선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 관련된 연구는 미흡한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 감잎의 항산화 효과와 항알레르기 효능을 확인하고 추출물의 활성을 높이기 위하여 비 특이적 흡착 resin 인 HP-2MG 를 사용하여 부분정제를 실시하였다. 감잎 추출물의 생리활성을 측정하기 위하여 DPPH(1, 1-diphenyl-2-picrylhy-drazyl) 라디칼, superoxide 음이온 라디칼 소거능을 측정하고, 항알레르기 효능을 측정하기 위하여 알레르기 관련 염증 매 개 물질 인 류코트리 엔류와 프로스타글란딘류를 생 성 하는 5-LO와 COX의 억제능을 측정하였다.
- 감잎 추출물의 생리활성을 측정하기 위하여 DPPH(1, 1-diphenyl-2-picrylhy-drazyl) 라디칼, superoxide 음이온 라디칼 소거능을 측정하고, 항알레르기 효능을 측정하기 위하여 알레르기 관련 염증 매 개 물질 인 류코트리 엔류와 프로스타글란딘류를 생 성 하는 5-LO와 COX의 억제능을 측정하였다. 또한 LPS(lipopoly-saccharide)로 염증을 유도시킨 RAW 264.7 세포에서 세포가 방출하는 NO 생성량의 변화를 조사하여 항염증성 기능의 유무와 정도, 그리고 수동피부아나필락시스(passive cutaneous anaphylaxis, PCA) 억제효능을 측정하여 건강 기능성 식품 원료로서의 유용성을 살펴보고자 하였다.
- 본 연구에서는 현재까지 연구되어진 감잎 추출물 (PLE) 의 추출 방법을 달리하고 그 추출물을 비 특이적 흡착 resin 을 사용하여 부분 정제함으로서 추출물의 활성을 높이고자 하였으며 PLE 와 PLE 의 부문 정제물 (PPLE) 의 페놀성 화합물 및 플라보노이드 함량을 측정하였다. 또한 이들의 항산화제와 항알레르기 개선제로써의 유효성을 알아보기 위해 항산화 효과에 관여하는 DPPH 라디칼 포착효능, superoxide 음이온 라디칼 포착효능과 제 I 형 알레르기 반응 억제 효능에 관여하는 5-LO억제 효능, COX억제효능, NO소거효능 및 수동 피부아나필락시스 억제 효능(PCA)을 측정하였다.
제안 방법
- 7 세포를 분주 후 37oC, 5% CO2에서 24시간 동안 전 배양하였다. 24시간 후 전 배양에 사용된 배지를 제거하고 PLE 와 PPLE 를 DMSO 에 녹인 뒤 DMSO 의 최종농도가 1% 가 되도록 배지로 희석하여 추출물의 농도별(0, 50, 100, 250, 500, 1000 yg/mL)로 각각 37oC, 5% CO2에서 5시간과 24시간 동안 각각 처리하였다. 처리 후 well 당 0.
- 7 세포를 분주 후 5% CO2 항온기에서 24시간 전 배양하였다. 24시간 후, 전 배양에 사용된 배지를 제거하고 PLE와 PPLE 를 DMSO 에 녹인 뒤 DMSO 의 최종농도가 1%가 되도록 배지로 희석하여 추출물의 농도별(0, 50, 100, 250, 500, 1000 ug/mL)로 1시간 동안 처리하였다. 1시간 후 100 ng/ mL의 LPS를 처리하여 24시간 배양하였다.
- 2시간 교반 추출하였다. 2시간 후 추출물을 여과지 (Whatman No. 2)를 사용하여 여과한 후 60oC에서 감압농축 (Rotavapor rotary evaporators, Buchi Co., Flawil, Switzerland) 하여 분말 상태로 준비하고 이를 PLE(Persimmon Leaves Extract)라 명하였다. 또한 PLE의 폴리페놀 함량을 높이기 위하여 부분 정제를 실시하였다.
- 0) 90 yL, 30 yM EDTA 20 yL, 150 yM hematin 20 yL 그리고 시료 20 yL를 혼합하여 25oC에서 5분간 반응시키고 5 mM TMPD 5 yL와 20 mM 아라키돈산 5 yL를 첨가하여 25oC에서 5분간 반응시킨 후 ELISA reader를 사용하여 590 nm에서 흡광도를 측정하였다. COX 억제율(%)은 다음과 같은 식을 이용하여 50% inhibitory concentration(IC5c) 값으로 나타내 었으며 양성 대조군으로 녹차카테킨인 EGCG를 사용하였다. COX 억제율 (%) = [(대조군의 흡광도-실험군의 흡광도)/ 대조군의 흡광도] X100
- 반응 후 상등액을 모두 제거하고 DMSO 150 yL씩을 첨가하고 10분간 상온에서 생성된 formazan 을 모두 녹이고 ELISA reader를 이용하여 570 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. DMSO에 대한 영향을 알아보기 위해 일반 대조군과 1% DMSO에 대한 대조군으로 나누어 실험하였으며, 세포 생존율(%)은 다음과 같은 식을 사용하여 나타내었다. 세포 생존율(%)=(샘플처리군의 흡광도/ 대조군의 흡광도) X100
- ICR 수컷 마우스 양쪽 귀에 anti-DNP IgE(1 ug/ mL)를 10 uL씩 주사하고 47시간 경과 후, PLE 혹은 PPLE를경구 투여하였다. 한 시간 뒤(즉, anti-DNP IgE 주사 48시간경과 후) DNP-albumin 0.
- NO의 농도는 배양액 내의 nitrite 농도를 Griess 반응을 이용하여 측정하는 것으로 대체하였다. DMEM 배지를 이용하여 96 well culture plate에 1x10’ cells/well의 RAW 264.
- PLE 와 PPLE 부터 총 페놀성 화합물과 플라보노이드 함량을 측정하였다. 측정결과 Table 1에서와 같이 PLE는 230.
- PLE와 PPLE에 대한 5-LO 억제 효능 측정은 lipoxygenase inhibitor screening assay kit를 이용하여 실험하였다. 샘플 10 yL에 5-LO(220 units/mL) 90 此와 1 mM linoleic acid 10 yL를 첨가하여 5분간 상온에서 반응시킨 후, 색원체 (chromogen) 100 yL를 가하여 상온에서 5분 동안 반응 시키 고 ELISA reader 490 nm에서 흡광도를 측정하였다.
- PLE와 PPLE에 대한 COX 억제효능은 Reddy 등(24)의 방법을 변형하여 수행하였다. 96 well plate에 한 well당 60 units/mL의 COX-1 이나 30 units/mL의 COX-2를 40 yL씩넣고, 100 mM Tris-HCl buffer(pH 8.
- PLE와 PPLE에 대한 DPPH 라디칼 포착능을 확인하기 위하여 Yasushi 등(23)의 문헌을 변형하여 실험하였다. 2.
- PLE와 PPLE에 대한 superoxide 음이온 라디칼 포착효능측정은 SOD 활성 검출 kit를 사용하였다. 시료 0.
- PLE와 PPLE의 세포에 대한 독성 측정은 MTT [(3-(4, 5-dimethyl thiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide) (Sigma, MO, USA)] 측정으로 분석하였다. 이 방법은 MTT 가 formazan으로 전환되는 것을 측정하는 것으로, DMEM 배지를 이용하여 96 well plate에 1X104 cells/well의 RAW 264.
- Superoxide 음이온 라디칼 포착효능 측정은 xanthine과 xanthine oxidase를 반응시킨 후 nitroblue tetrazolium (NBT)으로 발색하여 측정하였다. Superoxide 음이온 라디칼 포착 효능 측정 결과를 Table 3에서 정리한 바와 같이 PLE와 PPLE의 SC50값은 47.
- 따라서 본 연구에서는 감잎의 항산화 효과와 항알레르기 효능을 확인하고 추출물의 활성을 높이기 위하여 비 특이적 흡착 resin 인 HP-2MG 를 사용하여 부분정제를 실시하였다. 감잎 추출물의 생리활성을 측정하기 위하여 DPPH(1, 1-diphenyl-2-picrylhy-drazyl) 라디칼, superoxide 음이온 라디칼 소거능을 측정하고, 항알레르기 효능을 측정하기 위하여 알레르기 관련 염증 매 개 물질 인 류코트리 엔류와 프로스타글란딘류를 생 성 하는 5-LO와 COX의 억제능을 측정하였다. 또한 LPS(lipopoly-saccharide)로 염증을 유도시킨 RAW 264.
- 비타민 C 는 대표적인 수용성 천연항산화제로 수용성 계에서 생성된 radical 을 포착 소거하는 능력이 매우 강력한 것으로 알려져 있다. 따라서 이후에 이루어진 항알레르기 및 항산화 실험에서도 EGCG 와 비타민 C 를 양성대조군으로 사용하였다.
- , Flawil, Switzerland) 하여 분말 상태로 준비하고 이를 PLE(Persimmon Leaves Extract)라 명하였다. 또한 PLE의 폴리페놀 함량을 높이기 위하여 부분 정제를 실시하였다. 액상의 감잎 추출물을 증류수로 10배 희석하여 에탄올의 농도를 6%로 조정하고 비 특이적 흡착 resin 인 HP-2MG 와 2시간 동안 반응조를 이용하여 교반시켰다.
- 플라보노이드 함량을 측정하였다. 또한 이들의 항산화제와 항알레르기 개선제로써의 유효성을 알아보기 위해 항산화 효과에 관여하는 DPPH 라디칼 포착효능, superoxide 음이온 라디칼 포착효능과 제 I 형 알레르기 반응 억제 효능에 관여하는 5-LO억제 효능, COX억제효능, NO소거효능 및 수동 피부아나필락시스 억제 효능(PCA)을 측정하였다. 그 결과 PLE 와 PPLE 의 페놀성 화합물은 각각 230.
- 마우스 대식세포인 RAW 264.7 세포에 대한 PLE와 PPLE 의 정상세포 보호 및 세포독성을 알아보기 위하여 MTT assay를 수행하였다(Fig. 1). PLE와 PPLE을 농도별 (0, 50, 100, 250, 1000 ug/mL)로 5시간 및 24시간 동안 각각 처리한 결과, 5시간 처리군에서는 PLE와 PPLE, 그리고 추출물의 용매로 사용된 1% DMSO의 대조군 모두에서 세포독성을 보이지 않았고, PLE와 PPLE는 오히려 생존율이 증가함에 따라서 세포의 보호 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
- 2% MTT용액을 20 yL씩 첨가하여 37oC, 5% CO2 배 양기 에서 3시간 동안 반응시켰다. 반응 후 상등액을 모두 제거하고 DMSO 150 yL씩을 첨가하고 10분간 상온에서 생성된 formazan 을 모두 녹이고 ELISA reader를 이용하여 570 nm에서 흡광도의 변화를 측정하였다. DMSO에 대한 영향을 알아보기 위해 일반 대조군과 1% DMSO에 대한 대조군으로 나누어 실험하였으며, 세포 생존율(%)은 다음과 같은 식을 사용하여 나타내었다.
- 또한 PLE의 폴리페놀 함량을 높이기 위하여 부분 정제를 실시하였다. 액상의 감잎 추출물을 증류수로 10배 희석하여 에탄올의 농도를 6%로 조정하고 비 특이적 흡착 resin 인 HP-2MG 와 2시간 동안 반응조를 이용하여 교반시켰다. 2시간 뒤 상등액을 제거한 후 80% 에탄올을 이용하여 흡착 resin에 흡착된 물질을 elution 하였다.
- 총 페놀성 화합물의 함량은 Gutfinger(21) 의 방법을 변형하여 측정하였다. 즉, 시료 1 mL에 2%(w/v) Na2CO3 용액 1 mL를 가하여 3분간 상온에서 반응시킨 후, 50% Folin-Ciocalteu 시 약 0.
- 또한, 플라보노이드는 식물에 널리 존재하는 노란색계열의 색소를 나타내는 약 4000여개의 화합물로 항산화 작용, 순환기계 질환의 예방, 항염증, 항알레르기, 항균, 항바이러스, 지질저하작용, 면역증강작용, 모세혈관강화 작용 등이 보고된 바 있다(28, 29). 페놀성 화합물 및 플라보노이드 함량측정에는 각각 단일물질인 epigallocatechin gallate(EGCG) 와 quercetin을 사용하여 표준곡선을 작성하였다. EGCG는 비만세포의 염증반응 부위로의 이동을 억제하며, 티로 신 키나아제(tyrosine kinase)의 인산화반응을 저해하여 비만세포의 탈과립화를 억제한다.
- ICR 수컷 마우스 양쪽 귀에 anti-DNP IgE(1 ug/ mL)를 10 uL씩 주사하고 47시간 경과 후, PLE 혹은 PPLE를경구 투여하였다. 한 시간 뒤(즉, anti-DNP IgE 주사 48시간경과 후) DNP-albumin 0.25 mg과 Evans blue 1.25 mg 을용 해한 생리식염수 0.25 mL를 꼬리정맥에 주사하여 반응을 일으켰다. 30분 후 경추 탈골하여 치사시킨 다음 양쪽 귀를 제거한 후 제거한 양쪽 귀에 1 N KOH 1mL씩을 넣고 37oC shaking incubator에서 12시간 교반하였다.
대상 데이터
- 1, 1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH), 5-lipoxygenase (5-LO), arachidonic acid, N, N, N', N'-tetramethyl-p-phe-nylenediamine(TMPD), promethazain hydrochloride, hematin, sulfanilamide, N-(1 -naphthyl)ethylenediamide, anti-dinitrophenyl(DNP) IgE, DNP-albumin, 그리고 epigallocatechin gallate(EGCG)는 Sigma사(St. Louis, USA) 에서 구입하였다. Cyclooxygenase-1, cyclooxygenase-2는 Cayman사(Ann Arbor, USA)에서 구입하였다.
- Louis, USA) 에서 구입하였다. Cyclooxygenase-1, cyclooxygenase-2는 Cayman사(Ann Arbor, USA)에서 구입하였다. UV-VIS 흡광계는 Spectronic Genesys 5(Miton Roy Co.
- ICR계 생쥐(수컷, 7주령)는 (주)오리엔트 바이오(경기도 가평)에서 구입하여 본 실험실의 사육실에서 1주간 적응시킨 뒤 실험에 사용하였다. 사육실 온도는 22±2oC, 습도는 55±5% 및 명암은 12시간 주기로 자동 조절하였다.
- 추출에 이용된 감잎은 한약 건재상에서 구입하였다. 감잎 추출물 정제는 Diaion HP-2MG resin(Mitsubishi Chemical Co., Minatoku, 일본)을 사용하였다. 그 이외의 시약은 1급 또는 특급을 사용하였다.
- 샘플 10 yL에 5-LO(220 units/mL) 90 此와 1 mM linoleic acid 10 yL를 첨가하여 5분간 상온에서 반응시킨 후, 색원체 (chromogen) 100 yL를 가하여 상온에서 5분 동안 반응 시키 고 ELISA reader 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과는 50% inhibitory concentration(IC5°) 값으로 나타내었고 양성대조군으로 녹차카테킨인 EGCG 를 사용하였다. 5-LO 억제율(%)은 [(대조군의 흡광도-실험군의 흡광도)/ 대조군의 흡광도] X100 식을 이용하여 IC50값으로 나타내었다.
- DPPH 라디칼 포착능(%)은 100—[(시료를 첨가한 반응 군의 흡광도/ 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도)X 100] 식으로부터 구하였다. 그 결과는 50% scavenging activity con-centration(SC5°) 값으로 나타내었고, 양성대조군으로 녹차 카테킨인 EGCG 와 항산화제로 알려진 비타민 C를 사용하였다.
- Superoxide 음이온 라디칼 포착능 (%)은 100-[(시료를 첨가한 반응군의 흡광도/ 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도)X100] 식으로부터 구하였다. 그 결과는 50% scavenging activity concen-tration(SCs) 값으로 나타내었고, 양성대조군으로 녹차 카테킨인 EGCG 와 항산화제로 알려진 비타민 C 를 사용하였다.
- 마우스의 대 식 세포주인 RAW 264.7 세포는 서울 아산병원(서울특별시 송파구)에서 분양받았으며, 세포배양을 위해 10% FBS과 1% penicillin-streptomycin을 포함하는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) 배지를 사용하였다. 세포는 37oC, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
- 5%(v/v) phosphoric acid] 50 uL를 혼합하여 96 well plates 에서 10분 동안 반응시킨 후 ELISA reader를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정 하 였 다. 양성 대 조군으로 녹차카테 킨 인 EGCG 를 사용하였으며, 표준농도 곡선은 sodium nitrite(NaNO2) 를 이용하여 얻었다. Nitric oxide 소거능(%)은 다음과 같은 식으로 구하였다.
- 2시간 뒤 상등액을 제거한 후 80% 에탄올을 이용하여 흡착 resin에 흡착된 물질을 elution 하였다. 이것을 여과지(Whatman No. 2)를 사용하여 여과한 후 60oC에서 감압농축 하여 분말 상태로 준비하여 PPLE (Partially Purified Persimmon Leaves Extract)라 명 하고, 그 외 실험에 사용하였다.
- , Sunnyvale, USA)모델을 사용하였다. 추출기와 반응조는 Extraction Water Bath 와 일반 반응조 (CHOJALAB사, 화성시, 한국)를 사용하였다. 추출에 이용된 감잎은 한약 건재상에서 구입하였다.
- 추출기와 반응조는 Extraction Water Bath 와 일반 반응조 (CHOJALAB사, 화성시, 한국)를 사용하였다. 추출에 이용된 감잎은 한약 건재상에서 구입하였다. 감잎 추출물 정제는 Diaion HP-2MG resin(Mitsubishi Chemical Co.
데이터처리
- 실험결과는 3회 반복하여 평균 士표준오차 (mean士 SEM) 로 나타냈으며, Student's t「test에 의해 유의성을 검정하여 p<0.05 인 결과를 얻었을 때 유의성이 있는 것으로 판단하였다.
이론/모형
- 7 cells were treated with various concentrations (0, 50, 100, 250, 500, and 1000 ug/mL) of PLE and PPLE for 5 hr and 24 hr. Cell viability was measured by MTT assay. All data were represented as mean ± SEM of three independent experiments.
- PLE 와 PPLE 에 대하여 수동피부아나필락시스 반응 억제효능을 알아보기 위하여 Kim 등의 방법 (25)을 이용하여 실험하였다. ICR 수컷 마우스 양쪽 귀에 anti-DNP IgE(1 ug/ mL)를 10 uL씩 주사하고 47시간 경과 후, PLE 혹은 PPLE를경구 투여하였다.
- 5 mL를 첨가하고 잘 혼합하여 37oC 에서 20분 동안 반응시킨 후, 반응정지액(70 mM sodium dodecyl sulfate) 1 mL를 첨가하여 효소 반응을 정지시킨 다음 560 nm에서 흡광도를 측정하였다. Superoxide 음이온 라디칼 포착능 (%)은 100-[(시료를 첨가한 반응군의 흡광도/ 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도)X100] 식으로부터 구하였다. 그 결과는 50% scavenging activity concen-tration(SCs) 값으로 나타내었고, 양성대조군으로 녹차 카테킨인 EGCG 와 항산화제로 알려진 비타민 C 를 사용하였다.
- Cyclooxygenase-1, cyclooxygenase-2는 Cayman사(Ann Arbor, USA)에서 구입하였다. UV-VIS 흡광계는 Spectronic Genesys 5(Miton Roy Co., Ivyland, USA)모델, ELISA autoreader는 VERSA max(Molecular devices Co., Sunnyvale, USA)모델을 사용하였다. 추출기와 반응조는 Extraction Water Bath 와 일반 반응조 (CHOJALAB사, 화성시, 한국)를 사용하였다.
성능/효과
- PLE와 PPLE을 농도별 (0, 50, 100, 250, 1000 ug/mL)로 5시간 및 24시간 동안 각각 처리한 결과, 5시간 처리군에서는 PLE와 PPLE, 그리고 추출물의 용매로 사용된 1% DMSO의 대조군 모두에서 세포독성을 보이지 않았고, PLE와 PPLE는 오히려 생존율이 증가함에 따라서 세포의 보호 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 24시간 처리군에서는 추출물의 용매로 사용된 1% DMSO의 대조군의 생존율이 약 81.3%로 나타났으며, PLE 가 1000 ug/mL의 농도에서 약 30.0%의 생존율을 보였고 그 이하의 농도에서는 독성이 나타나지 않았다. PPLE는 실험에 사용된 모든 농도에서 독성을 보이지 않았다.
- COX-2에 대한 선택적 저해능을 COX-1의 ICo 값과 COX-2의 IC50값의 비로 나타내 었을 때 감잎 추출물, PPLE 그리고 EGCG가 각각 2.7, 3.3, 1.4로 나타났다. 이는 이전의 연구 결과(34)에서 항알레르기 효능이 우수한 식물소재로 알려져있는 첨차 추출분말보다는 PLE와 PPLE의 COX-2 IC50/ COX-1 IC50의 비가 각각 약 2.
- 9%의 억제효과를 보였다. PLE는 10, 50 ㎎/㎏의 농도에서 각각 22.5%, 22.7%의 억제율을 보여 농도 의존적 이지 않는 결과를 보였으며, PPLEe 10, 50 ㎎/㎏의 농도에서 각각 40.4%, 50.2%의 억제율을 보여 PLE 보다 약 2배가량 우수한 효과를 보였으며 더구나 동일 농도(10 ㎎/㎏)에서 EGCG와 거의 차이가 없는 결과를 보였다(Fig. 3). 이는 PLE와 PPLE가 in uiuo에서 혈관에서 조직으로 색소 누출을 억제하는 것으로 미루어 IgE 로 매개되는 피부 알레르기에 효과가 있음을 나타낸다.
- 0 ppm으로 나타났다. PLE와 PPLE 에 대한 COX-1의 IC50 값은 양성대조군인 EGCG 보다 각각 약 5배, 2.7배씩 떨어지는 양상을 보였다. 따라서 PLE 와 PPLE 는 COX-1의 높은 억제로 인한 부작용을 감소시킬 수 있을 것으로 사료된다.
- 1). PLE와 PPLE을 농도별 (0, 50, 100, 250, 1000 ug/mL)로 5시간 및 24시간 동안 각각 처리한 결과, 5시간 처리군에서는 PLE와 PPLE, 그리고 추출물의 용매로 사용된 1% DMSO의 대조군 모두에서 세포독성을 보이지 않았고, PLE와 PPLE는 오히려 생존율이 증가함에 따라서 세포의 보호 효과가 있음을 확인할 수 있었다. 24시간 처리군에서는 추출물의 용매로 사용된 1% DMSO의 대조군의 생존율이 약 81.
- 5 ppm으로 나타났다. PLE와 PPLE의 5-LO 억제 효능이 단일물질인 EGCG 의 효능에 비교하면 약 4배와 2배 정도 떨어지지만 이전의 연구결과에서 항염증효과가 있음이 알려져 있는 자근, 대추와 같은 천연물의 IC50 값이 각각 195.1 ppm, 206.9 ppm인(36) 것과 비교했을 때 PLE와 PPLE 가 5-LO 를 상당히 효과적으로 저해한다고 할 수 있다.
- 원인이 된다(35). PLE와 PPLE의 5-LO억제효능을 측정한 결과 Table 4와 같이 각각 IC50값이 77.1 ±11.7 ppm, 38.6 ±7.0 ppm으로 나타났고, 양성대조군으로 사용한 EGCG의 경우 18.9 ±5.5 ppm으로 나타났다. PLE와 PPLE의 5-LO 억제 효능이 단일물질인 EGCG 의 효능에 비교하면 약 4배와 2배 정도 떨어지지만 이전의 연구결과에서 항염증효과가 있음이 알려져 있는 자근, 대추와 같은 천연물의 IC50 값이 각각 195.
- Peroxynitrite는 단백질 및 지질의 과산화를 유도하고 세포독성을 일으키는 것으로 알려져 있다. PLE와 PPLE의 NO 소거능 측정 결과 SC50값이 186.5±8.6 ppm과 185.5± 12.0 ppm으로 양성대조군으로 사용된 EGCG의 SC50값(191.35 ±43.9 ppm)보다 낮게 나타나 NO 의 소거에 상당한 효과가 있는 것으로 나타났다 (Fig. 2).
- DPPH 라디칼 포착 효능측정 결과를 Table 2에 나타내었다. PLE와 PPLE의 SC50값은 각각 24.8 ±3.2 ppm, 10.0 ±1.3 ppm이며, 양성대조군으로 사용된 EGCG와 비타민 C의 SC50값은 각각 2.0±0.3 ppm, 4.4±0.4 ppm으로 나타났다. PLE보다 PPLE의 DPPH 라디칼 포착 효능이 증가함으로써 페놀성 화합물이 증가할수록 DPPH 라디칼 소거능이 비례적으로 증가하는 많은 연구들과 동일한 결과를 나타내었다 (32-34).
- 3 ppm의 농도에서 superoxide 음이온 라디칼을 50% 소거하는 것으로 나타났다. PLE와 PPLE의 항알레르기 효능에 관하여 5-LO의 IC50값이 각각 77.1±11.7 ppm, 38.6 ±7.0 ppm으로 양성대조군인 EGCG의 IC50(18.9±5.5 ppm) 보다는 높았지만 PLE 와 PPLE 가 EGCG 와 같은 단일물질이 아니라 천연혼합물임을 감안하였을 때 5-LO 를 비교적 낮은 농도에서 억제하고 있다고 볼 수 있다. 또한, COX-2 의 선택적 저해율을 COX-1과 COX-2의 비율 비교를 통해 나타낸 결과 양성대조군으로 사용한 EGCG 보다는 떨어지는 결과를 나타냈으나 다른 천연물과 비교하였을 때 COX-2 를상당히 선택적으로 저해하고 있음을 확인하였다.
- 발색하여 측정하였다. Superoxide 음이온 라디칼 포착 효능 측정 결과를 Table 3에서 정리한 바와 같이 PLE와 PPLE의 SC50값은 47.6±3.4 ppm, 22.4±3.3 ppm이며, 양성대조군으로 사용한 EGCG와 비타민 C의 SC50값은 각각 5.8±0.2 ppm, 0.7±0.1 ppm으로 나타났다. 이는 PPLE가 순수 정제물인 EGCG 에 비하여 약 3.
- 또한 이들의 항산화제와 항알레르기 개선제로써의 유효성을 알아보기 위해 항산화 효과에 관여하는 DPPH 라디칼 포착효능, superoxide 음이온 라디칼 포착효능과 제 I 형 알레르기 반응 억제 효능에 관여하는 5-LO억제 효능, COX억제효능, NO소거효능 및 수동 피부아나필락시스 억제 효능(PCA)을 측정하였다. 그 결과 PLE 와 PPLE 의 페놀성 화합물은 각각 230.0±19.6 mg/g, 475±38.7 mg/g이 함유되어 있었고, 플라보노이드는 각각 34.8±6.5 mg/g, 78.8±3.6 mg/g 함유되어 있는 것으로 나타났다. 그리고 PLE와 PPLE이 각각 23.
- 6 mg/g 함유되어 있는 것으로 나타났다. 그리고 PLE와 PPLE이 각각 23.8±63.2 mg/g, 10.0±1.3 mg/g의 농도에서 DPPH 라디칼을, 47.6±3.4 ppm, 22.4±3.3 ppm의 농도에서 superoxide 음이온 라디칼을 50% 소거하는 것으로 나타났다. PLE와 PPLE의 항알레르기 효능에 관하여 5-LO의 IC50값이 각각 77.
- PPLE는 실험에 사용된 모든 농도에서 독성을 보이지 않았다. 따라서 PLE 는 5시간 처리군의 실험에 사용된 모든 농도와 24시간 처리 군의 500 ug/mL 농도 이하 농도에서는 생존율에 영향을 주지 않았으며, PPLE 경우 5시간과 24시간 처 리군의 실험에 사용된 모든 농도의 범위에서 세포의 생존율에 영향을 주지 않는다는 사실을 알 수 있었다.
- 7배씩 떨어지는 양상을 보였다. 따라서 PLE 와 PPLE 는 COX-1의 높은 억제로 인한 부작용을 감소시킬 수 있을 것으로 사료된다.
- 이때 IgE 매개 PCA에 대한 억제 작용이 있는 물질은 색소의 조직으로의 누출을 억제하여 대조군에 비하여 누출된 색소양이 적어진다. 따라서 vehicle 만을 투여한 대조군에 비해 양성 대조군으로 사용된 EGCG(10 ㎎/㎏)와 프로메타진 하이드로클로라이드(1 ㎎/㎏)의 경우 각각 49.8%, 51.9%의 억제효과를 보였다. PLE는 10, 50 ㎎/㎏의 농도에서 각각 22.
- 5 ppm) 보다는 높았지만 PLE 와 PPLE 가 EGCG 와 같은 단일물질이 아니라 천연혼합물임을 감안하였을 때 5-LO 를 비교적 낮은 농도에서 억제하고 있다고 볼 수 있다. 또한, COX-2 의 선택적 저해율을 COX-1과 COX-2의 비율 비교를 통해 나타낸 결과 양성대조군으로 사용한 EGCG 보다는 떨어지는 결과를 나타냈으나 다른 천연물과 비교하였을 때 COX-2 를상당히 선택적으로 저해하고 있음을 확인하였다. 마우스의 대식세포인 RAW 264.
- 또한, COX-2 의 선택적 저해율을 COX-1과 COX-2의 비율 비교를 통해 나타낸 결과 양성대조군으로 사용한 EGCG 보다는 떨어지는 결과를 나타냈으나 다른 천연물과 비교하였을 때 COX-2 를상당히 선택적으로 저해하고 있음을 확인하였다. 마우스의 대식세포인 RAW 264.7 세포주를 사용하여 낮은 세포독성과 NO소거에도 우수한 효과가 있음을 확인하였고, 마우스를 이용하여 수동피부아나필락시스 반응 억제 효과도 확인하였다. 이상의 결과에 따르면, 감잎 추출물이 항산화 및 항알레르기 효능을 갖고 있어 알레르기성 비염이나 아토피와 같은 알레르기관련 질병 예방 및 개선 또는 건강식품 원료로서 유효하게 사용될 것이라 생각된다.
- 6 mg/g의 플라보노이드를 함유하는 것으로 나타났다. 일반적인 추출방법에 비해 흡착성 resin에 의해 정제되었을 때 페놀성 화합물은 약 2배, 플라보노이드는 약 2.2배 증가됨을 확인할 수 있었다. Hong 등(32)이 발표한 감잎의 메탄올 추출물의 페놀성 화합물 315.
- 측정하였다. 측정결과 Table 1에서와 같이 PLE는 230.0 ±19.6 mg/g의 페놀성 화합물과 34.8±6.5 mg/g의 플라보노이드를 함유하고, PPLE는 475.5 ±38.7 mg/g의 페놀성 화합물과 78.8±3.6 mg/g의 플라보노이드를 함유하는 것으로 나타났다. 일반적인 추출방법에 비해 흡착성 resin에 의해 정제되었을 때 페놀성 화합물은 약 2배, 플라보노이드는 약 2.
후속연구
- 또한, 호산구를 비롯한 염증세포의 조직 내 침윤은 제 I 형 알레르기 반응이 잠복기를 거친 후기 반응에 발생되는 현상으로 만성적인 코막힘이 나비 특이적 점막 과민성을 일으킨다. 따라서 프로스타글란딘류와 류코트리엔류의 합성, 히스타민 방출 그리고 호산구의 비강 내 침윤에 대하여 억제 활성을 갖는 물질들은 제 I 형 알레르기 예방 및 치료제로 사용될 수 있을 것으로 생각된다.
- 7 세포주를 사용하여 낮은 세포독성과 NO소거에도 우수한 효과가 있음을 확인하였고, 마우스를 이용하여 수동피부아나필락시스 반응 억제 효과도 확인하였다. 이상의 결과에 따르면, 감잎 추출물이 항산화 및 항알레르기 효능을 갖고 있어 알레르기성 비염이나 아토피와 같은 알레르기관련 질병 예방 및 개선 또는 건강식품 원료로서 유효하게 사용될 것이라 생각된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.