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문제 정의
- 따라서 본 연구는 자돈의 장 상피세포에 특이적으로 달라붙은 후 증식하여 독소를 생성하며 장상피를 자극시킴으로써 설사를 야기시키는 장내 병독성 박테리아균의 부착용 단백질을 당근에 도입하여, 설사병 방지에 사용되는 항생제를 대체하는 고부가가치 복합사료첨가제 생산을 위한 당근개발을 목적으로 한다.
- 병독성 대장균 (K88ac)의 pilingene을 분리하여 이를 당근에 도입한 후 이의 발현을 유도하여 자돈 설사병 예방 및 치료를 위한 당근경구백신 개발을 목적으로 하였다. 형질전환을 통해 494 세포주를 확립하였고, western 분석을 통하여 0.
제안 방법
- 21 일령 된 3원 교잡종 (Duroc XYorkshire XLandrace) 자돈을 사용하였으며, 동결건조된 형질전환 당근과 비형질전환 당근은 투여사료의 2%, 1 mg의 재조합 pilin 항원을 사료에 첨가하여 14일간 자유채식시켰다. 5반복으로 하여 0일, 7일, 14 일, 21일, 28일에 혈액을 채취하여 ELISA를 수행하였으며 14 일간 처리사료를 급여한 후 모든 돼지에게 장독성 대장균K88 (5xl0'cfu/mL)을 2 mL씩 8시간 간격으로 경구로 공격 접종하여 설사를 유발시켰다 (Figure 1).
- 5 cm 간격으로 자른 후 M* S 배지 [5 mg/L 2, 4-D, 3% sucrose가 첨가된 MS 배지 (Murashige and Skoog 1962)]에서 2일간 80 rpm에서 진탕하였다. 2일간 M9 배지 (Manistis et al. 1982)에서 키운 (AgmbacferzWm tumefacions) LBA 4404를 M* S 배지에 resuspension시킨 것과 2일간 진탕한 당근 배축을 암 조건에서 10분간 공동배양한 후 식물절편을 air dry하여 MS'배지에서 2일간 25℃, 80 rpm 암조건에서 배양한 후 carbenicillin 400 mg/L와 kanamycin 100 mg/L이 포함된 M* S 고체배지(0.7% agarose)에서 형질전환된 개체만을 선발하여 얻어진 캘러스는 MS 배지 (2, 4-D를 제거하고 2.5% sucrose가 첨가된MS 배지)에 치상하여 식물체 재분화를 유도하였다.
- 서 비형질전환 당근 5 g, positive control로서 재조합된 pilin항원 10ug 실험구로 항원 과발현 계통 (M1-17)과 저발현 계통 (Y19-2)의 형질전환 당근 조직을 1 g, 3 g, 5 g씩 투여하였다. 5반복으로 0일, 7일, 14일, 21일 경구 투여하였으며 투여 후 28일에 심장 채혈하였다.
- 14일간 자유채식시켰다. 5반복으로 하여 0일, 7일, 14 일, 21일, 28일에 혈액을 채취하여 ELISA를 수행하였으며 14 일간 처리사료를 급여한 후 모든 돼지에게 장독성 대장균K88 (5xl0'cfu/mL)을 2 mL씩 8시간 간격으로 경구로 공격 접종하여 설사를 유발시켰다 (Figure 1). ETEC K88ac를 공격 접종한 후 2일과 4일째 되는 날에 Sherman 등 (1983)의 방법에 의하여 fecal score (정상적인 분 : 0, 연변 : 1, 묽은 설사 : 2 그리고 심한 설사 : 3)를 측정하였으며, 자돈 보호 효과의 정 량적 판정을 위하여 평균 일당 증체량 [average daily gain(ADG): {(시험종료일 체중 - 시험개시일 체중)/시험 기간}/마리수]을 측정하였다.
- E. coli 재조합 백신으로 이용하고, western과 ELISA 분석을 통한 pilin 단백질 발현 유무와 정도를 확인하기 위하여 E.coli expression system 인 pET32 vector에 sub-cloning한 후pilin 단백질을 대량 발현시켰다. 형질전환된 celle ODe에서 0.
- K88ac pilin gene (adhesion gene, gblM25302)의 염기배 열을 바탕으로 primer (5': GTGGATATCAAGGGGTTTA, 3': CATGCTAGGTTCAGCGGAGCX 제작한 후 genomic DNA PCR [template 1 ng, lx reaction buffer, 0.2 mM dNTP, 100 pmol 5' primer, 100 pmol 3' primer, Taq polymerase 10 u (Bionix); 94℃ 7분, 94℃ 1 분, 57℃ 1 분, 72℃ 1 분, 72℃ 5분, 30 cycles]을 수행하여 870 bp의 해당 유전자를 분리하였다. PCR cloning된 pilin genee 식물형질전환용 vector인 pGA 748에 구축하였고 Freeze-thaw 방법 (Gelvinetal.
- Polyclonal antibody를 생산하기 위하여 E.coli에서 발현시킨 100 ug의 pilin 단백질을 Freund's adjuvant (Gibcobrl)를22G needle에 연결된 주사기에 넣어 섞은 후 토끼의 피하에 2주 간격으로 3회 주사한 후 심장 채혈하였고 얻어진 혈청은 동결 건조하여 -70℃ 에서 보관하였다.
- 6이 되면 최종농도가 1 mM이 되도록 IPTG를 넣고 1시간 동안 키워서 thioredoxin과 결합된 pilin 단백질을 대량발현시켰다. pET system manual (Novagen)의 insoluble protein 추출 방법에 의하여 단백질을 추출한 후 SDS-PAGE하여 원하는 단백질band를 homogenizer로 곱게 분쇄하고 diffusion buffer (50 mMTris-ClpH8.0, 0.1%SDS)에 넣어 4℃에서 16시간 이상 진탕하여 gel로부터 단백질을 추출하였다. 4℃, 12000 rpm에서 10분간 원심분리하여 상층액 만을 회수하였고 4배의 aceton을 넣어 -20℃에서 16시간 이상 침전시킨 후 다시 원심분리하여 얻어진 pellet을 PBS (Phosphate-Buffer Saline) buffer에 녹였다.
- 당근백신의 투여를 통한 설사병으로부터의 자돈 보호 효과를 정량적으로 판정하기 위해 당근백신을 급여한 14일 동안, 각 처리구 간 평균 일당 증체량 (ADG)을 조사하였다. 그 결과, 형질전환 당근백신 섭취시 비형질전환 당근을 투여하거나, 재조합 백신을 투여한 자돈에 비해 평균 60 g 이상 높은 차이를 보였다.
- 이들 세포주 중에서 J1-15가 가장 많은 항원 발현을 보였으나 정상 식물체로 분화가 되지 않아 백신 식물 개발을 위해서는 부적합하였다. 따라서 백신식물 재생에 활용될 세포주를 선발하기 위하여, 식물조직 내 발현되어 축적된 병원균 항원의 양과 식물체 수준에서의 생장 속도 및 정상 발육을 기준으로 비교적 우수한 M1-17과 Y14-1 을 선발하여 대량생산 체계를 구죽하였다.
- 또한 시험사료를 14일간 연속 급여한 후, 장독성 대장균K88ac(5xl0'cfu/mL)을 2 mL씩 8시간 간격으로 경구로 공격 접종한 후 2일과 4일에 Sherman 등 (1983)의 방법에 의하여 fecal score (정상적 인 분 : 0, 연변 : 1, 묽은 설사 : 2, 심 한 설사 : 3)를 측정하였다 (Table 3). 측정한 결과 비형질전환 당근을 섭취한 대조구 1 마리에서 fecal score 3 level의 심한 설사가 발생하였고, 다른 처리구에서는 설사가 유도되지 않았다 위 실험에서 관측한 증체량의 차이를 고려해 볼 때 외관상 측정한 설사의 정도 외에 내부적으로 소화기관에 미치는 영향의 차이가 존재할 것으로 생각된다.
- PBST로 7회 washing 후 획득된 항혈청을 dilution buffe로 희석하여 37℃에서 2시간 반응시켰고, secondary antibody는 anti-mouse IgG-AP conjugate(Promega)를 1:5,000의 비율로 PBST에 희석하여 사용하였다. 반응이 끝난 plate는 NPP (p-nitrophenyl phosphate, phosphate substrate tablet, Sigma) substrate buffer를 사용하여 15분~30분간 상온 암조건에서 발색반응을 수행한 후 5 M NaOH를 사용하여 반응을 억제시키고 microtiter plate reader (V-max, Molecular Devices)로 405 nm에서 조사하였다.
- 03 kDa의 K88ac pilin 단백질이 전체단백질의 30% 를 차지하였다. 발현시 킨 단백 질은 gel elution한 후 토끼의 피하에 주사하여 antiserum을 제작하였다. 재조합 pilin 백신을 대 량 생산하기 위하여 insoluble protein 추출방법을 사용하여 K88ac pilin 단백질이 70% 이상이 되도록 추출하고 대 량 발현시킨 단백질은 PBS에 녹인 후 BCA방법으로 단백질 양을 측정하여 경구 투여시켰다.
- 분리된 유전자는 CaMV 35S promoter에 의해 지속적 발현이 가능한 pGA748 에 크로닝 하여 binary vector system을 구축하였으며, 이를 Agrobacterium tumefaciens LBA4404에 형질전환 시 켰다 (Figure 2).
- controls. 서 비형질전환 당근 5 g, positive control로서 재조합된 pilin항원 10ug 실험구로 항원 과발현 계통 (M1-17)과 저발현 계통 (Y19-2)의 형질전환 당근 조직을 1 g, 3 g, 5 g씩 투여하였다. 5반복으로 0일, 7일, 14일, 21일 경구 투여하였으며 투여 후 28일에 심장 채혈하였다.
- 유전자도입이 확인된 당근 유식물체의 pilin 단백질 발현을 확인하기 위하여, 대조구와 형질전환체의 전체 단백질을 추출한 후 제작된 pilin polyclonal a* ntibody 이용하여 western을 시행하였다. 그 결과 Jl-15, Ml-17, Y7-1, Y14-1 4계통에서 28.
- 발현시 킨 단백 질은 gel elution한 후 토끼의 피하에 주사하여 antiserum을 제작하였다. 재조합 pilin 백신을 대 량 생산하기 위하여 insoluble protein 추출방법을 사용하여 K88ac pilin 단백질이 70% 이상이 되도록 추출하고 대 량 발현시킨 단백질은 PBS에 녹인 후 BCA방법으로 단백질 양을 측정하여 경구 투여시켰다.
- 쥐를 대상으로 당근 경구 투여시 상응하는 항체 생성과 이를 위한 최적 항원농도 등의 지표를 파악하기 위하여, 1주 간 격으로 pilin 단백질 과발현 형질전환 당근 (M1-17) 및 저발현 형질전환 당근 (Y19-22)과 비형질전환 당근, 대장균에서 생산 한 재조합 pilin 백신을 4회 경구 투여한 후 채취한 혈청을 ELISA 분석하였다. 자유채식 그룹 내의 5마리 개별 쥐의 차이를 고려하여 최고 및 최저치의 결과를 제외한 3마리의 평 균값을 취하였을 때 형질전환 당근 (Y19-22, M1-17) 3 g 투여 시 10ug의 재조합 pili 백신을 경구 투여한 것에 비해 다소 높은 항체 생성을 나타냈으며 5 g 경구 투여시 저발현 계통인 Y19-22은 투여량이 많아짐에 따라 항체 생성이 더 이상 유의적으로 증가하지 않았다.
- 추출된 당근 total protein은 SDS-PAGE를 이용하여 전기 영동 한 후 Trans-Blot Cell (Bio-Rad)을 이용하여 70V에서 2시간 동안 nitrocellulose membrane (S&S)에 blotting하였다. Membrane은 TBST (100 mM Tris pH 8.
- 항생제 저항성을 통해 선발된 세포주 중 체세포 배발생 단계에 있는 54계통을 대상으로 한 PCR을 통해 조사 세포주의 97%에서 pilin 유전자 도입을 확인하였다 (Figure 3). 유전자도입이 확인된 당근 유식물체의 pilin 단백질 발현을 확인하기 위하여, 대조구와 형질전환체의 전체 단백질을 추출한 후 제작된 pilin polyclonal a* ntibody 이용하여 western을 시행하였다.
대상 데이터
- Mouse는 21 일령된 specific pathogene free (SPF) BALB/c(대한바이오링크)를 사용하였으며, 시험재료는 형질전환 당근. 비형질전환 당근, 재조합 pilin 항원을 유지사료 (삼양) 및 녹말과 혼합 후 pelleting하여 40℃ incubator에서 3일간 건조하였다.
- pGApili를 포함하는 Agrobacterium tumefaciens LBA4404를 5품종 당근의 배축 절편과 공동배양 후, 선발배지로부터 494개의 형질전환된 캘러스 세포주를 얻었다. 본 실험에서 사용한 당근 품종에 따른 형질전환율은 조춘5촌, 여름5촌, 한여름 5촌, 대풍5촌, 그리고 만산5촌의 순으로 높았으며 1년간의 계대배양을 통한 세포주의 퇴화율 및 안정적 체세포배 발생률을 비교할 때 여름5촌, 조춘5촌, 대풍5촌, 만산5촌, 그리고 한여름 5촌의 순으로 우수하였다 (Table 1).
- 실험 재료는 단국대학교 생명자원과학부 육종번식학 실험실에서 분양 받은 E. coli K88ac를 사용하였으며, 당근 품종은 대풍 5촌 (D; 중앙종묘), 만산5촌 (M; 중앙종묘), 조춘5촌 (J; 중앙종묘), 여름5촌 (Y; 서울종묘), 한여름5촌 (H; 농우종묘)을사용하였다.
- 위한 당근경구백신 개발을 목적으로 하였다. 형질전환을 통해 494 세포주를 확립하였고, western 분석을 통하여 0.1 ~4 ug/g의 pilin 단백질 발현을 확인하였으며 백신식물 생산에 적합한 세포주 2종 (Ml-17, Y14-1)을 선발하여 포장생산 및 임상실험에 적용하였다. 쥐를 대상으로 당근 경구 투여시 병원균 항체 생성 여부와 면역 유도를 위한 최적 농도 지표를 파악하기 위하여 1 주 간격으로 형질전환 당근 1 g, 3 g, 5 g을 경구투여 한 결과 백신 당근 3g 투여시 10 ug의 재조합 pilin 백신을 경구 투여한 것에 비해 다소 높은 항체 생성을 나타냈으며 3g의 분량이 쥐 면역 유도를 위한 적정량으로 확인하였다.
데이터처리
- 형질전환 식물조직 내 발현된 pilin 단백질의 정량을 위해 BCA 방법 (Sigma)으로 정 량된 재조합 pilin을 포함한 western 분석 결과를 Melanielll program (Genebio)으로 비교하였다.
이론/모형
- Coligan 등 (1992) 의 Indirected ELIS A 방법에 준하여 분석하였다. 순수분리한 pilin 단백질을 lOjUg/mL가 되도록carbonate-bicarbonate buffer (pH 9.
- 5반복으로 하여 0일, 7일, 14 일, 21일, 28일에 혈액을 채취하여 ELISA를 수행하였으며 14 일간 처리사료를 급여한 후 모든 돼지에게 장독성 대장균K88 (5xl0'cfu/mL)을 2 mL씩 8시간 간격으로 경구로 공격 접종하여 설사를 유발시켰다 (Figure 1). ETEC K88ac를 공격 접종한 후 2일과 4일째 되는 날에 Sherman 등 (1983)의 방법에 의하여 fecal score (정상적인 분 : 0, 연변 : 1, 묽은 설사 : 2 그리고 심한 설사 : 3)를 측정하였으며, 자돈 보호 효과의 정 량적 판정을 위하여 평균 일당 증체량 [average daily gain(ADG): {(시험종료일 체중 - 시험개시일 체중)/시험 기간}/마리수]을 측정하였다.
- 2 mM dNTP, 100 pmol 5' primer, 100 pmol 3' primer, Taq polymerase 10 u (Bionix); 94℃ 7분, 94℃ 1 분, 57℃ 1 분, 72℃ 1 분, 72℃ 5분, 30 cycles]을 수행하여 870 bp의 해당 유전자를 분리하였다. PCR cloning된 pilin genee 식물형질전환용 vector인 pGA 748에 구축하였고 Freeze-thaw 방법 (Gelvinetal. 1988)을 통하여 Agrobacterium tumefaciens LBA4404에 형질전환하였다.
- Thomas 등 (1989)의 방법에 준하여 당근형질전환을 수행하였다. 당근 종자는 70% 에탄올에 30초간 4회, 상업용 표백제 (유한락스) 용액에 20분간 표면 살균하고 멸균증류수로 3회수세한 후 0.
성능/효과
- 유전자도입이 확인된 당근 유식물체의 pilin 단백질 발현을 확인하기 위하여, 대조구와 형질전환체의 전체 단백질을 추출한 후 제작된 pilin polyclonal a* ntibody 이용하여 western을 시행하였다. 그 결과 Jl-15, Ml-17, Y7-1, Y14-1 4계통에서 28.9 kDa 의 band를 확인할 수 있었으며 Melanielll program을 통한 분석을 통해 0.1 ~4"g/g 범위의 농도로 pilin 단백질의 축적을 확인하였다 (Figure 4). 이들 세포주 중에서 J1-15가 가장 많은 항원 발현을 보였으나 정상 식물체로 분화가 되지 않아 백신 식물 개발을 위해서는 부적합하였다.
- Pilin 단백 질을 pET32 E. coli expression system을 이용하여 발현시킨 결과 IPTG처리 1시간 후 thioredoxin (17.38 kDa) 과결합한 46.03 kDa의 K88ac pilin 단백질이 전체단백질의 30% 를 차지하였다. 발현시 킨 단백 질은 gel elution한 후 토끼의 피하에 주사하여 antiserum을 제작하였다.
- 처리구 간 평균 일당 증체량 (ADG)을 조사하였다. 그 결과, 형질전환 당근백신 섭취시 비형질전환 당근을 투여하거나, 재조합 백신을 투여한 자돈에 비해 평균 60 g 이상 높은 차이를 보였다. 이는 이유 후의 생육이 가장 왕성한 시기에 자돈설사병이 미치는 영향을 반영한 것으로 형질전환당근의 투여를 통해 증체량을 유지해 준 것으로 생각된다.
- 또한 K88의 다른 serotype 인 K88ab, K88ad pilin gene과 아미노산 배 열 수준에서 95% 이상의 상동성을 확인함으로써 K88ac pilin gene으로부터 유래된 경구백신이 K88ab 및 K88ad 병원체 대항 백신으로서 이용이 가능할 것으로 판단되었다. 또한 K88ac pilin gene의 codon usage를 확인한 결과 당근에서 고 빈도로 사용되어지는 codon으로 구성되어 있어 K88ac pilin gene이 당근내에서 높은 수준으로 발현될 수 있을 것으로 판단하였다.
- 얻어진 유전자는 sequenc-ing-g- 통하여 DNA 수준에서 K88ac pilin gene (adhesion gene)과 100%의 homology를 확인하였다. 또한 K88의 다른 serotype 인 K88ab, K88ad pilin gene과 아미노산 배 열 수준에서 95% 이상의 상동성을 확인함으로써 K88ac pilin gene으로부터 유래된 경구백신이 K88ab 및 K88ad 병원체 대항 백신으로서 이용이 가능할 것으로 판단되었다. 또한 K88ac pilin gene의 codon usage를 확인한 결과 당근에서 고 빈도로 사용되어지는 codon으로 구성되어 있어 K88ac pilin gene이 당근내에서 높은 수준으로 발현될 수 있을 것으로 판단하였다.
- 형질전환된 캘러스 세포주를 얻었다. 본 실험에서 사용한 당근 품종에 따른 형질전환율은 조춘5촌, 여름5촌, 한여름 5촌, 대풍5촌, 그리고 만산5촌의 순으로 높았으며 1년간의 계대배양을 통한 세포주의 퇴화율 및 안정적 체세포배 발생률을 비교할 때 여름5촌, 조춘5촌, 대풍5촌, 만산5촌, 그리고 한여름 5촌의 순으로 우수하였다 (Table 1).
- coli K88ac로부터 PCR을 통해 870 bp의 K88ac pilingene을 분리하였다 (결과 미제시). 얻어진 유전자는 sequenc-ing-g- 통하여 DNA 수준에서 K88ac pilin gene (adhesion gene)과 100%의 homology를 확인하였다. 또한 K88의 다른 serotype 인 K88ab, K88ad pilin gene과 아미노산 배 열 수준에서 95% 이상의 상동성을 확인함으로써 K88ac pilin gene으로부터 유래된 경구백신이 K88ab 및 K88ad 병원체 대항 백신으로서 이용이 가능할 것으로 판단되었다.
- 쥐를 대상으로 당근 경구 투여시 병원균 항체 생성 여부와 면역 유도를 위한 최적 농도 지표를 파악하기 위하여 1 주 간격으로 형질전환 당근 1 g, 3 g, 5 g을 경구투여 한 결과 백신 당근 3g 투여시 10 ug의 재조합 pilin 백신을 경구 투여한 것에 비해 다소 높은 항체 생성을 나타냈으며 3g의 분량이 쥐 면역 유도를 위한 적정량으로 확인하였다. 자돈에 대한 백신당근 경구 투여시 자돈 설사병 보호 효과를 정량적으로 구명하기 위하여 분석한 자돈의 일당 증체량은 형질전환 당근 투여시 평균 60g 이상 더 높은 증체량을 보였으며, 질병방제 효과를 구명하기 위하여 장독성 병원균을 인위 접종한 결과 대조구에서만 fecal score 3의 심각한 설사를 확인하였다. 본 연구를 통해 개발된 당근백신은 효율적 투여 방법 등에 대한 후속 실험을 통하여 산업적 이용 가능성이 탐색될 예정이다.
- 쥐를 대상으로 당근 경구 투여시 상응하는 항체 생성과 이를 위한 최적 항원농도 등의 지표를 파악하기 위하여, 1주 간 격으로 pilin 단백질 과발현 형질전환 당근 (M1-17) 및 저발현 형질전환 당근 (Y19-22)과 비형질전환 당근, 대장균에서 생산 한 재조합 pilin 백신을 4회 경구 투여한 후 채취한 혈청을 ELISA 분석하였다. 자유채식 그룹 내의 5마리 개별 쥐의 차이를 고려하여 최고 및 최저치의 결과를 제외한 3마리의 평 균값을 취하였을 때 형질전환 당근 (Y19-22, M1-17) 3 g 투여 시 10ug의 재조합 pili 백신을 경구 투여한 것에 비해 다소 높은 항체 생성을 나타냈으며 5 g 경구 투여시 저발현 계통인 Y19-22은 투여량이 많아짐에 따라 항체 생성이 더 이상 유의적으로 증가하지 않았다. 따라서 3 g의 분량이 본 실험에 사용한 쥐에게 면역 유도를 위한 적정량으로 확인하여 후속되는 자돈실험에 사용할 경구백신의 양을 정하는 데에 활용하 였다 (Figure 5).
- 1 ~4 ug/g의 pilin 단백질 발현을 확인하였으며 백신식물 생산에 적합한 세포주 2종 (Ml-17, Y14-1)을 선발하여 포장생산 및 임상실험에 적용하였다. 쥐를 대상으로 당근 경구 투여시 병원균 항체 생성 여부와 면역 유도를 위한 최적 농도 지표를 파악하기 위하여 1 주 간격으로 형질전환 당근 1 g, 3 g, 5 g을 경구투여 한 결과 백신 당근 3g 투여시 10 ug의 재조합 pilin 백신을 경구 투여한 것에 비해 다소 높은 항체 생성을 나타냈으며 3g의 분량이 쥐 면역 유도를 위한 적정량으로 확인하였다. 자돈에 대한 백신당근 경구 투여시 자돈 설사병 보호 효과를 정량적으로 구명하기 위하여 분석한 자돈의 일당 증체량은 형질전환 당근 투여시 평균 60g 이상 더 높은 증체량을 보였으며, 질병방제 효과를 구명하기 위하여 장독성 병원균을 인위 접종한 결과 대조구에서만 fecal score 3의 심각한 설사를 확인하였다.
- : 3)를 측정하였다 (Table 3). 측정한 결과 비형질전환 당근을 섭취한 대조구 1 마리에서 fecal score 3 level의 심한 설사가 발생하였고, 다른 처리구에서는 설사가 유도되지 않았다 위 실험에서 관측한 증체량의 차이를 고려해 볼 때 외관상 측정한 설사의 정도 외에 내부적으로 소화기관에 미치는 영향의 차이가 존재할 것으로 생각된다. 특별히 설사 정도가 낮은 이유는 본 실험에서 돼지의 다양한 평가를 위해 2주간 사육하는 과정에서 발생한 돼지의 성숙도로 인한 것으로 여겨진다.
후속연구
- 자돈에 대한 백신당근 경구 투여시 자돈 설사병 보호 효과를 정량적으로 구명하기 위하여 분석한 자돈의 일당 증체량은 형질전환 당근 투여시 평균 60g 이상 더 높은 증체량을 보였으며, 질병방제 효과를 구명하기 위하여 장독성 병원균을 인위 접종한 결과 대조구에서만 fecal score 3의 심각한 설사를 확인하였다. 본 연구를 통해 개발된 당근백신은 효율적 투여 방법 등에 대한 후속 실험을 통하여 산업적 이용 가능성이 탐색될 예정이다.
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