선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구에서는 천연자원으로부터 MAO 활성 저해작용을 가진 새로운 화합물을 개발하고 이 물질을 항 우울 등의 중추신경계 질환의 치료제로 응용하기 위한 연구의 일환으로 MAO 활성 저해 효과를 나타낸 산사자의 MeOH 엑스로부터 5종의 물질을 분리하였으며, 이 중 quercetin이 유의적인 MAO 활성 저해 효과를 나타내었기에 보고한다.
제안 방법
- Column chromatography용 담체는 silica gel 60(70-230 mesh, Merck) 및 Sephadex LH-20(20-100Pharmacia Fine Chemical Industries Co.)을 TLC plate는 Kieselgel 60 F254 plate(0.2 mm, Merck)를 UV lamp는 Model UVGL-25 (UVR USA)를 사용하였으며, MAO 저해 활성은 fluorescence spectrophotometer(Perkin-Elmer LS50B, USA)을 사용하여 측정하였다. 시약 및 용매는 분석용 특급 또는 1급시약을 사용하였다.
- 0kg을 80% MeOH로 실온에서 3회 반복 추출하여 얻은 추출액을 여과, 감압농축하여 MeOH 엑스(350 g)를 얻었다. 이 MeOH 엑스를 상법에 따라 분획하여 CH2Cl2 엑스(18.5 g), EtOAc 엑스(30.4g) 및 BuOH 엑스(20.4g)를 각각 얻었다. 이 중 MA0 활성 저해작용을 나타낸 CH2Cl2 분획(13.
- 4g)를 각각 얻었다. 이 중 MA0 활성 저해작용을 나타낸 CH2Cl2 분획(13.5 g)에 대하여 CH2Cl2 → McOH 혼액으로 기울기 용리시켜 silica gel column chromatography를 실시하여 6개 (MCl~MC6)의 분획을 얻었다. 다시 MC3을 n-hexane → acetone 혼액으로 기울기 용리시켜 silica gel column chromatography를 반복 실시하여 compound 1(18.
- 5 mg)을 얻었다. 역시 MAO 활성 저해작용을 나타낸 EtOAc 분획(25.4g)에 대하여 Sephadex LH-20 column chromatography (10% MeOH MeOH) 를 시행하여 6개의 분획(EA1 ~EA6)으로 나누고, EA2 분획에 대하여 MCI-gel CHP 20P column chromatography (50% MeOH)를 실시하여 compound 2(22.3 mg)와 compound 3(45.1 mg)을 EA4 및 EA5 분획으로부터 compound 4(21.2 mg)와 compound 5(15.2mg)를 각각 분리하였다.
- Kynuramine (500 μM) 200 μl를 가하여 효소반응을 진행시키고 30분 후 10% ZnSO4 250 μl 1 N NaOH 50μl를 가하여 종결하였다. 반응액을 3,000 x g로 5분간 원심분리하고 상등액 350 μl 에 1 N NaOH 700μl를 가한 다음, 상등액 150 μl를 취하여 반응생성물 4-hydroxyquinoline의 농도를 형광광도계 (Xex/ λem : 315nm/380nm)로 측정하였고, 이를 표준곡선을 사용, 정량하여 MAO 활성을 측정하였다.
- 천연물로부터 MAO 활성 저해 작용물질을 분리할 목적으로, 유의한 활성을 나타낸 산사나무 과실의 메탄올 엑스를 CH2Cl2, EtOAc 및 수포화 BuOH로 용매분획하고, 이들 분획 중 MA0 활성 저해작용을 나타낸 CH2Cl2과 EtOAc의 분획에 대하여 silica gel column chromatography와 Sephadex LH-20 및 MCI-gel CHP 20P column chromatography를 반복 실시하여 5종의 화합물을 순수단리 하였다. 이들 화합물에 대한 각종 물리화학적 성상, 표품과의 비교시험,1H-NMR, 13C-NMR, MS, IR 등의 spectral data를 검토한결과 다음과 같이 구조를 동정하였다.
- 이들 화합물에 대한 각종 물리화학적 성상, 표품과의 비교시험,1H-NMR, 13C-NMR, MS, IR 등의 spectral data를 검토한결과 다음과 같이 구조를 동정하였다.
대상 데이터
- 실험재료 - 2001년 10월에 충북대학교 학내에서 자생중인 산사자를 채집하여 음건한 후 세절하여 실험재료로 사용하였다. 식물표본은 식물학적 감정을 마친 후 충북대학교 약학대학 표본실(CBNU-00126)에 보관하였다.
- 융점 측정기를 사용하였으며 보정하지 않았다. UV는 JASCO V500 UV/VIS spectrophotometer (Model LE 599, U.K.)를, IRe Perkin-Elmer spectrophotometer (Model LE599, U.K.)를, ELMS 는 Hewlett-Packard, MS Engine- 5989A를, E4B-MS 는 JMS HX-110/110A (JEOL, JapaH)를 lH 및 13C-NMRe Bruker (Model AMX-500, Germany)를 사용하여 측정하였다.
데이터처리
- 통계처리 - 실험결과는 동일시료에 대해 반복하여 얻은 결과를 통계처리하여 means±SEM으로 나타내었다. 시료에 의한 효과는 Student's t-test를 사용하여 유의차 검정을 하였다.
- 통계처리하여 means±SEM으로 나타내었다. 시료에 의한 효과는 Student's t-test를 사용하여 유의차 검정을 하였다.
이론/모형
- MAO 활성측정 - MAO의 활성은 Kraml의 방법에 준하여 측정하였다.24) 반응용기에 0.
- 단백질 함량 측정 - 단백질 함량은 표품 bovine serum albumin을 사용하여 Lowry25) 등의 방법으로 측정하였다.
- MAO 효소원의 부분정제 - MAO 시료는 Naoi의 방법에 준하여 부분정제 하였다.23) Mouse를 단두하고 뇌를 분리하여 (8.
성능/효과
- Mass spectrum에서는 molecular ion peak가 m/z 456에서 관찰되었고, refro-Diels Alder frag- mentation에 의한 base peak인 m/z 248 및 m/z 207의 fragmentation과 여기에서 COOH가 떨어진 m/z 203 fragmention이 관찰되어 △12계열의 triterpenoic acid로 추정되었다.26) 1H-NMR spectrume 0.70-1.10 사이에서 7개의 methyl signal 과 δ 5.23에서 olefinic proton이 관찰되었고, δ 3.72에서 J=10.3 Hz의 H-3 methine proton이 관찰되어 OH가 β결합되어 있다고 추정하였으며, δ2.93에서는 J=4.8Hz의 H-18 이 doublet으로 나타나는 점과 13C-NMR spectrum의 C-12, C-13의 olefinic carbon이 δ 125.7 및 δ 138.4에서 나타나는것으로서 urs-12-ene type의 triterpenoic acid 임을 알 수 있었다.2728) 이상의 기기분석 결과 및 문헌29,30)의 비교로 compound 1은 분자식 C30H48O3인 ursolic acid로 확인, 동정하였다.
- Compound 2는 미황색 분말상 결정으로 FeCl3 test에서 록색, Mg-HCl test에서 홍색을 각각 나타냈다. IR spestrum을 보면 3413cm-1에서 OH, 2938 cm-1에서 C-H, 1658cm-1에서 C=O, 1599, 1504cm-1에서 C=C, 1061 cm-1에서 glycosidic OH의 결합을 나타내는 흡수대가 나타났고 UV spectrum을 보면 258 및 359nm에서 흡수극대를 나타내어 flavonol 유도체로 추정할 수 있었다.1H-NMR 스펙트럼 중 aromatic field의 δ6.
- IR spestrum을 보면 3413cm-1에서 OH, 2938 cm-1에서 C-H, 1658cm-1에서 C=O, 1599, 1504cm-1에서 C=C, 1061 cm-1에서 glycosidic OH의 결합을 나타내는 흡수대가 나타났고 UV spectrum을 보면 258 및 359nm에서 흡수극대를 나타내어 flavonol 유도체로 추정할 수 있었다.1H-NMR 스펙트럼 중 aromatic field의 δ6.23 (1H, d, J=1.9 Hz), 6.42 (1H, d, J=1.9Hz)에서 flavonoid A환의 H-6 및 H-8의 전형적인 m-coupling이 관찰되며 , δ6.88 (1H, d, 7=8.3 Hz), 7.58 (2H, dd, 8.3 Hz)에서 B환의 H-5', H-2, 6의 signal을 나타내었으며 , 당의 anomeric proton이 δ 4.37에서 singlet으로 나타나 당이 α체임을 또 다른 당의 anomeric proton0] 85.38 에서 J=7.2 Hz의 doublet으로 나타나 당이 β체임을 각각 추정할 수 있었다. FAB-MS spectrum에서는 m/z 611에서 [M+H]+ ion peak를 m/z 465 및 303에서 각각 hexose 및 methylpentose가 탈락된 fragment ion peak를 관찰할 수 있어 flavonol 모핵에 1개의 methylpeiitose와 1개의 hexose가 결합된 화합물로 추정할 수 있었다.
- FAB-MS spectrum에서는 m/z 611에서 [M+H]+ ion peak를 m/z 465 및 303에서 각각 hexose 및 methylpentose가 탈락된 fragment ion peak를 관찰할 수 있어 flavonol 모핵에 1개의 methylpeiitose와 1개의 hexose가 결합된 화합물로 추정할 수 있었다. 또 당의 결합위치를 알기 위하여 13C-NMR 스펙트럼에서 quercetin과 비교했을 때 C-2가 89.6, C-4가 5 1.5 저자장으로 shift되어 관찰되고, C- 3가 6 2.4으로 고자장 아iif되어 나타나므로 03에 당이 치환되어 glycosylation shift가 일어난 것을 확인할 수 있었다. 또한 δ 177.
- 4에서 C-4'의 carbon signal0] 각각 확인되어 C3 및 C-4' 위치에 proton 이 hydroxyl기로 치환되어 있음을 알 수 있었다. 5101.2에서 glucosee] anomeric carbon signal을 5 100.7에서 rhamnose의 anomeric carbon signal 확인할 수 있었으며, glucosee C- 6”가 667.0으로 57.0 저자장 shift되어 있어 glucose C-6에 rhamnosee} 결합되어 있음을 추정할 수 있었다. 이상의 기기분석 결과 및 문헌31,32)과의 비교로 compound 2는 C27H30O16 (M.
- 0 저자장 shift되어 있어 glucose C-6에 rhamnosee} 결합되어 있음을 추정할 수 있었다. 이상의 기기분석 결과 및 문헌31,32)과의 비교로 compound 2는 C27H30O16 (M.W.=610)의 분자식을 갖는 quercetin-3-O-α-L-rhamno- pyranosyl( W6)-β-D-glucopyranoside 즉, rutin으로 확인, 동정하였다.
- Compound 3은 미적색 결정으로 FeCl3 반응에 양성이며,IR spectrum에서 3282 (OH), 1628 (C=C), 1522, 1471 (aromatic C=C), 820 (aromatic ring)cm-1 등에서 강한 흡수대가 나타나 flavanol 유도체로 추정할 수 있었고, ELMS spectrum에서는 m/z 290에서 [M]+ molecular ion peak를 관찰할 수 있어서 flavan-3-ol로 추정할 수 있었다.1H-NMR spectrum에서는 H-5'의 signal이 δ6.
- 9)의 carbon chemical shift로 보아 2, 3위치는 cis type인 ㈠-epicatechin과 동일한 pattern을 보여주고 있다. 13C-NMR spectrum에서는 carbon sign시이 15개이고, 특히 C-3이 6 64.9에서, C3와 C4가 각각 8 144.5, 5 144.4에서 동정되어 C3와 C4가 OH기로 치환되어 있음을 확인할 수 있었다. 이상의 기기분석 결과 및 문헌33)과의 비교로compound 3은 분자식 (-)-epicatechin으로 확인,동정하였다.
- FAB-MS(positive) spectrum에서는 m/z 465에서 [M+H]+의 molecular ion peak, m/z 303에서 hexose가 탈락된 fragment ion peak를 각각 관찰할 수 있어 quercetin 모핵에 1분자의 hexose가 결합된 화합물로 추정할 수 있었다.1H-NMR spectrum에서는 δ6.24 및 6 6.45에서 J=1.5 Hz인 doublet을 H-6, 8로, 6.86에서 J=8.0Hz인 doublet을 H-5로 동정하여 H-6와 Q-coupling함을 알 수 있었다. δ 7.
- 0Hz인 doublet을 H-5로 동정하여 H-6와 Q-coupling함을 알 수 있었다. δ 7.71에서 H-6'의 proton signal이 J=2.0, 8.0 Hz의 double doublet으로 관찰되었고, δ 7.57에서 H-2의 proton signal이 J=2.0Hz의 doublet으로 관찰되었으며, δ 5.42에서 glucose anomeric proton이 J=7.5 Hz인 doublet signal로 나타나므로 당이 β체임을 알 수 있었다. 13C-NMR spectrum에서는 quercetin과 비교할 때 C-2가 δ9.
- 2 고자장으로 shift되어 관찰되므로 C-3 에 당이 치환되어 glycosylation shift가 일어난 것을 확인할수 있었다. δ177.5에서 C4의 carbonyl기를 관찰할 수 있었고, δ 144.8, δ 148.5에서 C-3', 4' carbon signal이 관찰되어 C-3, 4' 위치의 proton이 hydroxyl기로 치환되어 있음을 알 수 있었다. δ 101.
- 5에서 C-3', 4' carbon signal이 관찰되어 C-3, 4' 위치의 proton이 hydroxyl기로 치환되어 있음을 알 수 있었다. δ 101.8에서 당의 anomeric carbon signal을 확인할 수 있었으며, 당으로부터 기인하는 δ712, δ75.8, δ67.9, δ73.2, δ60.1의 signal이 관찰할 수 있었으며 산가수분해에 의하여 당을 표준품과 같이 TLC를 한 결과 결합한 당이 D-galactose임을 알 수 있었다. 이상의 기기분석 결과 및 문헌31, 32)과의 비교로 compound 4는 분자식quercetin-3-O-β-D-galactopyranoside 즉, hyperoside으로 확인, 동정하였다.
- l3C-NMR spectrum에서는 5 90-165 사이에서 14개의 sp2 carbon signal이 관찰되었다. 이상의 기기분석 결과 및 문헌34,35)과의 비교로 compound 5는 분자식 C15H10O7인 quercetin으로 확인, 동정하였다.
- 40%, 98%로 나타났다. 이들 분획 중 활성이 인정된 CH2Cl2 분획의 MC3 및 EtOAc 분획의 EA2, EA4, EA5에대하여 5개의 단일성분을 분리, 정제하여 MAO 활성에 미치는 영향을 검색한 결과 이 중 compound 5는 유의적인 MAO 활성 저해작용을 나타내었다(Table Ⅰ).
- Compound 1은 ursolic acid, compound 2는 quercetin-3- O-α-L-rhamnopyranosyl( 1 → 6)-β-D-glucopyranoside, compound 3은 (-)-epicatechin, compound 4는 quercetin-3-O-β-D-galactopyranoside 그리고 compound 5는 quercetin으로 확인 동정하였으며, 이들 성분에 대한 MA0 활성 저해작용을 검색한 결과 quercetin이 유의적인 MA0 활성억제 효과를 나타내었다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.