선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 있다./19)본연구팀이 진행하고 있는 피부질환 치료제 및 미백제 개발의 일환으로서 본 연구에서는 소목의 부탄올 추출물이 멜라닌 생성에미치는 영향을 알아보기 위하여 B16/F10 melanoma 세포에 부탄올 추출물을 처리하고 tyrosinase 활성 및 melanin 양을 측정한 결과 유의한 효과를 보였기에 보고하는 바이다.
제안 방법
- 검액조제 - 시료로 사용한 소목의 부탄올 추출물은 DMSO에 녹인 후, 세포에 투여하기 전에 0.22 皿 pore 여과지로 여과 멸균하여 실험농도에 알맞게 조정한 다음 사용하였다.
- MTT Assay - 3-(4, 5-Dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetra - zolium bromide(MTT) 정량은 Mosmann의 방법加)을 변형하여실시하였다. 부탄올 추출물을 처리한 후 세포를 48 시간 배양한후 상층액을 버리고 당일 제조한 500 gg/m/ MTT를 배양 용기당 1 m/씩 넣어 은박지로 포장한 후 3 시간 동안 배양하였다.
- 부탄올 추출물을 처리한 후 세포를 48 시간 배양한후 상층액을 버리고 당일 제조한 500 gg/m/ MTT를 배양 용기당 1 m/씩 넣어 은박지로 포장한 후 3 시간 동안 배양하였다. 살아 있는 세포는 MB 반응하여 보라색 불용성 formazan 침전물이 형성되었으며 이것을 용해시키기 위하여 상층액을 버리고 10% DMSO를 200 W씩 넣고 15 분간 실온에서 방치한 후 ELISA reader로 570 nm에서 흡광도를 측정하여 대조군과 비교하였다.
- Bypan blue 검사 - 대조군과 실험 군의 각 well에 0.05% trypsine-0.02% EDTA 용액을 가하여, 각 well에서 세포를 분리수거하였다. 이 분리 수거한 세포를 PBS로 2회 세척한 후 0.
- 02% EDTA 용액을 가하여, 각 well에서 세포를 분리수거하였다. 이 분리 수거한 세포를 PBS로 2회 세척한 후 0.02 m/와 동량의 0.4%(w/v) trypan blue를 잘 섞은 다음 2분 후 hemocytometer에 넣고 광학현미경을 이용하여 trypan blue에 염색되지 않고 살아 있는 세포수를 측정하였다.
- 형태학적 변화 - B16/F10 melanoma 세포를 각 well당 lx io5 개씩 넣고 24시간 동안 세포를 안정화시킨 후 부탄올 추출물을농도별로 첨가하여 48시간 배양한 다음 위상차 현미경(Diaphot 300, Nikon, Japan)을 이용하여 100배율하에서 대조군과 실험군의 형태학적 변화를 관찰하였다.
- 10% DMSO가 첨가된 1 N NaOH 용액을 200 ill 첨가하고 80℃에서 1시간 동안 용해하였으며, 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 멜라닌 양은 합성 멜라닌 (Sigma Co.)을 사용하여 작성된 표준 직선에서 구하고, 실험군의 멜라닌 양은 대조군의 멜라닌 양에 대한 백분율로 계산하였다.
- 소목의 세포증식에 미치는 영향 - 부탄올 추출물이 B16/F10 meznoma 세포의 증식에 미치는 영향을 알아보기 위하여 부탄올 关출물을 0.01 μg/m/에서 50 ng/m/까지 다양한 농도로 세포배양배지에 처리하고, 세포를 48 시간 배양한 후에 MTT 측정방법을 이용하여 세포의 증식을 관찰하였다. Fig.
- 그러나 10 阻成 농도부터는 서서히 증식이 억제되는 경향을 보였으며 추출물의 처리농도가 증가함에따타 통계학적으로 유의성 있게 세포증식이 억제되는 경향을 보여추 었다. 또 다른 실험 방법으로서 trypan blue 용액을 이용하여 시포의 생존율을 비교하였다. MTT 측정시와 동일한 농도로부1村冬 추출물을 처리하고 trypan blue 용액에 염색되지 않은 살아 7 는 세포 수를 조사해본 결과 대조군에 비교하여 실험군에서느 처리농도에 의존적으로 세포 생존율이 통계학적으로 유의성 R 게 감소하는 경향을 보였다(Fig.
- 발견된다. 그러므로 부탄올 추출물에 노출된 B16/F10 melanoma 세포의 증식이 감소한 이유가 세포사멸에 기인흐)는 것인지를 알아보기 위하여 B16/F10 melanoma 세포에 부탄올 추출물을 농도별로 처리하고 48시간이 지난 후에 형태학적 변화를 confocal 현미경으로 대조군과 실험군을 비교하여 관찰하였다. 그 결과 저 농도의 처리군에서는 대조군과 비교하0 큰 변화를 관찰할 수 없었다.
- 합성하는데 있어서 주요 효소로 작용한다.23) 본 연구에서는 부탄올 추출물이 멜라닌 합성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 세포에 부탄올 추출물을 0.1 暦同에서 40 姒航 다양한 농도로 처리하고 48시간 배양한 후 tyrosinase 활성도를 먼저 측정하였다. Fig.
- 생성물의 중합반응에 의해 이루어진다.24)부탄올 추출물이 in vitro 상태에서 멜라닌 합성에 미치는 영향을 직접 확인하기 위하& 최종산물인 멜라닌 양을 측정하였다. B16/F10 melanoma 세포에 부탄올 추출물을 0.
- 24)부탄올 추출물이 in vitro 상태에서 멜라닌 합성에 미치는 영향을 직접 확인하기 위하& 최종산물인 멜라닌 양을 측정하였다. B16/F10 melanoma 세포에 부탄올 추출물을 0.1 |ig血/에서 40 μg/ml의 다양한 농도로 거리하고 48 시간 배양한 다음 멜라닌 생성농도를 측정하였다. Fig.
- 소목。피부의 멜라닌 색소 형성에 어떠한 영향을 주는지를 연구하기 위호}여 B16/F10 melanoma 세포에 소목의 부탄올 추출물을 다양한 농도로 처리한 후 세포의 증식, 형태적 변화, 멜라닌 양의 변화 및 tyrosinase 활성도를 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다.
- 멜라닌 양 측정 - 멜라닌 양은 Hosoi21) 등의 방법을 변형하여 사용하였다. 세포를 배양하여 PBS로 2회 세척한 후 원심분리하여 세포 침전물을 만들었다.
대상 데이터
- 세포배양 -B16/F10 melanoma 세포는 C(& 세포배잉:기 (37℃, 5% CO, 에서 10% fetal bovine serum(Gibco Co.)°l 포함된 DMEM 배지를 사용하였다. 여기에 penicillin-streptomycin (Sigma Chemical Co, USA) 100 LU.
데이터처리
- 통계방법 - 실험결과는 평균士표준편차로 표시하였으며 , 각 실험군을 대조군에 대한 백분율로 나타내었다. 각 군간의 통계적유의성에 대한 검증은 Students t-test를 이용하였다.
- 대조군에 대한 백분율로 나타내었다. 각 군간의 통계적유의성에 대한 검증은 Students t-test를 이용하였다.
이론/모형
- Tyrosinase 촬성도 측정 -Tyrosinase 활성도는 Matinez- Esparza22)의 방법에 의하여 측정하였다. 각 well의 세포를 원심분리하여 세포 침전물을 만들고, 100 他의 세포 용해액(1% Triton X-100, 10 mM sodium phosphate, 0.
성능/효과
- 2에서 보는 바와 같이, 부탄올 추출물에 의한 세포의 증식은 5 μ刎 이하의낮븐 농도에서는 대조군에 비해 약간 증가하였으나 유의할만한변화를 나타내지 않았다. 그러나 10 阻成 농도부터는 서서히 증식이 억제되는 경향을 보였으며 추출물의 처리농도가 증가함에따타 통계학적으로 유의성 있게 세포증식이 억제되는 경향을 보여추 었다. 또 다른 실험 방법으로서 trypan blue 용액을 이용하여 시포의 생존율을 비교하였다.
- 또 다른 실험 방법으로서 trypan blue 용액을 이용하여 시포의 생존율을 비교하였다. MTT 측정시와 동일한 농도로부1村冬 추출물을 처리하고 trypan blue 용액에 염색되지 않은 살아 7 는 세포 수를 조사해본 결과 대조군에 비교하여 실험군에서느 처리농도에 의존적으로 세포 생존율이 통계학적으로 유의성 R 게 감소하는 경향을 보였다(Fig. 3). 이러한 결과는 MTT 측亏 결과와 실험방법상의 차이점으로 약간의 수치상에 차이점은 : 지만 세포의 증식억제 및 생존율 감소의 경향은 매우 잘 일치흐-그 있음을 보여주었다.
- 3). 이러한 결과는 MTT 측亏 결과와 실험방법상의 차이점으로 약간의 수치상에 차이점은 : 지만 세포의 증식억제 및 생존율 감소의 경향은 매우 잘 일치흐-그 있음을 보여주었다. 이상의 결과를 종합해 볼 때 소목의부탄을 추출물은 B16/F10 melanoma 세포의 증식을 억제시킴을알 4 있었다.
- 이러한 결과는 MTT 측亏 결과와 실험방법상의 차이점으로 약간의 수치상에 차이점은 : 지만 세포의 증식억제 및 생존율 감소의 경향은 매우 잘 일치흐-그 있음을 보여주었다. 이상의 결과를 종합해 볼 때 소목의부탄을 추출물은 B16/F10 melanoma 세포의 증식을 억제시킴을알 4 있었다. 일반적으로 외부 자극 물질에 대한 세포반응 결과로 조군에 비하여 실험군의 세포 수가 줄어드는 현상이 어떠한 W인에 의한 것인지를 조사해 볼 필요가 있다.
- 그 결과 저 농도의 처리군에서는 대조군과 비교하0 큰 변화를 관찰할 수 없었다. 그러나 처리농도가 높아 질수록 대조군에 비하여 실험군에서의 세포 밀도는 점차 감소하였으며 세포의 크기는 오히려 약간 커졌고 수지상 돌기의 형태가 나타나면서 길이가 약간 길어짐을 관찰할 수 있었다(Fig. 4). 이러한 결과는 높은 농도의 부탄올 추출물이 B16/F10 melanoma 세포의 성장을 억제시키고 세포의 분화를 촉진하는 것을 보여준다.
- 4). 이러한 결과는 높은 농도의 부탄올 추출물이 B16/F10 melanoma 세포의 성장을 억제시키고 세포의 분화를 촉진하는 것을 보여준다. 그러나 세포사멸의 특징인 세포막 외부 융기의 돌촐 현상은 관찰할 수 없었고 배양^지속에 세포사멸이 유도된 부유세포도 또한 관찰할 수 없었다.
- 0 ng/mZ에서는 28%, 10 ng/m;에서는 39%, 20 |丄以1血에서는 50%의 감소율을 보였다. 그 이상의 처리 농도에서는 tyrosinase의 활성도가 더 이상 감소하지 않고 20 |ig/m/ 농도에서와 마찬가지로 지속되는 결과를 보여주었다. 결국 추출물의 처리 농도가 증가함에 따라 tyrosinase 활성도는 대조군에 비하여 모두 통계적으로 유의성 있게 감소하였다.
- 5 pgE까지는 처리 농도가 증가함에 따라 멜라닌 생성이 대조군에 비하여 실험군에서 약간 증가되는 경향을 보였으나 통계적인 유 2성은 없었다. 그러나 1 μ血 이상에서는 처리농도가 증가함어 따라 멜라닌 생성이 감소하기 시작하여 20 pg/m/에서는 32%, 30 tig/mH서는 42%, 40 題/m/에서는 47%의 감소율을 보여 즈출물 처리 농도에 따른 멜라닌의 합성이 감소되는 경향을 보였으며 그 결과 또한 통계학적인 유의성이 관찰되었다. 이러한 결과는 부탄올 추출물에 노출된 B16/F10 melanoma 세포의 in v.
- 그러나 1 μ血 이상에서는 처리농도가 증가함어 따라 멜라닌 생성이 감소하기 시작하여 20 pg/m/에서는 32%, 30 tig/mH서는 42%, 40 題/m/에서는 47%의 감소율을 보여 즈출물 처리 농도에 따른 멜라닌의 합성이 감소되는 경향을 보였으며 그 결과 또한 통계학적인 유의성이 관찰되었다. 이러한 결과는 부탄올 추출물에 노출된 B16/F10 melanoma 세포의 in v.tro tyrosinase 활성도 변화의 결과와 매우 잘 일치함을 보여츠었다.
- 증가 등에 의해서 이루어진다. 본 연구의 결과를 종합해 볼때, 1J16/F10 melanoma 세포에 부탄올 추출물을 처리하면 농도가 궁가함에 따라 대조군에 비하여 tyrosinase 활성도와 멜라닌생성이 모두 감소하는 경향을 보여 주었다. 이런 현상은 tyrosinase가 멜라닌합성에 관여하는 주요한 효소로 작용함을 보여주고 기존의 보고된 연구와 잘 일치한다.
- 1. 부탄올 추출물이 5 μg/mZ 농도까지는 세포증식이 의미있는차이는 없었으나 10 μ以岭도 이상에서는 유의성있게 세포증식이 억제되고 세포분화는 촉진되었다.
- 2. Tyrosinase 활성도는 부탄올 추출물의 처리농도가 증가함에 농도 의존적으로 tyrosinase 활성도가 감소하였다.
- 3. 멜라닌 생성은 tyrosinase 활성도와 마찬가지로 0.5 |ig/m/ 까지는 유의성 없이 증가 되었고 그 이상의 농도에서는 멜라닌생성이 유의성 있게 감소하였다.
- 결론적으로 소목의 부탄올 추출물은 B16/F10 melanoma 세포의 증식을 억제하면서 동시에 멜라닌화도 억제시킨다.
후속연구
- 즉, 외부 자극물冬이 세포독성에 의한 사멸 세포수의 증가로 세포수의 감소가 일어나는지 또는 세포주기의 진행이 방해되어 세포분열의 정지로 세포 증식의 감소가 유도되는지 고려해 볼 수 있다. 그러므로 본 연구에서도 대조군에 비교하여 부탄올 추출물에 노출된 B16/ F10 melanoma 세포의 숫적인 감소가 어떠한 원인에 의한 것인지를 조사해 볼 필요가 있다.
- 세포의 성장이 일시적으로 또는 영구적으로 정지되는 시기로는 크게 2가지 즉 G1 checkpoint와 G2 checkpoint로 구분할 수 있으며세포주기 진행과 관련된 유전자의 변화가 유도되어진다. 부탄올추출물에 노출된 B16/F10 melanoma 세포의 경우도 세포주기의정지가 일어난다면 DNA농도를 결정함으로서 어느 시기에 영향을 받는지 차후 결정할 수 있을 것이다.
- 결국 추출물의 처리 농도가 증가함에 따라 tyrosinase 활성도는 대조군에 비하여 모두 통계적으로 유의성 있게 감소하였다. 이러한 결과는 부탄올 추출물이 tyrosinase의 활성을 억제시킴으로서 차후 멜라닌합성에 관여하는 여러 신호기전을 정상적으로 진행시키지 못 할 것으로 생각된다. 그러므로 부탄올 추출물을 처리한 후 B16/F10 세포에서 멜라닌합성의 최종산물인 멜라닌의 농도를 측정해 보면 tyrosinase의 멜라닌합성 관여 정도를 확인할 수 있을 것이다.
- 이러한 결과는 부탄올 추출물이 tyrosinase의 활성을 억제시킴으로서 차후 멜라닌합성에 관여하는 여러 신호기전을 정상적으로 진행시키지 못 할 것으로 생각된다. 그러므로 부탄올 추출물을 처리한 후 B16/F10 세포에서 멜라닌합성의 최종산물인 멜라닌의 농도를 측정해 보면 tyrosinase의 멜라닌합성 관여 정도를 확인할 수 있을 것이다.
- 이런 현상은 tyrosinase가 멜라닌합성에 관여하는 주요한 효소로 작용함을 보여주고 기존의 보고된 연구와 잘 일치한다. 또한 소목의 부탄올추출물에 노출된 B16/F10 melanoma 세포는 고농도에서 세포성장기 억제되면서 세포분화가 유도되고 있는 점으로 미루어 tyrcsinase의 기능이 세포증식과 관련되어 있음을 추측하게 하며앞으로 이 부분에 대한 연구가 계속적으로 필요하다고 본다. 아울러 고농도의 추출물이 처리된 세포 내에서는 멜라닌합성이라는 쿨질대사의 과정 중 다른 여러 신호기전의 경로에 관여하는요소들S 있겠지만 최소한 tyrosinase 활성도의 절대값이 감소됨으토 인해 최종산물인 멜라닌의 합성을 감소, 억제시키는 작용에 그-여하는 것으로 사료된다.
- 아울러 고농도의 추출물이 처리된 세포 내에서는 멜라닌합성이라는 쿨질대사의 과정 중 다른 여러 신호기전의 경로에 관여하는요소들S 있겠지만 최소한 tyrosinase 활성도의 절대값이 감소됨으토 인해 최종산물인 멜라닌의 합성을 감소, 억제시키는 작용에 그-여하는 것으로 사료된다. 소목의 부탄올 추출물에 함유된활犬룰질의 분리 및 구조를 밝히고 활성물질에 의한 멜라닌 생성으 반응경로를 규명하는 연구가 진행됨으로서 소목이 미백제치료에 활용될 수 있을 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.