유청 단백질 중에서 $\alpha$-lactalbumin, $\beta$-lactoglobulin를 고성능 막 크로마코그래피를 이용하여 분리하는 것이다. 분리 메카니즘은 음이온 교환작용이며 고정상은 CIM DEAE, QA, So$_3$ disk (16$\times$3 mm)을 사용하였다. 이동상은 buffer A (20 mM Tris-HCI, pH 7.3)와 buffer B (buffer A + 1 M NaCl)를 사용하였으며 $\alpha$-lactalbumin, $\beta$-lactoglobulin를 분리하기 위해서 구배용매 조성법을 사용하였다. 각 이동상의 조성에 따른 최적의 이동상 조성(Buffer A/Buffer B=100/0 - 30/70 vol%, gradient time 1 min, 30/70 - 10/90 vol%, gradient time 2 min)을 실험적으로 얻었고 4 ml/min의 이동상 유속에서 3분내에 $\alpha$-lactalbumin, $\beta$-lactoglobulin를 분리 할 수 있었다. 유청 단백질 중에 $\alpha$-lactalbumin, $\beta$-lactoglobulin을 HPMC을 적용하여 분리하였고, 유청 단백질의 기능적 성질, 분리 방법에 대해 알아보았다.
유청 단백질 중에서 $\alpha$-lactalbumin, $\beta$-lactoglobulin를 고성능 막 크로마코그래피를 이용하여 분리하는 것이다. 분리 메카니즘은 음이온 교환작용이며 고정상은 CIM DEAE, QA, So$_3$ disk (16$\times$3 mm)을 사용하였다. 이동상은 buffer A (20 mM Tris-HCI, pH 7.3)와 buffer B (buffer A + 1 M NaCl)를 사용하였으며 $\alpha$-lactalbumin, $\beta$-lactoglobulin를 분리하기 위해서 구배용매 조성법을 사용하였다. 각 이동상의 조성에 따른 최적의 이동상 조성(Buffer A/Buffer B=100/0 - 30/70 vol%, gradient time 1 min, 30/70 - 10/90 vol%, gradient time 2 min)을 실험적으로 얻었고 4 ml/min의 이동상 유속에서 3분내에 $\alpha$-lactalbumin, $\beta$-lactoglobulin를 분리 할 수 있었다. 유청 단백질 중에 $\alpha$-lactalbumin, $\beta$-lactoglobulin을 HPMC을 적용하여 분리하였고, 유청 단백질의 기능적 성질, 분리 방법에 대해 알아보았다.
${\alpha}$-lactalbumin and ${\beta}$-lactoglobulin in whey proteins were separated by high performance membrane chromatography (HPMC). The separation mechanism involved anion-exchange, and the stationary phase was anion CIM (Convective Interaction Media) DEAE, QA disk and catio...
${\alpha}$-lactalbumin and ${\beta}$-lactoglobulin in whey proteins were separated by high performance membrane chromatography (HPMC). The separation mechanism involved anion-exchange, and the stationary phase was anion CIM (Convective Interaction Media) DEAE, QA disk and cation exchanger SO$_3$(16${\times}$3 mm). Two types of mobile phase were used, buffer A (20 mM Tris-HCI, pH 7.3) and buffer B(buffer A + 1 M NaCl), As the amount of NaCl dissolved in buffer linearly increased, which enabled a gradient elution mode. The optimum mobile phase and operating condition (Buffer A/Buffer B = 100/0 - 30/70 vol%, gradient time 1 min, 30/70 - 10/90 vol.%, gradient time 2 min) were experimentally determined. In this experimental condition, ${\alpha}$-lacta1bumin, ${\beta}$-lactoglobulin were separated within 5 min at a mobile phase flow rate of 4 mL/min.
${\alpha}$-lactalbumin and ${\beta}$-lactoglobulin in whey proteins were separated by high performance membrane chromatography (HPMC). The separation mechanism involved anion-exchange, and the stationary phase was anion CIM (Convective Interaction Media) DEAE, QA disk and cation exchanger SO$_3$(16${\times}$3 mm). Two types of mobile phase were used, buffer A (20 mM Tris-HCI, pH 7.3) and buffer B(buffer A + 1 M NaCl), As the amount of NaCl dissolved in buffer linearly increased, which enabled a gradient elution mode. The optimum mobile phase and operating condition (Buffer A/Buffer B = 100/0 - 30/70 vol%, gradient time 1 min, 30/70 - 10/90 vol.%, gradient time 2 min) were experimentally determined. In this experimental condition, ${\alpha}$-lacta1bumin, ${\beta}$-lactoglobulin were separated within 5 min at a mobile phase flow rate of 4 mL/min.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
문제 정의
실험을 통해서 이동상 조성과 조업방법에 따른 각기 유청 단 백질의 분리도를 고찰하여 최적 이동상을 구하고자 한다. 따 리서 유청 단백질 중에 a-lactalbumin, g-lactoglobulin을 HPMC을적용하여 분리하고, 유청 단백질의 기능적 성질, 분리 방법에 대해 알아보려 한다.
유청 단백질을 HPMC로 분리하기 위한 메카니 즘은 이온교환 작용이며 정지상은 CIM disk를 사용하였다. 실험을 통해서 이동상 조성과 조업방법에 따른 각기 유청 단 백질의 분리도를 고찰하여 최적 이동상을 구하고자 한다. 따 리서 유청 단백질 중에 a-lactalbumin, g-lactoglobulin을 HPMC을적용하여 분리하고, 유청 단백질의 기능적 성질, 분리 방법에 대해 알아보려 한다.
유청 단백질은 acid stability, gelation, film formation, aeration, 그리고 emulsification과 같은 기능적 특성과 우수한 영양적 가치에 의해 식푼 재료로시 사용하기 위해 이들 자체 성질의 인구와 이용을 위한 여러 기술을 연구 및 응용하게 되었다. 치즈나 casein 제조 과정에서 나오는 부산물인 유청은 그 처 리가 문제가 되었다.
제안 방법
Figure 3에서는 Figure 2의 분리도가 좋지 않아서 고성상으 로 약 음이온 교환막(DEAE)와 강 음이온 교환막(QA)을 동시에 人>용하였다. Disk 막의 두께에 따른 분리도 영향을 보 기 위해서 실험을 하였다. 이동상 조성은 buffer A/buffer B = 95/5 (vol.
논 실-험에서는 CIMe 약 음이온 교환막인 DEAE와 강 음 이온 교환막 QA disk 그리고 양이온 교환막 S6를 고정상으 로 시용하였고, 이동상은 buffer A(Tris-HCl, pH 7.4 or Sodium Acetate, pH 5.1)오]- buffer B(buffer A + IM NaCl)를 사용하였과 이동상의 유량은 4 mL/min으로 실험하였다. Disk 는 아크릴로 된 bosuing에 장착하여 HPLC에 연결하여 사용하였다.
그래서 구비용매 조 성(gradient elution)으로 죄적의 분리 조건을 찾는 것이다. 단백질 분리에서는 조업변수인 온도, pl, 구배용매 조성의 변화에 따라 이온 교환막을 선텍하여 분리특성에 대해서 알아보 았다. 특히 단백질을 제조용 단게까지 scale-up 하기 위해서는 monolith 컬럼의 개발과 함께 단빅질과 막간의 홉착 용량, 선택성, 흡착-탈착 속도를 높이기 위한 다공성 막의 구조와 다양한 리간드의 형태가 개발되어야 한다.
유 청 단백질 중 a -lactalbumin, 8-lacto이obulin을 분리 하기 위해서 CIM monolith 컬럼인 약 음이온 교환막(DEAE), 강 음이온 교환막(QA), 양이온 교환막(S6)을 시용하여 분리하였다. CIM monolith 컬럼을 이용한 단빈!질의 분리에서 사용된 이동상으로 buffer A (20 mM Tris-HCl, pH 7.
본 연구에서는 유청 단백칠 중에서 a -lactalbumin, B -lactoglobulin 을 고성능 막 크로마토;!래피를 이용하여 분리 하는 것이다. 유청 단백질을 HPMC로 분리하기 위한 메카니 즘은 이온교환 작용이며 정지상은 CIM disk를 사용하였다. 실험을 통해서 이동상 조성과 조업방법에 따른 각기 유청 단 백질의 분리도를 고찰하여 최적 이동상을 구하고자 한다.
1)와 buffer B (buffer A + 1 M NaCl) 사용하였다. 유청 단백질을 분리하기 위한 시료를 컬럼에 주입하기 위해서 한외여과 장치를 사용하여 전처리 하였으며 (Figure 1), 주입량은 20 pL 주입하였다. CIM 컬럼에서 유속 은 4 mL/min, UV 파장은 280 nm로 실험하였다.
75 psi)을 사용하였다. 한외여과로 분자량의 크기에 따라, 분자량 10, 000에서 a-lactose를 여과한 후, 분자량 30, 000 제 거용 막을 시, 용하여 lactose가 제거된 a-lactalbumin와 -lactoglobulin을 여과하여 20 应씩 주입하였다.
대상 데이터
한외역과 장치는 Amicon 8400(USA) mod미을 사용하였고, 필터는 분자량 10, 000고+ 30, 000욜 사용하였다. HPLC* Wg江s사의 600 E 펌프(multisolv顷 delivery system)5 490 UV-visible tunable wavel自n익h absorbance (280 nm로 고정), Rlieodyne 주입기(50 «L sample loop), 데이터 저징- 시스템은 Chrom시自(v氐 3.0, Interface Eng.)를 사용하였다.
(11). Monlifhic Convective Interaction Media(CIM) DEAE (diethylaminoetliyl) disk, QA(quatemaiy amine) 그비고 SO3 (wlfonyl)을 사용하였다. 단백질은 이온교환 작용에 의해서 분리가 되며, DEAE오]- QA는 음이온교환 disk로 사용되었다.
고정상으로는 BTA 明]頂]꺼tiQns(SlQV卽H&)사에서 구입한 직경 이 16 mm, 두께가 3 mm인 Monolithic Convective Interaction Media 흐F 음이온 disk DEAE(diRthylamino巳thyl)오]- 강 음이온 disk QA(quatcwary amine), 양 이온 disk SOMBulfonyl)을 사 용히였고 재 질은 poly(glycidylmethacrylale-co-ethyleneglyco1d imethacrylatc)°]i4.
Figure 2 에서는 고정상으로 강 음이온.교환막(QA)을 사용 하였고, 이동상으로 buffer A/buffer B = 100/0 (vol.%) gradient time Imin 후에는 67/33 (vol.%)로 분리하였다. 가장 먼저 용 출되는 피크는 용매 피크라는 것을 실험적으로 확인하였고, a-lactalbumin과 -lactoglobulin?]- 분리 되 지 않았디, .
유청 과 표준시 료인 a-lactalbumin와 /3-lactoglobuline Sigma 에서 구입하였고, 이동상으로 사용된 용매로 Trisfbase)는 J. T. Baker(USA), NaCle 동양화학, 그리고 Sodium Acetate는 덕산화학에서 구입하였다. 증류수는 갂압 펌프(Division of Millipore, Waters)와 필터(HA-0.
HPMC로 유청 단백질을 분리하기 위해서는 유청 단 백질의 특성상 전처리 과정이 펄요하다. 유청 파우더 10 g을 DI Water 100 mL에 녹인 용엑을 Amicon 8400(USA) model 의 한외여과 장치(Operation condition-max. 75 psi)을 사용하였다. 한외여과로 분자량의 크기에 따라, 분자량 10, 000에서 a-lactose를 여과한 후, 분자량 30, 000 제 거용 막을 시, 용하여 lactose가 제거된 a-lactalbumin와 -lactoglobulin을 여과하여 20 应씩 주입하였다.
한외역과 장치는 Amicon 8400(USA) mod미을 사용하였고, 필터는 분자량 10, 000고+ 30, 000욜 사용하였다. HPLC* Wg江s사의 600 E 펌프(multisolv顷 delivery system)5 490 UV-visible tunable wavel自n익h absorbance (280 nm로 고정), Rlieodyne 주입기(50 «L sample loop), 데이터 저징- 시스템은 Chrom시自(v氐 3.
후속연구
그래서 현재 응용되고 있는 것이 막 크로마토그래피 이다. 또한 기존의 컬럼 M로마토그래피와의 호환성이 좋아서 효율적으로 단백질 분석에 응용될 수 있다. (11).
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.