Ganoderma lucium IY009 유래 단백다당류의 분자량 차이에 따른 면역증강활성 Immunomodulatory Activities by Difference in Molecular Size of the Proteoglycan Extracted from Ganoderma lucidum IY009원문보기
본 연구는 Ganoderma lucidum IY009 유래 단백다당류의 분자량 차이에 따른 면역증강활성을 조사하였다. 이것의 분자량은 12kD와 2,000kD의 분자량 분포를 지닌 단백다당류이며, 이 둘 중 어느 분획이 주 약리활성을 나타내는지 규명하기 위해, ultrafiltration 및 column chromatography를 실시하여 고분자 및 저분자 분획으로 분획화를 실시하여 이들에 대한 약리활성을 조사하였다. 항보체 활성화 정도는 항암 활성이 높았던 GMPG-CH 분획에서 가장 높은 393%의 활성능을 보였으며. 고분자 분획이 저분자 분획보다 높은 항보체 활성을 나타내어 단백다당류의 항보체 활성은 항암 활성과 어떠한 관계가 있는 것으로 추정된다. 대식세포에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Raw 264.7 세포에 고분자 및 저분자 분획을 첨가하고 nitric oxide 생성 능을 측정한 결과, ${\beta}$-결합 당의 함량이 높은 고분자 분획이 대식세포에 대한 NO 생성능이 높게 나타나는 것을 알 수 있었으며, 대식세포의 활성화 인자인 $IFN-{\gamma}$의 병용 첨가시에는 $IFN-{\gamma}$ 단독 첨가시 보다 약 $5{\sim}26{\mu}M$의 nitric oxide 생성을 증가시키는 것을 알 수 있었다. 종양세포의 괴사 및 NK 세포의 활성화에 관여하는 것으로 알려진 $TNF-{\alpha}$의 생성을 알아본 결과, 고분자 분획인 GMPG-UH와 GMPG-CH는 각각 $3,068.0{\rho}g/ml$과 $2,975.3 {\rho}g/ml$였고, 저분자에서는 GMPG-UL과 GMPG-CL은 각각 $1,400{\rho}g/ml$를 생성하는 것으로 조사되었다.m}0.25\;Oe$로 전형적인 연자성 재료의 범위로 나타났다. 초투자율, 손실계수, 및 큐리온도는 각각 $2,948{\sim}2,997,\;171{\sim}208,\;191{\sim}202^{\circ}C$로 나타나 Ni-Zn ferrite에서 측정되는 값들과 대동소이했다. 물리적인 특성값(고유저항, 자기유도, 초투자율, 손실계수, 큐리온도 등)으로 미루어보아 각종 microwave 통신기기 core 및 고 투자율 deflection yoke core 등으로 사용이 가능하다.의 쐐기를 사용할 때 MU값이 크다. 결론: 수집된 광자선 빔 데이터를 분석하여 빔데이터의 정확성과 치료계획용 시스템의 계산 정확성을 대략적으로 점검 할 수 있는 기준 값을 제시하였다.동결이 요구되며 본 연구에서 이용된 OPS 동결 방법이 폭넓게 활용될 것으로 사료된다.며 이 때가 최상의 교배 적기로 사료되며, 혈장 progesterone농도가 4.0 ng/ml 이상으로 증가한 날(Bay 0)을 기준으로 하였을 때부터 CI는 혈장 estradiol-$17{\beta}$ peak 후 1일째인 최고치를 나타내었고, CI peak 후 1일째인 Day 0에 혈장 progesterone 농도가 최초로 4.0 ng/ml 이상으로 증가하여 CI가 90% 이상으로 지속된 시기가 최상의 교배 적기임이 확인되었다. 따라서 혈장 progesterone농도 측정으로 정확한 배란 시기 및 교배 적기를 판정할 수 있으나, 시설비가 저렴하고 검사 방법이 간단한 질 세포 검사가 Shih-tzu 견에서 발정 주기, 교배 적기 및 배란 시기의 판정에 응용될 수 있음을 시사하는 결과라고 사료된다.골계가 높은 경향을 보였다. 3) Fe의 함량은 백봉오골계와 연산오골계 모두 다리살이 가슴살보다 더 높았으며, 다리살 중의 Fe 함량을 비교해 보았을 때 백봉오골계가 3.9
본 연구는 Ganoderma lucidum IY009 유래 단백다당류의 분자량 차이에 따른 면역증강활성을 조사하였다. 이것의 분자량은 12kD와 2,000kD의 분자량 분포를 지닌 단백다당류이며, 이 둘 중 어느 분획이 주 약리활성을 나타내는지 규명하기 위해, ultrafiltration 및 column chromatography를 실시하여 고분자 및 저분자 분획으로 분획화를 실시하여 이들에 대한 약리활성을 조사하였다. 항보체 활성화 정도는 항암 활성이 높았던 GMPG-CH 분획에서 가장 높은 393%의 활성능을 보였으며. 고분자 분획이 저분자 분획보다 높은 항보체 활성을 나타내어 단백다당류의 항보체 활성은 항암 활성과 어떠한 관계가 있는 것으로 추정된다. 대식세포에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Raw 264.7 세포에 고분자 및 저분자 분획을 첨가하고 nitric oxide 생성 능을 측정한 결과, ${\beta}$-결합 당의 함량이 높은 고분자 분획이 대식세포에 대한 NO 생성능이 높게 나타나는 것을 알 수 있었으며, 대식세포의 활성화 인자인 $IFN-{\gamma}$의 병용 첨가시에는 $IFN-{\gamma}$ 단독 첨가시 보다 약 $5{\sim}26{\mu}M$의 nitric oxide 생성을 증가시키는 것을 알 수 있었다. 종양세포의 괴사 및 NK 세포의 활성화에 관여하는 것으로 알려진 $TNF-{\alpha}$의 생성을 알아본 결과, 고분자 분획인 GMPG-UH와 GMPG-CH는 각각 $3,068.0{\rho}g/ml$과 $2,975.3 {\rho}g/ml$였고, 저분자에서는 GMPG-UL과 GMPG-CL은 각각 $1,400{\rho}g/ml$를 생성하는 것으로 조사되었다.m}0.25\;Oe$로 전형적인 연자성 재료의 범위로 나타났다. 초투자율, 손실계수, 및 큐리온도는 각각 $2,948{\sim}2,997,\;171{\sim}208,\;191{\sim}202^{\circ}C$로 나타나 Ni-Zn ferrite에서 측정되는 값들과 대동소이했다. 물리적인 특성값(고유저항, 자기유도, 초투자율, 손실계수, 큐리온도 등)으로 미루어보아 각종 microwave 통신기기 core 및 고 투자율 deflection yoke core 등으로 사용이 가능하다.의 쐐기를 사용할 때 MU값이 크다. 결론: 수집된 광자선 빔 데이터를 분석하여 빔데이터의 정확성과 치료계획용 시스템의 계산 정확성을 대략적으로 점검 할 수 있는 기준 값을 제시하였다.동결이 요구되며 본 연구에서 이용된 OPS 동결 방법이 폭넓게 활용될 것으로 사료된다.며 이 때가 최상의 교배 적기로 사료되며, 혈장 progesterone농도가 4.0 ng/ml 이상으로 증가한 날(Bay 0)을 기준으로 하였을 때부터 CI는 혈장 estradiol-$17{\beta}$ peak 후 1일째인 최고치를 나타내었고, CI peak 후 1일째인 Day 0에 혈장 progesterone 농도가 최초로 4.0 ng/ml 이상으로 증가하여 CI가 90% 이상으로 지속된 시기가 최상의 교배 적기임이 확인되었다. 따라서 혈장 progesterone농도 측정으로 정확한 배란 시기 및 교배 적기를 판정할 수 있으나, 시설비가 저렴하고 검사 방법이 간단한 질 세포 검사가 Shih-tzu 견에서 발정 주기, 교배 적기 및 배란 시기의 판정에 응용될 수 있음을 시사하는 결과라고 사료된다.골계가 높은 경향을 보였다. 3) Fe의 함량은 백봉오골계와 연산오골계 모두 다리살이 가슴살보다 더 높았으며, 다리살 중의 Fe 함량을 비교해 보았을 때 백봉오골계가 3.9
This study was conducted to investigate the immunomodulatory activities of proteoglycan extracted from cultured mycelia of Ganoderma lucidum IY009. The proteoglycan contained two polymer peaks, one was the higher MW peak of 2,000 kD and the other was low peaks of 12kD. To understand the part of stro...
This study was conducted to investigate the immunomodulatory activities of proteoglycan extracted from cultured mycelia of Ganoderma lucidum IY009. The proteoglycan contained two polymer peaks, one was the higher MW peak of 2,000 kD and the other was low peaks of 12kD. To understand the part of strong pharmaceutical activity between two peak, the proteoglycan was separated by ultrafiltration and column chromatography and then examined the various pharmaceutical effects. High molecular weight fraction possesing high content of ${\beta}-linked$ glucan was exhibited high antitumor activity, against sarcoma 180 bearing ICR mouse. And also, anticomplementary activity was highly observed in high molecule fraction than low it fraction. When the raw 264.7 and murine peritoneal macrophage treated with low fraction, high fraction and other stimuli. The activities inducing tumor necrosis factor of the high factions were $2.2{\sim}2.5$ times stronger than that of low fraction.
This study was conducted to investigate the immunomodulatory activities of proteoglycan extracted from cultured mycelia of Ganoderma lucidum IY009. The proteoglycan contained two polymer peaks, one was the higher MW peak of 2,000 kD and the other was low peaks of 12kD. To understand the part of strong pharmaceutical activity between two peak, the proteoglycan was separated by ultrafiltration and column chromatography and then examined the various pharmaceutical effects. High molecular weight fraction possesing high content of ${\beta}-linked$ glucan was exhibited high antitumor activity, against sarcoma 180 bearing ICR mouse. And also, anticomplementary activity was highly observed in high molecule fraction than low it fraction. When the raw 264.7 and murine peritoneal macrophage treated with low fraction, high fraction and other stimuli. The activities inducing tumor necrosis factor of the high factions were $2.2{\sim}2.5$ times stronger than that of low fraction.
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문제 정의
본 연구는 Ganoderma lucidum IY009 유래 단백다당류의 분자량 차이에 따른 면역증강활성을 조사하였다. 이것의 분자량은 12kD와 2,000 kD의 분자량 분포를 지닌 단백 다당류이며, 이 둘 중 어느 분획이 주 약리활성을 나타내는지 규명하기 위해, ultrafiltration 및 column chromatography를 실시하여 고분자 및 저분자 분획으로 분획화를 실시하여 이들에 대한 약리활성을 조사하였다, 항보체 활성화 정도는 항암 활성이 높았던 GMPG-CH 분획에서 가장 높은 39.
제안 방법
세포를 제거하였다. GMPG, GMPG 고분자, 저분자 분획물 및 대조물질은 각 well에 10㎍/ml농도로 가하여 37℃에서 5% CO2, incubatoi에서, 24시간 동안 배양 한 후, NO를 측정하였다. 대식세포에 의해 생성되는 NO는 Ding 둥(1988)의 방법에 따라 정 량하였다.
Mouse 복강 대식세포의 분리는 10 mi의 Ca2+, Mg2+-free Hanks' balanced salt solution을 복강 내로 주입하고, mouse를 상하 좌우로 가볍게 흔든 다음 주사기를 이용하여 세포를 모아 200xg에서 5분간 원심분리를 2회 반복 실시하였다. 분리된 세포는 DMEM에 부유시켜 petri dish에 분주한 다음 5% CO
HDi)를 이용하여 측정하였다. N02의 농도는 sodium nitrite를 이용하여 얻어진 홉광도로부터 표준 곡선을 작성하여 측정하였다.
대식세포에 의해 생성되는 NO는 Ding 둥(1988)의 방법에 따라 정 량하였다. 간략하면, 100 ㎕의 배양액과 동량의 Griess reagent(l% sulfanilamide, 0.1% naphthylene diamine dihydrochloride, 2.5% H3PO4)를 가하여 실온에서 10분 동안 반뭄시킨 후, 540nm에서 ELISA reader(Bio-Tek instrument, Inc. Ceres UV. HDi)를 이용하여 측정하였다. N02의 농도는 sodium nitrite를 이용하여 얻어진 홉광도로부터 표준 곡선을 작성하여 측정하였다.
같이 측정하였다. 대식세포 배양액에 GMPG, GMPG 고분자, 저분자 분획물 및 대조물질 등을 가하고 24시간 동안 배양한 후, 배양 상층액을 수획하여 원심분리를 하였다. 원심분리를 통해 얻어진 상층액들은 -70℃에서 동결 보관하면서 실험에 이용하였다.
5와 같다. 대식세포로부터 TNF-α 생성 유도 물질인 IFN-y와 LPS 처리시는 각각 4,501.5 pg/ml과 5,600.5 pg/ml, GMPG 처리시는 4,128.3 pg/ml TNF-α 생성하였다. 또한 GMPG- UH와 GMPG-CH 경우는 각각 6.
9 μM로 나타났다. 대식세포의 활성인자인 IFN-J를 GMPG, GMPG 고분자 및 저분자들과 혼합하여 Raw 264.7 세포의 활성화는 IFN-y의 단일 활성인자를 첨가한 Raw 264.7 세포보다 각 단백다당류들을 혼합할 경우 약 5~26μM의 nitric oxide 생성을 증가시켰다. GMPG, GMPG 고분자 및 저분자들의 정상 mouse 복강 대식세포에서 NO 생성능을 측정한 결과는 GMPG는 6.
따라서 본 연구는 면역, 항암활성이 우수한 Ganodenna lucidum 1Y009 균사체의 alkali 추출 단백다당류인 GMPG를 한외여과(ultrafiltration system)와 gel chromatography를 이용하여 고분자와 저분자로 분획화하며 항보체 활성능을 측정하였고, 초기 면역반응에 관여하는 대식세포로부터 nitnc oxide 및 TNF-ct 생성능을 조사하였다,
3333px;">2 , 37℃에서 2사간 동안 배양하였다. 배양 후 상층액의 비부착성 세포를 제거한 후, 10% FCS가 함유된 DMEM 배지를 교환하여 이를 실험 목적에 따라 사용하였다.
보체활성은 Yamada 등(1987)의 방법을 변형하여 측정하였으며, 실험의 정확을 기하기 위하여, complements} hemolysin에 대한 활성 역가를 측정하여 실험에 이용하였다. 항보체 활성은 대조군 대비 총보체 용혈율(50% of total complement hemolysis, TCH50,%)의 저지율(inhibition of TCH50, ITCH50 %)로 나타내었다,
반응 정지 후 실온에서 10분 동안 방치하고 30분 이내에 ELISA reader를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정 하였다. 시료속의 mTNF-α양은 표준 mTNF-α의 농도의 흡광도를 이용하여 얻어진 표준 곡선계로부터 계산하였다.
대상 데이터
생후 8~10 주령으로 무게는 20~25g의 것을 삼육축산으로부터 공급받아 사용하였다. Mouse의 사육 조건으로 실험동물실 온도는 22±2℃, 습도는 55-60%, light cyclee 12시간씩 빛과 밤상태를 유지하였으며, 마우스용 고형 사료와 물을 무제한 공급하였다- Raw 264.7 대식 세포주는 원광대 의대 미생물학 교실에서 분양 받아 사용하였다. Mouse의 복강 대식세포와 Raw 264.
4와 같다. 대조물질로 사용한 IFN-r와 LPS는 각각 15.9 μM과 13.0 μM의 NO를 생성하였다. GMPG는 6.
동물세포 배양을 위한 배지로서 10% fetal calf serum이 함유된 RPMI 1640을 사용하였으며, 대식세포 배양을 위한 배지는 streptomycin(100㎍/ml)과 penicillin(100 ㎍/ml)이 함유된 DMEM(Dulbecco's modified eagle's medium) 배지를 사용하였다. RPMI 1640, DMEM 배지 및 fetal new born calf serume GIBCO(Grand Island, N.
7 대식세포는 부착성 세포로서 단층 배양하였다. 배치로는 10%의 fetal calf serum (FCS)이 포함된 DMEM을 사용하여 petri dish를 이용하여 2~3일 마다 계대하여 주면서 실험 목적에 따라 다르게 사용하였다.
복강 대식세포의 분리를 위한 실험 동물은 웅성의 ICR 계 mouses. 생후 8~10 주령으로 무게는 20~25g의 것을 삼육축산으로부터 공급받아 사용하였다.
mouses. 생후 8~10 주령으로 무게는 20~25g의 것을 삼육축산으로부터 공급받아 사용하였다. Mouse의 사육 조건으로 실험동물실 온도는 22±2℃, 습도는 55-60%, light cyclee 12시간씩 빛과 밤상태를 유지하였으며, 마우스용 고형 사료와 물을 무제한 공급하였다- Raw 264.
이론/모형
Microsome의 분리와 지질 과산화 유발은 Kiso(l984)의 방법에 따라 실시하였다. 지실 과산화 정도는 Ohkawa 등(1979)의 방법에 준하여 표준물질로 1, 1, 3, 3-tetramelhoxy- propane(TMP)을 이용하여 표준곡선을 작성하고, 시료의 지질 과산화물(malondialdehyde, MDA) 양을 측정하였다.
대식세포 배양물내 TNF-α의 정량은 multiple antibody sandwich 원리를 이용한 solid-phase ELISA 방법을 통하여 다음과 같이 측정하였다. 대식세포 배양액에 GMPG, GMPG 고분자, 저분자 분획물 및 대조물질 등을 가하고 24시간 동안 배양한 후, 배양 상층액을 수획하여 원심분리를 하였다.
GMPG, GMPG 고분자, 저분자 분획물 및 대조물질은 각 well에 10㎍/ml농도로 가하여 37℃에서 5% CO2, incubatoi에서, 24시간 동안 배양 한 후, NO를 측정하였다. 대식세포에 의해 생성되는 NO는 Ding 둥(1988)의 방법에 따라 정 량하였다. 간략하면, 100 ㎕의 배양액과 동량의 Griess reagent(l% sulfanilamide, 0.
원심분리를 통해 얻어진 상층액들은 -70℃에서 동결 보관하면서 실험에 이용하였다. 배양 상층액내의 TNF-α 정량법의 정량은 Pizarro 등(1994)의 방법을 이용하였다. 반응 정지 후 실온에서 10분 동안 방치하고 30분 이내에 ELISA reader를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정 하였다.
따라 실시하였다. 지실 과산화 정도는 Ohkawa 등(1979)의 방법에 준하여 표준물질로 1, 1, 3, 3-tetramelhoxy- propane(TMP)을 이용하여 표준곡선을 작성하고, 시료의 지질 과산화물(malondialdehyde, MDA) 양을 측정하였다. 또한 지질 과산화 억제청도는 다음의 계산식으로 표시하였다.
성능/효과
0 pg/mJ의 TNF-c생성함으로서 단백 다당류 단독 처리시와 동일한 경향을 보였다. GMPG, GMPG 고분자 및 저분자가 정상 쥐로부터 분리된 대식세포로부터 TNF-α 생성능에 미치는 효과를 측정한 결과, IFN-y와 LPS 처리시는 각각 1, 189.1 pg/m/4 2, 678.1 pg/mZ, GMPG 처리시는 2, 084.8 pg/mZ의 TNF-c< 생성하였다. GMPG-UH, GMPG-CH 처리시는 각각 3, 068.
0 μM의 NO를 생싱하였다. GMPG, GMPG 고분자 및 지분자가 Raw 264.7 세포주로부터 cytokine 중 하나인 TNF-α 생성에 미치는 효과는 GMPG 처리시는 4,128.3 pg/ml, GMPG-UH, GMPG-CH는 각각 6, 573.4 pg/mZ과 5, 471.8 pg/ml의 TNF-fx를 생성함으로서 고분자 중합도가 높은 고분자 분획이 저분자보다 Raw 264.7 세포주의 cytokine 생성에 더 큰 유도작용을 하는 것으로 나타났으며, 대식세포로부터 TNF-ct 유도물질인 IFN-J와 LPS 처리시는 4, 501.5 pg/ml과 5, 600.5 pg/ml로 나타났다. 그리고 GMPG, GMPG 고분자 및 저분자와 IFN-y를 Rew 264.
8 pg/mZ의 TNF-c< 생성하였다. GMPG-UH, GMPG-CH 처리시는 각각 3, 068.0 pg/mZ과 2, 975.3 pg/ml 을 생성함으로서 정상 쥐로부터 분리된 대식세포에서도 고분자 분획이 대식세포를 활성화시키는 것으로 나타났다. IFN=y와 LPS에 의해 활성화된 대식세포는 NO틀 생성하며, 이때 생성된 NO는 항미생물 및 항종양 작용하는 것으로 알려졌다(Hibbs 등, 1988; Moncada 등, 1991).
1 pg/ml, GMPG 처리시는 pg/ml의 TNF-α를 생성하였다. GMPG-UH, GMPG-CH 처리시는 각각 3,068.0 pg/ml과 2,975.3 pg/ml의 TNF-α생성함으로서 정상 쥐로부터 분리된 대식세포에서도 고분자 중합도가 높은 고분자의 분획이 처분자 분획보다 대식세포를 활성화시키는 것으로 나타났다.
1에 나타내었다. GMPG에서는 19.6%의 항보체 활성능을 나타냈으며, 항암 활성이 높았던 GMPG-CH 분획에서 가장 높은 39.3%의 활성능을 보였으며, 고분자 분획이 저분자 분획보다 높은 항보체 활성능을 나타냈다. 양성대조물질로 사용한 krestin과 zymosan A의 경우 각각 18.
는 면역 족진 효과, 항암활성 및 간 보호작용 등의 다양한 약리활성을 갖는 것으로 알려졌다(Mizuno등, 1984; Sone 등, 1985). GMPG와 이의 고분자 및 저분자 분획들의 항보체 활성화에 대한 실험 결과는 GMPG에서는 19.6%의 항보체 활성 을 나타냈으며, 항암 활성이 높았던 GMPG-CH 분획에서 가장 높은 39.3%의 활성능을 보였으며, 고분자 분 획이 저분자 분획보다 높은 항보체 활성능을 나타냈다. 양성 대조물질로 시용한 kreslin과 zymosan A의 경우 각각 18.
8과 같다. GMPG의 한외여과 고분자 분획인 GMPGUH에서 92.3%로 지질 과산화 억제능이 있는 것으로 나타났으며, 컬럼 분획 고분자인 GMPG-CH의 경우는 40.3%로 나타났다. 즉,컬럼에 의한 분획보다는 한외여과 분획 고분자에서 지질 과산화 억제능이 높은 것으로 나타났다.
6과 같다. IFN-a와 GMPG를 동시에 처리시에 6,435.8 pg/ml GMPG 단독처리시보다 약 1.6배 증가 효과를 나타내어 IFN-y가 TNF-α 생성에 있어서 상승작용 효과가 있음을 나타냈으며, IFN-y와 GMPG- UH, GMPG-CL을 동시에 처리시는 각각 6,736.9 pg/ml과 6,802.0 pg/ml의 TNF-α를 생성함으로서 단백다당류 단독처리시와 동일한 경향을 보였다.
5 pg/ml로 나타났다. 그리고 GMPG, GMPG 고분자 및 저분자와 IFN-y를 Rew 264.7 세포주에 동시에 투여하여 TNF-α 생성능에 미치는 효과를 측정한 결과는 IFN-7와 GM2를 동시에 처리시에 6, 435.8 pg/m로 GMPG 단독처리시보다 약 L6배 증가 효과를 나타내어 IFN-γ가 TNF-α 생성에 있어서 상숭작용 효과가 있음을 나타냈으며, IFN-y와 GMPG-UH, GMPG-CL을 병용 처리시는 6, 736.9 pg/ml와 6, 802.0 pg/mJ의 TNF-c생성함으로서 단백 다당류 단독 처리시와 동일한 경향을 보였다. GMPG, GMPG 고분자 및 저분자가 정상 쥐로부터 분리된 대식세포로부터 TNF-α 생성능에 미치는 효과를 측정한 결과, IFN-y와 LPS 처리시는 각각 1, 189.
3%의 활성능을 보였으며, 고분자 분획 이 저분자 분획보다 높은 항보체 활성을 나타내어 단백다당류의 항보체 활성은 항암 활성과 어떠한 관계가 있는 것으로 추정된다. 대식세포에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Raw 264.7 세포에 고분자 및 저분자 분획을 첨가하고 nitric oxide 생성능을 측정한 결과, β-결합 당의 함량이 높은 고분자 분획이 대식세포에 대한 NO 생성능이 높게 나타나는 것을 알 수 있었으며, 대식세포의 활성화 인자인 IFN-y이 병용 첨가시에는 IFN-y의 단독 첨가시 보다 약 5~26 의 nitric oxide 생성을 증가시키는 것을 알 수 있었다. 종양세포의 괴사 및 NK 세포의 활성화에 관여하는 것으로 알려진 TNF-α의 생성을 알아본 결과, 고분자 분획인 GMPG-UH 와 GMPG-CH는 각각 3,068.
3 pg/ml TNF-α 생성하였다. 또한 GMPG- UH와 GMPG-CH 경우는 각각 6.573.4 pg/ml과 5,471.8 pg/ml의 TNF-α를 생성함으로서 고분자 중합도가 높은 고분자 분획이 저분자 분획보다 대식세포의 cytokine 생성능에 더 큰 유도작용을 하는 것으로 나타났다.
2와 같다. 영지 균사체의 알칼리 추출불인 GMPG, GMPG 고부자 및 저분자 단백 다당류도 대식세포의 nitric oxide 생성을 촉진하는 것으로 나타났다. GMPG 처리시는 22.
이것의 분자량은 12kD와 2,000 kD의 분자량 분포를 지닌 단백 다당류이며, 이 둘 중 어느 분획이 주 약리활성을 나타내는지 규명하기 위해, ultrafiltration 및 column chromatography를 실시하여 고분자 및 저분자 분획으로 분획화를 실시하여 이들에 대한 약리활성을 조사하였다, 항보체 활성화 정도는 항암 활성이 높았던 GMPG-CH 분획에서 가장 높은 39.3%의 활성능을 보였으며, 고분자 분획 이 저분자 분획보다 높은 항보체 활성을 나타내어 단백다당류의 항보체 활성은 항암 활성과 어떠한 관계가 있는 것으로 추정된다. 대식세포에 미치는 영향을 알아보기 위하여 Raw 264.
IFN=y와 LPS에 의해 활성화된 대식세포는 NO틀 생성하며, 이때 생성된 NO는 항미생물 및 항종양 작용하는 것으로 알려졌다(Hibbs 등, 1988; Moncada 등, 1991). 이와 같이 항암 및 항보체 활성능을 갖는 것으로 조사된 GMPG, GMPG 고분자 및 저분자 분획에서 생성되는 NO는 체내에서 다양한 면역학적 활성을 유도할 것이며, 또한 고분자 분획에서 다량의 nitric oxide가 분비되는 것으로 보아 고분자 중합도가 높은 다당류가 대식세포를 매개로한 항종양 효과 및 항미생물 효과를 나타낼 것으로 추정된다. 또한 이들의 항종양 효과는 대식세포의 개입에 의해 직접적으로 활성화시키거나 B 세포 및 T 세포의 활성화를 통한 일련의 면역반응에 의해 일어나는 것으로 추정된다.
7 세포에 고분자 및 저분자 분획을 첨가하고 nitric oxide 생성능을 측정한 결과, β-결합 당의 함량이 높은 고분자 분획이 대식세포에 대한 NO 생성능이 높게 나타나는 것을 알 수 있었으며, 대식세포의 활성화 인자인 IFN-y이 병용 첨가시에는 IFN-y의 단독 첨가시 보다 약 5~26 의 nitric oxide 생성을 증가시키는 것을 알 수 있었다. 종양세포의 괴사 및 NK 세포의 활성화에 관여하는 것으로 알려진 TNF-α의 생성을 알아본 결과, 고분자 분획인 GMPG-UH 와 GMPG-CH는 각각 3,068.0 pg/mZ과 2,975.3 pg/ml였고, 처분자에서는 GMPG-UL과 GMPG-CL 각각 1, 400 pg/ml를 생성하는 것으로 조사되었다.
3%로 나타났다. 즉,컬럼에 의한 분획보다는 한외여과 분획 고분자에서 지질 과산화 억제능이 높은 것으로 나타났다.
후속연구
9%의 억제 효과를 보였다고 보고하였다. 이와 같이 영지 유래의 다당류는 다양한 약리활성을 갖는 것으로 보고됨으로서 이들에 대한 약리학적 작용기전 규명을 위한 기초연구가 이루어져야만 할 것이다.
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