Bacillus 균주를 이용한 검정콩 청국장의 생리활성 및 Isoflavone 함량 Some Biological Activities and Isoflavone Content of Chungkugjang prepared with Black Beans and Bacillus Strains원문보기
Bacillus 균주를 이용하여 42$^{\circ}C$에서 72시간동안 발효된 검정콩 청국장의 몇 가지 생리활성 및 sioflavone(daidzein, genistein) 함량을 조사하였다. B. subtilis 보다는 분리균주 Bacillus megaterium SMY-212 균주를 첨가한 청국장이 항균활성이 매우 높았고, 대립 검정콩의 메탄올 추출물이 소립 검정콩의 것보다 항균 효과가 우수하였다. 청국장의 수소공여능은 대립 및 소립 검정콩 청국장에서 각각 76.4 및 75.5%를 나타내었으며, B. subtilis 및 SMY-212 를 첨가한 것은 무첨가보다 약간 높게 나타났다. 아질산염 소거능은 대립 검정콩이 소립 검정콩보다 그 효과가 크게 나타났으나, 균종간에는 차이가 나타나지 않았다. Linoleic acid 에 대한 과산화물가 및 흰쥐의 liver homogenate에 의한 TBARS 함량으로부터 볼 때 검정콩 청국장의 메탄올 추출물은 상당한 항산화효과가 있었다. 그 효과는 소립 검정콩의 청국장 추출물이 대립 검정콩의 청국장 추출물보다, 균주 첨가 청국장 추출물이 균주 무첨가 청국장 추출물보다 크게 나타났다. 청국장의 daidzein 및 genisteing함량은 발효 중 증가하였으며, 대립 검정콩 청국장이 소립 검정콩 청국장에 비하여 약간 높았다.
Bacillus 균주를 이용하여 42$^{\circ}C$에서 72시간동안 발효된 검정콩 청국장의 몇 가지 생리활성 및 sioflavone(daidzein, genistein) 함량을 조사하였다. B. subtilis 보다는 분리균주 Bacillus megaterium SMY-212 균주를 첨가한 청국장이 항균활성이 매우 높았고, 대립 검정콩의 메탄올 추출물이 소립 검정콩의 것보다 항균 효과가 우수하였다. 청국장의 수소공여능은 대립 및 소립 검정콩 청국장에서 각각 76.4 및 75.5%를 나타내었으며, B. subtilis 및 SMY-212 를 첨가한 것은 무첨가보다 약간 높게 나타났다. 아질산염 소거능은 대립 검정콩이 소립 검정콩보다 그 효과가 크게 나타났으나, 균종간에는 차이가 나타나지 않았다. Linoleic acid 에 대한 과산화물가 및 흰쥐의 liver homogenate에 의한 TBARS 함량으로부터 볼 때 검정콩 청국장의 메탄올 추출물은 상당한 항산화효과가 있었다. 그 효과는 소립 검정콩의 청국장 추출물이 대립 검정콩의 청국장 추출물보다, 균주 첨가 청국장 추출물이 균주 무첨가 청국장 추출물보다 크게 나타났다. 청국장의 daidzein 및 genisteing함량은 발효 중 증가하였으며, 대립 검정콩 청국장이 소립 검정콩 청국장에 비하여 약간 높았다.
Some biological activities and isoflavone (daidzein, genisten) contents were investigated from chungkugjang (CK) fermented with black beans and Bacillus strains at 42$^{\circ}C$ for 72 hr. n antibacterial activity, black bean CK fermented with Bacillus megaterium SMY-212 was higher than t...
Some biological activities and isoflavone (daidzein, genisten) contents were investigated from chungkugjang (CK) fermented with black beans and Bacillus strains at 42$^{\circ}C$ for 72 hr. n antibacterial activity, black bean CK fermented with Bacillus megaterium SMY-212 was higher than that ferment4d with B. subtilis. In both CK the methanol extract fo large black bean CK was more effective than that of small black bean CK was more effective than that of small black bean. Hydrogen-donating activity of methanol extract of chungjugjang (MEC) prepared with large and small black soybean showed to be 76.4 and 75.5%, respectively. Hydrogen-donating activity of MEC prepared with B. subtilis and SMY-212 was slightly highter than that without both strains. MEC of large black bean was higher in nitrite-scavenging activity than that of small black bean, and black bean CKs fermented with B. subtilis and SMY-212 have no difference in nitrite-scavenging activity B. subtilis and SMY-212. MEC of black bean showed strong antioxidative activity against peroxidation of linoleic acid and $H_2O$$_2$-FeSO$_4$-induced peroxidation of rat liver homogenate. MEC of black bean with Bacillus strains was higher in antioxidative activities than that of black bean without Bacillus strains. Contents of isoflavone (daidzein, genistein) were gradually increased during fermentation of CK. The isoflavone content was slightly higher in large black bean CK than in small black bean CK.
Some biological activities and isoflavone (daidzein, genisten) contents were investigated from chungkugjang (CK) fermented with black beans and Bacillus strains at 42$^{\circ}C$ for 72 hr. n antibacterial activity, black bean CK fermented with Bacillus megaterium SMY-212 was higher than that ferment4d with B. subtilis. In both CK the methanol extract fo large black bean CK was more effective than that of small black bean CK was more effective than that of small black bean. Hydrogen-donating activity of methanol extract of chungjugjang (MEC) prepared with large and small black soybean showed to be 76.4 and 75.5%, respectively. Hydrogen-donating activity of MEC prepared with B. subtilis and SMY-212 was slightly highter than that without both strains. MEC of large black bean was higher in nitrite-scavenging activity than that of small black bean, and black bean CKs fermented with B. subtilis and SMY-212 have no difference in nitrite-scavenging activity B. subtilis and SMY-212. MEC of black bean showed strong antioxidative activity against peroxidation of linoleic acid and $H_2O$$_2$-FeSO$_4$-induced peroxidation of rat liver homogenate. MEC of black bean with Bacillus strains was higher in antioxidative activities than that of black bean without Bacillus strains. Contents of isoflavone (daidzein, genistein) were gradually increased during fermentation of CK. The isoflavone content was slightly higher in large black bean CK than in small black bean CK.
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제안 방법
Bacillus 균주를 이 용하여 42°C에서 72시 간동안 발효된 검정 콩 청 국장의 몇 가지 생 리 활성 및 isoflavone(daidzein, genistein) 함량을 조사하였다. B.
검정콩 청국장에 대한 수소공여 능은 a , a 1-diphenyl-p- picrylhydrazine(DPPH)의 환원성을 이용하여 516 nm에서 분광광도계로 측정 하였다. 즉 각 추출물 0.
2로 조정 한 후 반응용액의 부피를 10 mL로 하여 37°C에서 1 시 간 반응시켰디-. 그리고 반응액 1 m丄에 2% acetic acid 5 in丄를 첨가한 다음 Griess 시약 0.4 mL를 가하여 혼합하고 15분 방치 후 분광광도계를 사용하여 520 nm에서 흐광도를 측정하였는데, 공시 험구는 NaNO2 용액 대신에 증류수를 첨가하여 측정하였다.
따라서 본 연구에서는 대두에 비하여 기능성이 우수한 것으로 알려진 검정콩에 단백질 분해력이 우수한 발효균주를 첨가하여 청국장을 제조한 후, 이의 메탄올 추출물에 대한 몇 가지 생 리 활성 효과를 검 색 하고, 청국장 발효 중 daidzein, genistein과 같은 isoflavone의 함량 변화를 조사하였다.
검 토하였다. 즉, 멸균된 filter paper disk(8 mm, Toyo Rhosi Kaisha, Ltd., Japan)에 시료 액을 spot한 다음 80°C의 dry oven에서 용매를 완전히 휘발시키고 중층 시험용 plate의 표면에 놓아 밀착시 켜 냉장고에서 1시 간 동안 방치 시 킨 후, 인큐베이터 에서 배양(30~35°C, 24시간)하여 clear zone의 코기 (직 경, mm)를 측정하여 항균력을 비교하였다.
즉, 삼각플라스크에 60% linoleic acid 1 mL, ethanol 20 mL 및 청국장 추출물 0.1 mL를 첨가한 후 0.2 M phosphate buffer 25 mL를 가하여 37°C에서 일정기간 <1, 3, 5, 7일) 저장한 다음, 반응용액을 분액깔대기 에 옮겨 chloroform 25 mL를 가하여 2〜3회 반복 추출하였다. 다음에 chloroform 추출액 에 acetic acid 25 mL와 포화 KI용액 1 mL를 가하여 암소에서 5분간 방치 한 후, 증류수 50 mL를 가하여 soluble starch를 지 시 약으로 하여 0.
조人1하였다(]6). 즉, 흰쥐 의 간을 적출하여 phosphate buffer(pH 7⑷로 균질화한 다음 균질 액 에 H2O2(1 M)와 FeSd(50 mM) 각각 10 J1L 및 청국장 추출물 0.05 mL를 가하여 37°C에서 40분간 배양한 후 생성된 thiobarbituric acid reactive substances(TBARS) 함량을 측정하였다.
청국장 100 g을 잘 마쇄 한 후, 메탄올 1 L씩 첨가한 후 3회 반복하여 상온에서 12시간 교반 추출하였다. 이를 여과(Whatman No.
대상 데이터
subtilis ATCC 6633, Brevibacterium linens IFO 12141, Micrococcus roseus JAM 1295, Staphylococcus aureus R 209, Streptococcus mutans ATCC 27607의 Gram positive 8종과 Escherichia coli ATCC 15489, Proteus vulgaris IFO 3581, Pseudomonas aeruginosa IFO 3899, Salmonella typhimurium TV 119, Sal. enteritidis IFO 3313의 Gram negative 5종을 사용하였다. Test plate는 0.
청국장 제조용으로는 검 정콩(Glycine max (L.) Merrill) 대립종(서리태)과 소립종(쥐눈이콩)을 사용하였으며, 발효 균주로는 Bacillus subtilis ATCC 6633 및 전통 청국장에서 분리 된 단백 질 분해 력 이 Bacillus megaterium SMY-212(이하 SMY-212로 표기)를 사용하였다(12).
이론/모형
검정콩 청국장 추출물에 대한 아질산염의 소거효과는 Gray와 Dugan의 방법 (17)에 준하여 측정하였다. 즉, 1 mMNaNQa 1 mL에 청국장 추출물 0.
검정콩 청국장의 항균활성은 agar diffusion법 (13)에 준하여 검 토하였다. 즉, 멸균된 filter paper disk(8 mm, Toyo Rhosi Kaisha, Ltd.
성능/효과
함량을 조사하였다. B. subti馬보다는 분리 균주 Bacillus megaterium SMY-212 균주를 첨가한 청국장이 항균활성이 매우 높았고, 대립 검정콩의 메탄올 추출물이 소립 검정콩의 것보다 항균효과가 우수하였다. 청국장의 수소공여능은 대립 및 소립 검 정콩 청국장에서 각각 76.
Isoflavone의 함량은 발효기 간이 길어 질수록 계속적으로 증가하는 경향이었으며, 소립에 비하여 대립 검정콩 청국장의 함량이 약간 높았는데, isoflavone 중 genistein의 함량이 daidzein 함량보다 2배청도 높게 나타났다. Shon 등⑴은 대립 검정콩의 경우 daidzein과 genistein의 총 함량이 처음에 779.
검 정 콩 청 국장 메 탄올 추출물의 linoleic acid에 대한 항산화력은 linoleic acid에 청국장 메탄올 추출물을 첨가한 후 50°C에서 7일칸 저 장하면서 과산화물가를 측정 하였는떼, 청국장 메탄올 추줄물을 첨가하지 않은 대조구는 저장 1, 3, 5 및 7일 후에 과산화물가가 각각 38, 84, 157 및 204 meq/kg이었는더), 청국장 메탄올을 첨가한 시험구에는 저장 7일 후에도 모두 30 meq/kg 이 하로서 상당한 항산화 효과가 있었다. 또한 대립보다는 소립 검정콩 청국장 추출물 첨가할 떼 과산화물가가 더 낮았으며 (Fig.
Linoleic acid에 대한 과산화물가 및 흰쥐의 liver homogenate에 대한 TBARS 함량으로부터 볼 때 검정콩 청국장의 메탄올 추출물은 상당한 항산화 효과가 있었디-. 그 효과는 소립 검 정콩의 청국장 추출물이 대립 검정콩의 청국장 추출물보다, 균주 첨가 청국장 추출물이 균주 무첨가 청 국장 추출물보다 크게 나타났다. 청 국장의 daidzein 및 genistein함량은 발효 중 증가하였으며, 대립 검정콩 청국장이 소립 검정콩 청국장에 비하여 약간 높았디-.
subtilis와 분리균주 SMY-212를 대립 및 소립 검정콩에 첨가하여 발효시 킨 청국장의 메탄올 추출물에 대한 항균활성을 조사한 결과는 Table 1과 같다. 대립 및 소립 검정콩 메 탄을 추출물은 대 부분의 시 험 균주에서 항균활성 을 나타내었으며, 고초균보다는 SMY-212 균주를 첨가한 청국장이 항균활성 이 매우 높았고, SMY-212 균주를 첨 가할 때는 비교적 대립 검정콩이 소립 검정콩보다 항균효과가 우수하였다. SMY-212를 첨가한 대립 검정콩 청국장의 경우는 B.
또한 검정콩에 균주를 첨가하여 발효시 킨 청국장 메탄올 추출물의 아질산염 소거능은 대립 검정콩이 소립 검정콩보다 그 효과가 크게 나타났으나, 검정콩에 첨가한 균종간에는 차이가 나타나지 않았다. Choi 등(21)은 된장, 대두, 메주의 메탄올 주줄물 순으로 아질산 소거능의 효과가 크게 나타났다고 보고하였는데, 이는 검정콩 청국장의 수소공여능과 아질산염 소거능은 원료콩 자체의 isoflavone을 비롯한 여러 기지 물질 및 발효과정 중 생성되는 물질에 의하여 생성되는 것으로 생각된다.
있었다. 또한 대립보다는 소립 검정콩 청국장 추출물 첨가할 떼 과산화물가가 더 낮았으며 (Fig. 2), 균추를 접 종하여 제조한 검정콩 청국장의 추출물을 첨 가한 실험구의 과산화물가가 균주를 첨가하지 않은 검정콩 청국장 추출물 첨가구보다 낮게 나타났다 1).
1과 같다. 수소공여능은 대립 및 소립 검정콩에 H subtilis를 접종하여 발효시킨 경우에는 79.2 및 78.9%이얏1고, 분리균 SMY-212를 첨 가한 경 우에는 각각 84.4 및 83.4%로서 나타 나타났지 만 모두 약 &)%이상의 효과를 나타내었디-. 이 결과는 균주를 첨가하지 않은 대립 및 소립 검 정콩 청국장의 수소공여능이 각각 76.
subtilis 및 SMY-212를 첨가한 것은 무첨가보다 약간 높게 나타났다. 아질산염 소거능은 대립 검정콩이 소립 검정콩보다 二L 효과가 크게 나타났으나, 균종간에는 차이가 나타나지 않았다. Linoleic acid에 대한 과산화물가 및 흰쥐의 liver homogenate에 대한 TBARS 함량으로부터 볼 때 검정콩 청국장의 메탄올 추출물은 상당한 항산화 효과가 있었디-.
4%로서 나타 나타났지 만 모두 약 &)%이상의 효과를 나타내었디-. 이 결과는 균주를 첨가하지 않은 대립 및 소립 검 정콩 청국장의 수소공여능이 각각 76.4 및 75.5%(12)에 비하여 다소 높게 나타났다. 한편 Shon 등(1)은 대두 청국장 메탄올 추출물의 수소공여능이 67.
subti馬보다는 분리 균주 Bacillus megaterium SMY-212 균주를 첨가한 청국장이 항균활성이 매우 높았고, 대립 검정콩의 메탄올 추출물이 소립 검정콩의 것보다 항균효과가 우수하였다. 청국장의 수소공여능은 대립 및 소립 검 정콩 청국장에서 각각 76.4 및 75.5%를 나타내었으며, B. subtilis 및 SMY-212를 첨가한 것은 무첨가보다 약간 높게 나타났다. 아질산염 소거능은 대립 검정콩이 소립 검정콩보다 二L 효과가 크게 나타났으나, 균종간에는 차이가 나타나지 않았다.
흰쥐의 간 지질에 대한 TBARS 함량은 청국장 메탄올 추출물을 첨 가하지 않은 대 조구에서 3, 597 卩mol MDA/g liver이었고, B. sub須is와 SMY-2121- 접종하여 제조한 대립 및 소립 검정콩 청국장 메탄올 추출물을 첨가한 시험구들의 TBARS 함량은 각각 1, 030, 920, 830 및 910 Jimol MDA/g liver로서 모두 대조구에 비 하여 낮게 나타나, 상당한 항산화 효과가 있는 것으로 나타났다. 한편 Shon 등(1)은 대두 청국장 추출물보다는 검정콩 청국장 추출물이 휜쥐의 간 지질에 대한 과산화 효과가 훨씬 크게 나타나 대두보다 검정콩 자체에 항산화물질이 많을 것 이 라고 하였다.
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