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문제 정의
- 따라서 본 연구는 담쟁이 덩 굴로부터 항산화제로서 의 가치 유무를 판단하는 기초자료를 제공하고자 담쟁이 덩굴의 부위별 비효소적 항산화 방어계 및 효소적 항산화 방어계 및 효 소적 항산화 방어 계 의 변화를 조사하였다.
제안 방법
- 음건 세절한 시료 2.0 kg에 메탄올 2000 M을 가하여 7일간 침지시킨 후 여과 농축한 메탄올 추출물을 Fig. 1과 같은 방법으로 분획하였다. 각 부위별 에틸 아세테이트 분획물 유효성분을 검색할 목적으로 silica-gel column (0 3.
- 1과 같은 방법으로 분획하였다. 각 부위별 에틸 아세테이트 분획물 유효성분을 검색할 목적으로 silica-gel column (0 3.5cm x 50cm, 70~230 mesh, Merck)에서 클로로포름 : 메탄올( 8 : 2 v/v)을 이동상으로 사용하여 50 ul씩 분취하고 마지막으로 메탄올 로 용출시킨 것을 TLC 전개를 통해 여러 개의 subfraction_2- 로 나누었다 . Silica-gel column chromatography에서 부위별 로 항산화 활성이 가장 높게 나타난 분획들을 정제하기 위해 Sephadex LH-20 column chromatography 에서 메탄올을 이동상 으로 사용하여 5 ml씩 분취하여 TLC 전개를 통해 여러 개의 분획을 얻었다.
- 5cm x 50cm, 70~230 mesh, Merck)에서 클로로포름 : 메탄올( 8 : 2 v/v)을 이동상으로 사용하여 50 ul씩 분취하고 마지막으로 메탄올 로 용출시킨 것을 TLC 전개를 통해 여러 개의 subfraction_2- 로 나누었다 . Silica-gel column chromatography에서 부위별 로 항산화 활성이 가장 높게 나타난 분획들을 정제하기 위해 Sephadex LH-20 column chromatography 에서 메탄올을 이동상 으로 사용하여 5 ml씩 분취하여 TLC 전개를 통해 여러 개의 분획을 얻었다.
- 항산화물질의 동정을 위하여 GC/MS (Hewlett Packard 6890/5973)을 이용하였으며 , columne Ultra- 2 (Crosslinked 5% PH ME Siloxane), oven 조건은 80 에서 시작하여 분당 5Q씩 250P까지 승온하였으며, 25013에서 10분간 유지하였다. 운반체는 He 가스를 사용하였으며, 유속은 0.
- POD 활성은 pyrogallol (Sig ma, Co# P-0381)을 기질로 사용하고, 0.1 ml 조효소액에 2.9 ml assay buffer 를 첨가하여 420 mn에서 20초간 상온에서 흡광도 변화를 측정하였다.
- 각 부위별 에틸아세테이트 분획물을 실리카겔 컬 럼크로마토그래피에 의해 잎, 줄기, 뿌리에서 각각 5개, 4개, 3개의 분획을 얻은 후 각 분획별 항산화 활 성 을 측정한 결 과( Table 2), 각 부위 의 분획 별 항산화 활성은 차이를 보였다. 잎은 S - 5에서 7.
대상 데이터
- 본 실험에서 비효소적 항산화 방어계 를 조사하고자 사용한 담쟁이 덩 굴(Parthenocisuss tricuspidata PLANCH.)은 경 북 안동시 송천동에서 자생한 것을 2000년 8월 에 채 취 하여 각 부위별로 세척한 다음 세절하여 60P에서 열풍 건조하여 사용하였고, 항산화 효소계 측정을 위해서는 부위별 생체시료를 사용하였다.
- 항산화물질의 동정을 위하여 GC/MS (Hewlett Packard 6890/5973)을 이용하였으며 , columne Ultra- 2 (Crosslinked 5% PH ME Siloxane), oven 조건은 80 에서 시작하여 분당 5Q씩 250P까지 승온하였으며, 25013에서 10분간 유지하였다. 운반체는 He 가스를 사용하였으며, 유속은 0.8 ml/min로 분석하였다.
이론/모형
- SOD 활성은 McCord와 Fridovich(1969)의 방법에 따라 xanthine/xanthine oxydase system을 superoxide radicals의 공급원으로 이용하여 superoxide radicals 에 의한 cytochrome c의 환원 속도를 550 m에서 의 흡광도의 변화를 측정하였다. SOD 활성 1 unit는 25에서 반응을 시작하여 150초간 550 rnn에서 흡광도 변화를 조사하여 xanthine oxidase 활성이 50% 억제 되는것으로 정의하였다.
성능/효과
- 담쟁이덩굴의 각 부위별 에틸아세테이트 분획물 을 DPPH free radical scavenging 방법에 의한 활성을 측정한 결과( Table 1), 잎과 뿌리의 활성은 각각 7.57,7.38 (mg/kg)로 줄기 의 19.7 (mg/kg)에 비해 약 2.5배 이상 높았다. DPPH free radical scavenging 법은 많은 식물 추출물들의 항산화력의 측정에 이용되는데 항 산화제가 안정한 l, l-diphenyl-2-picrylhydrazine (Cotelle 등, 1996; Smith 등, 1987)으로 변환되는 반응 을 이용한 것이다 .
- 실리카겔 컬럼크로마토그래피에 의한 항산화 활성 이 가장 높은 분획을 GC/MS로 분석한 결과( Table 3), Benzoic acid(Gallic acid), benzene, phloroglucinol, 1, 2-dihydroxy-4-( 1 -propyl)benzene 등의 페놀성 화합 물을 분리 동정 하였다.잎의 S-4 분획에는 Xanthosine, Pentanoic acid, 1H-Indole 그리고 N, N'- Dicyclohexylformamidine0] 존재하였고 줄기의 S - 4 분획에서 Benzene, 뿌리의 S-3 분획에서는 2- butenoic acid, pyrazinecarboxamide, propylamine의 물질이 각 분획간에 존재하여 부위간 물질의 차이를 보였다.
- 잎의 S-4 분획에는 Xanthosine, Pentanoic acid, 1H-Indole 그리고 N, N'- Dicyclohexylformamidine0] 존재하였고 줄기의 S - 4 분획에서 Benzene, 뿌리의 S-3 분획에서는 2- butenoic acid, pyrazinecarboxamide, propylamine의 물질이 각 분획간에 존재하여 부위간 물질의 차이를 보였다. phloroolucinol과 1, 2-Dihydroxy-4-( 1 -propyl) benzenee 전부위에 존재함을 확인할 수 있었다.
- 실리카겔 컬럼크로마토그래피에 의한 가장 활성이 높은 분획을 SephadexTM LH-20 column chroma- tography로 정제하여 항산화 활성을 측정해본 결과 ( Table 4), 잎, 줄기 그리고 뿌리에서 매우 활성이 높은 분획을 얻었으며 특히, 뿌리에서는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 분획의 12.39 mg/kg보다 2.3배 높은 활성 분획을 얻었다.
- 부위별 항산화 활성이 가장 높게 나타난 분획을 GC/MS로 분석하여 성분을 분리 동정한 결과( Table 5). 주요 구성물질로 각 부위의 분획별 2~3개의 성분이 분리되었으며 조사된 전부위에서 Benzoic acid 가 분리 동정 되었다. 잎과 줄기에서 4-amino-Benzenemethanol과 123-Benzenetrio이 각각 존재하였으며 뿌리에서는 두 물질 모두 존재함을 확인할 수 있었다.
- 주요 구성물질로 각 부위의 분획별 2~3개의 성분이 분리되었으며 조사된 전부위에서 Benzoic acid 가 분리 동정 되었다. 잎과 줄기에서 4-amino-Benzenemethanol과 123-Benzenetrio이 각각 존재하였으며 뿌리에서는 두 물질 모두 존재함을 확인할 수 있었다. 이러한 페놀성 화합물은 과일이나 채소의 분해시와 녹차, 홍차 및 wine에서 보통 발견되는 화합물로서 항세균, 항알레르기, 항종양 그리고 항암 예방에 효과가 있는 것으로 보고되어 있으며 (Vijaya 등, 1995; Ohmori 등, 1995) 특히, 퇴행성 질병의 발병 빈도를 저하시키고(Goldbohm 등, 1996: Hertog, 1996) 실험적 증거에 의하여 인간의 건강증 진을 위하여 천연생리 화학적 항산화 물질로서 중요한 역할을 하는 것으로 보고되어 있다(Halliwell, 1996; Serafini 등, 1996; Sadzuka 등, 1996; Stoner와 Mykhtar, 1995).
- Benzoic acid(gallic acid), BHA, BHT, ascorbic acid와 flavonoids들과 같은 항산화물질은 강력한 free radical scavenging 활성을 나타내 며 , Benzoic acid, ascorbic acid와 페놀계 화합물인 flavonoids는 천연으로부터 얻을 수 있는 항산화물질이다. 따라서 본 결과에서 검출된 페놀계 화합물인 Benzoic acid, 1, 2, 3-Benzenetriol 그리고 4-amino- Benzenemethano 담쟁이덩굴의 항산화 활성 정도 에 매우 관련이 있는 것으로 생각되어진다. 각 부위별 물질들의 차이는 부위별 구성성분의 차이 및 실리카겔 컬럼 크로마토그래피 의 spot위치 의 차이에 기인한 것으로 사료되며 endogenous 비효소적 항산 화제들은 extracellular와 intracellular 활성 산소종에 대해 주요 방어를 할 것으로 유추되어진다.
- 식물 생체시 료로부터 POD, SOD 활성을 측정한 결과( Table 6), POD 활성은 뿌리와 줄기에서 약 0.85 unit mg/protein으로 비슷하였으나, 잎에서는 거의 활성 이 나타나지 않았다. SOD 활성은 잎, 줄기, 뿌리순으로 높게 나타났고 잎은 뿌리보다 2배 이상의 높은 활성을 보였다.
- 85 unit mg/protein으로 비슷하였으나, 잎에서는 거의 활성 이 나타나지 않았다. SOD 활성은 잎, 줄기, 뿌리순으로 높게 나타났고 잎은 뿌리보다 2배 이상의 높은 활성을 보였다.
- 각 부위에 대한 POD의 활성은 SOD의 활성에 비례 하지 않았으며 또한, DPPH free radical scavenging activity, POD 그리고 SOD의 활성은 뿌리에서 만 free radical scavenging activity와 POD이 활성이 가장 높았고 전체적으로 POD, SOD의 활성과 DPPH free radical scavenging activity는 상관관계를 나타내지 않았다.
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