[논문]용매별 감잎 추출물의 Xanthine Oxidase 저해효과

문숙희; 이민경; 채기수

문제 정의

또한 감잎 열탕 추출물 및 감잎으로부터 추출한 탄닌이 농도에 비례하여 xanthine oxidase 를 저해하는 효과가 있었고 저해양상은 경쟁적 저해제로 작용한다고 보고하였다[9]. 따라서 본 연구에서는 항산화 효과20), 항돌연변이 효과21) 및 항발암 효과 가 있어 녹차와 함께 우리나라 전통차로 자리 잡아가고 있는 감잎을 용매별로 분획 하여 이들에 대한 xanthine oxidase의 저해효과를 살펴보았다

제안 방법

5mg, l.Omg, 2.0mg으로 변화시켜 효소의 저해효과를 측정하였다. Table 1.
감잎의 메탄올 추출물 및 각 용매별 획분에 의한 xanthine oxidase의 활성변화는 Noro16) 등의 방법을 변형하여 측정하였다. 즉, 반응구는 0.
감잎의 용매추출 획분은 시료 중량의 20배의 메탄올로 3시간씩 3회 교반 추출하여 감압 농축한 후 극성이 다른 용매 즉, 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물로 추출하여 각각의 획분으로 분획하였다(Fig. 1). 메탄올 추출물 및 용매 추출 획분은 진공 감압 농축기로 용매를 제거한 후 실험에 사용하였다.
시중에서 흔하게 구할 수 있고 즐겨 마시는 차로 이용이 되고 있는 감잎을 시료로 택하여 메탄올로 추출한 후 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올, 물 등으로 각각 분획하여 xanthine oxidase에 대한 저해 효과를 살펴보았다. 메탄올 추출물에서는 시료 2.
측정하였다. 즉, 반응구는 0.1M potassium phosphate buffer (pH 7.5) 용액에 2mM xanthine 을 녹인 기질액 1ml를 준비하고, 여기에 효소액(xanthine oxidase)과 시료(감잎의 메탄올 추출물 및 각 용매별 획분)를 각각 0.1ml 가하고, 대조구에는 시료 대신 증류수를 0.1ml 첨가하여 37C 에서 5분간 반응시 켰다 반응 정지물로는 20% trichloroacetic acid (TCA) 1ml를 가하여 반응을 정지시키고 여과하여 단백질을 제거한 후 UV/VIS spectrophotometer(Shimadzu UV-120-02) 를 이용하여 292nm에서 효소활성을 측정하였다 이때 효소의 저해율은 반응 용액 중에 생성된 uric acid의 백분율로서 나타내 어 다음 식으로 저해율을 구하였다.

성능/효과

0mg/ml 첨가시 87%의 높은 저해율을 나타내어 xanthine oxidase에 대해 저해 효과가 가장 뛰어남을 알 수 있었다. 각 용매별 획분에 대하여 반응 시간별로 잔존하는 xanthine oxidase의 활성도는 에틸아세테이트 획분과 헥산 획분에서 가장 낮은 반면 물 획분에서 가장 높았으며, 각 획분 모두 반응 시 간 1분 안에 xanthine oxidase의 활성도가 급격히 감소되었고 그 이후 시간이 경과함에 따라서는 다소 완만한 감소를 나타내었다.
감잎의 용매별 획분 중에서는 에틸아세테이트 획분이 농도에 비례하여 가장 높은 저해효과를 나타내어 2.0mg/ml 첨가 시 xanthine oxidase의 활성이 87%나 저해되었다. 또한 헥산 획분에서도 높은 저해효과를 나타내었으며 클로로포름, 부탄올, 물 획분 순으로 농도에 비 례하여 효소활성을 저해하였다.
0mg /ml 첨가 시 78%의 높은 저해 효과를'나타내었으며 농도가 증가할수록 저해효과가 우수한 것으로 나타났다. 또한 메탄올 추출물을 농도별로 첨가하여 반응시간에 따른 저해효과를 살펴본 결과 반응시간 1분에 가장 급속한 저해효과를 나타내었으며 시간이 증가할수록 효소 저해율의 증가는 완만하였다. 한편 각 용매별획분에서도 마찬가지로 농도가 증가할수록 xanthine oxidase에 대한 저해효과가 증가하였으며 특히 에틸아세테이트 획분에서는 2.
0mg/ml 첨가 시 xanthine oxidase의 활성이 87%나 저해되었다. 또한 헥산 획분에서도 높은 저해효과를 나타내었으며 클로로포름, 부탄올, 물 획분 순으로 농도에 비 례하여 효소활성을 저해하였다. 한편 각 분획물의 수득율은 헥산 획분, 클로로포름 획분, 에틸아세테이트 획분, 부탄올 획분 및 물 획분이 각 20.
살펴보았다. 메탄올 추출물에서는 시료 2.0mg /ml 첨가 시 78%의 높은 저해 효과를'나타내었으며 농도가 증가할수록 저해효과가 우수한 것으로 나타났다. 또한 메탄올 추출물을 농도별로 첨가하여 반응시간에 따른 저해효과를 살펴본 결과 반응시간 1분에 가장 급속한 저해효과를 나타내었으며 시간이 증가할수록 효소 저해율의 증가는 완만하였다.
2는 감잎의 메탄올 추출물로부터 반응 시 간에 따른 xanthine oxidase의 저해 효과를 나타낸 것이다. 시료 2.0mg 첨가시에 반응시간 1분 경과시 58%의 저해율을 나타내었으며 시간이 경과함에 따라 저해율의 증가는 크지 않았다. 다른 농도에서도 반응시간 1분 경과시 xanthine oxidase의 활성이 크게 저해되었고 시간이 경과함에 따른 저해율의 변화는 크지 않았다.
3에서는 감잎의 각 용매별 획분에 대하여 반응 시간별로 잔존하는 xanthine oxidase의 활성을 나타낸 것이다. 역시 에틸아세테이트 획분과 헥산 획분에서효소의 활성이 급격히 저하됨을 볼 때 xanthine oxida에 대한 저해효과가 우수함을 알 수 있었다. 특히 에틸아세테이트 획분에서는 반응시간 1분 경과 시 잔존하는 활성도는 34% 정도를 나타내 었고 5분 경과 시에는 진존하는 효소활성도가 20%이하를 나타내었다.
또한 헥산 획분에서도 높은 저해효과를 나타내었으며 클로로포름, 부탄올, 물 획분 순으로 농도에 비 례하여 효소활성을 저해하였다. 한편 각 분획물의 수득율은 헥산 획분, 클로로포름 획분, 에틸아세테이트 획분, 부탄올 획분 및 물 획분이 각 20.5%, 13.8%, 11.9%, 2 2.4% 및 2 2.4%였다. 여 2등의 녹차, 오룡차및 홍차 추출물에서 xanthine oxidase 저해를 연구한 논문에서도 각 차 추출물의 농도가 증가할수록 xan thine oxidase 저해작용이 증가하며, xanthine oxidase 저해효과는 catechine 획분이 가장 높고 그 다음이 메탄올 가용성 획분 및 수용성 획분 순으로 나타났으며, 차 제조시 발효정도가 약한 차일수록 xanthine oxidase 저해작용이 높게 나타난 것으로 보고되었다.
또한 메탄올 추출물을 농도별로 첨가하여 반응시간에 따른 저해효과를 살펴본 결과 반응시간 1분에 가장 급속한 저해효과를 나타내었으며 시간이 증가할수록 효소 저해율의 증가는 완만하였다. 한편 각 용매별획분에서도 마찬가지로 농도가 증가할수록 xanthine oxidase에 대한 저해효과가 증가하였으며 특히 에틸아세테이트 획분에서는 2.0mg/ml 첨가시 87%의 높은 저해율을 나타내어 xanthine oxidase에 대해 저해 효과가 가장 뛰어남을 알 수 있었다. 각 용매별 획분에 대하여 반응 시간별로 잔존하는 xanthine oxidase의 활성도는 에틸아세테이트 획분과 헥산 획분에서 가장 낮은 반면 물 획분에서 가장 높았으며, 각 획분 모두 반응 시 간 1분 안에 xanthine oxidase의 활성도가 급격히 감소되었고 그 이후 시간이 경과함에 따라서는 다소 완만한 감소를 나타내었다.

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