비해 현저히 낮게 나타났다. 단백질의 함량은 HP-20법 에 의한 분리가 14.18%로 가장 높았고, 유리당은 BuOH법이 13.5%로서 HP-20법 및 AG 50W법에 비해 20~40배 높은 것으로 나타나 유리당이 BuOH법에 의한 조사포닌 중 순수사포닌 함유 비율을 낮추는 한 요인임을 알 수 있다. 한편, 본 연구에서 새로이 정립한 AG 50W법의 경우 prosapogenin의 생성이 많았다.
- 그러나 본 연구에서는 arginine은 HP- 20법으로 분리한 조사포닌 중에서만 존재하였다. 따라서 인삼 분말이나 수삼 중에 존재하는 총아미노산과 인삼분말로부터 추출된 조사포닌 중의 총아미노산과는 조성과 비율이 많이 다른 것을 알 수 있었다. 또한 조사포닌의 추출방법에 따라 조사포닌 중의 총아미노산의 조성이 다른 것을 알 수 있었다.
- 위에서 TLC 분석에 사용한 시료중 일부를 취하여 조사포닌 중 총아미노산 및 유리 아미노산을 GC로 정량한 결과 Table 4와 같이 총아미노산함량은 HP-20법으로 분리한 조사포닌이 7.35%, BuOH법 조사포닌이 5.17%, 상온추출법 조사포닌이 1.42%, AG 50W법 조사포닌이 0.59%의 순서로 나타났으며 이러한 결과는 HP-20법으로 분리한 조사포닌 중에 조단백질의 함량이 가장 높게 나타난 결과와 일치한다. 인삼의 아미노산은 인삼 분말 또는 수삼을 시료로 사용하여 분석하는 경우가 대부분이며 그 분석값을 보면 본 연구에서 와같이 조사포닌 중에서 측정한 결과와는 많은 차이가 있음을 알 수 있었다.
- 유리아미노산은 BuOH법, HP-20법, AG 50W법 그리고 상온추출법으로 분리한 조사포닌에서 각각 1.87%, 3.15%, 0.19%, 0.59%로 나타난 바와 같이 BuOH법으로 분리한 조사포닌 중 가장 높은 것을 볼 수 있었으며 이것은 TLC 결과와 일치하는 경향이었다. 유리아미노산의 경우 alanine은 AG-50W법으로 분리한 조사포닌에서만 검출되었으며 HP-20 법으로 분리한 조사포닌에서는 valine이 0.
- 59%로 나타난 바와 같이 BuOH법으로 분리한 조사포닌 중 가장 높은 것을 볼 수 있었으며 이것은 TLC 결과와 일치하는 경향이었다. 유리아미노산의 경우 alanine은 AG-50W법으로 분리한 조사포닌에서만 검출되었으며 HP-20 법으로 분리한 조사포닌에서는 valine이 0.16%로서 다른 조사포닌에서 검출되지 않았으나 HP-20법으로 분리한 조사포닌에서만 특징적으로 나타났고 phenylalanine도 1.70%로서 다른 조사포닌에 비해 매우 높은 함량을 나타내었다. 그 밖에 BuOH법으로 분리한 조사포닌에서만 aspartic acid가 0.
- 사용하였다. 이상의 5가지 방법으로 분리한 각 조사포닌의 중량을 각 방법에 따른 인삼분말 중 조사포닌의 함량 (%)으로 나타내었다.
- EtOAc/n-BuOH 직접추출에 의한 조사포닌은 다른 조사포닌과는 대조적으로 ginsenoside Rh1, Rgl 및 Re 등의 발색강도가 상대적으로 높게 나타나는 것으로 보아 이 방법에 의해 당이 1~3개 결합된 저극성 사포닌이 주로 추출되었음을 알 수 있었다. 이상의 결과에서 살펴보았듯이 malonyl ginsenoside, prosapogenin, ginsenoside Re 또는 Rg1 등 실험 목적에 따라 원하는 사포닌을 상대적으로 많이 얻을 수 있는 추출방법을 사용할 수 있음을 알 수 있다. 각 조사포닌 중 ginsenoside 함량을 정량한 후 각 ginsenoside가 차지하는 비율을 계산한 결과는 Table 2와 같다.
- 조단백질 및 아미노산: 다섯가지 방법으로 분리한 조사포닌 중에 존재하는 조단백질 함량을 측정한 결과 Table 3에 나타난 바와 같이 HP-20법에 따라 얻은 조사포닌 중에 14.18%로 현저하게 높았으며, AG 50W법의 경우 0.93%, EtOAc/w-BuOH 직접추출 조사포닌은 0.54%로 사포닌 중 조단백질 함량이 매우 낮았다. EtOAc/n-BuOH 추출의 경우 Table 1에서 볼 수 있듯이 사포닌의 추출율 자체가 낮으므로 방법간 상호비교에서 제외한다면, 4가지 방법 증 AG 50W법으로 분리한 조사포닌 수득율이 4.
- 각 조사포닌 중 ginsenoside 함량을 정량한 후 각 ginsenoside가 차지하는 비율을 계산한 결과는 Table 2와 같다. 조사포닌 중 총 ginsenoside의 비율은 AG 50W법으로 분리하였을 때 61.5%로서 가장 높았으며, 상법인 BuOH 법과 HP-20법의 경우 각각 52.3과 54.9%로서 상온추출법의 경우 55.5%와 유사한 비율을 나타내었다. EtOAc/n-BuOH로 직접 추출한 조사포닌의 경우는 24.
- 페놀계 화합물: 다섯가지 방법으로 분리된 조사포닌으로부터 페놀계 화합물을 추출하여 TLC한 결과, 발색강도로 보아 BuOH법, HP-20법 그리고 상온추출법으로 분리한 조사포닌은 거의 비슷한 정도의 페놀계 화합물을 함유하는 것으로 나타났으나 AG 50W법으로 분리된 조사포닌 중에는 페놀계 화합물이 상당히 감소되는 것으로 나타나 강산성의 양이온 교환수지 사용이 조사포닌 중 페놀계 화합물을 줄일 수 있는 좋은 방법임을 알 수 있었다. EtOAc/n-BuOH 직접추출에 의한 조사포닌 중에는 페놀계 화합물이 거의 없는 것으로 나타났다 (Fig.
- 5%로서 HP-20법 및 AG 50W법에 비해 20~40배 높은 것으로 나타나 유리당이 BuOH법에 의한 조사포닌 중 순수사포닌 함유 비율을 낮추는 한 요인임을 알 수 있다. 한편, 본 연구에서 새로이 정립한 AG 50W법의 경우 prosapogenin의 생성이 많았다. 그 밖에, 사포닌 분석시료의 신속한 조제를 위하여 추출과정을 단축하여 EtOAc/n-BuOH 혼합용매로 직접 환류추출할 경우, ginsenoside Rg1과 Re의 조성이 높게 나타났다.
후속연구
- 그 밖에, 사포닌 분석시료의 신속한 조제를 위하여 추출과정을 단축하여 EtOAc/n-BuOH 혼합용매로 직접 환류추출할 경우, ginsenoside Rg1과 Re의 조성이 높게 나타났다. 본 연구 결과는 조사포닌의 조제 방법에 따라 ginsenoside, 유리당 및 조단백질 등 화학성분의 조성이 현저히 다르며 실험목적에 따라 적절한 방법이 이용될 수 있음을 시 사한다.
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