[논문]엉겅퀴 추출물의 항산화성, 항돌연변이원성 및 항암활성 효과

이희경; 김주성; 김나영; 박상언; 김명조; 유창연

엉겅퀴 추출물의 항산화성, 항돌연변이원성 및 항암활성 효과
Antioxidant, Antimutagenicity and Anticancer Activities of Extracts from Cirsium japonicum var. ussuriense KITAMURA 원문보기

韓國藥用作物學會誌 = Korean journal of medicinal crop science, v.11 no.1, 2003년, pp.53 - 61

이희경 (강원대학교 농업생명과학대학 식물응용과학부) , 김주성 (강원대학교 농업생명과학대학 식물응용과학부) , 김나영 (경희대학교 식품영양학과) , 박상언 (캐나다 캘거리대학) , 김명조 (강원대학교 농업생명과학대학 식물응용과학부) , 유창연 (강원대학교 농업생명과학대학 식물응용과학부)

초록
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엉겅퀴 부위별 메탄을 추출 수율을 구한 결과 뿌리 및 잎 추출물은 10% 정도의 수율을 보였으나 줄기 추출물은 2.8%의 낮은 수율을 보였다. 항산화활성 실험 결과 부위별 ethyl acetate 분획물과 butanol분획물에서 강한 항산화 활성을 보였으며, 특히 뿌리의 ethyl acetate 분획물$(RC_{50}:11{\mu}g/m{\ell})$과 butanol 분획물$(RC_{50}:14{\mu}g/m{\ell})$, 잎의 butanol 분획물$(RC_{50}:15{\mu}g/m{\ell})$에서 대조구인 ${\alpha}-tocopherol(RC_{50}:12{\mu}g/m{\ell})$이나 $BHA(RC_{50}:14{\mu}g/m{\ell})$정도의 항산화활성을 보였다. 곰팡이에 대한 포자발아 억제시험에서는 전반적으로 물분획물에서 우수한 활성을 나타냈다. Yeasts에 대한 실험에서는 ethyl acetate 분획물에서 대조구와 유사한 활성을 나타냈다. 박테리아에 대한 항균시험은 역시 ethyl acetate 분획물에서 활성을 나타냈다. Ames test결과 $MNNG(0.4{\mu}g/plate)$의 경우 S. typhimurium TA100 균주에서 시료농도 $1000{\mu}g/plate$에서 핵산 분획물이 88.18%로 가장 높은 억제효과가 나타났다. $4NQO(0.15{\mu}g/plate)$에 대한 S. typhymurium TA98 균주에서 시료농도 $1000{\mu}g/plate$에서는 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 에칠아세테이트 분획물이 77, 75.8%의 억제효과를 나타냈으며, TA100 균주에서도 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 에칠아세테이트 분획물이 72.5, 74.3%의 억제효과를 나타냈다. $Trp-P-1(0.15{\mu}g/plate)$을 사용한 S. typhimurium TA98 균주에서는 시료농도 $1000{\mu}g/plate$에서 엉겅퀴 뿌리 추출물$(1000{\mu}g/plate)$에서 82.25%의 가장 높은 억제효과를 보였으며, TA100균주의 경우, 시료농도 $1000{\mu}g/plate$에서 부탄을 분획물에서 77.75%의 가장 높은 억제효과를 보였다. 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 용매 극성을 이용한 분획물을 대상으로 암세포주에 대한 증식 억제 효과를 실험한 결과, A549, Hep3B, MCF-7 세포주에서 메탄올 추출물이 가장 우수한 억제효과를 나타내었으며 인간유래의 정상 간세포 293에 대하여 시료농도에 따른 세포독성 효과는$1000{\mu}g/ml$ 시료 첨가 시 암세포에 대하여 대부분 60% 전후의 억제율을 보이는데 반해 293에 대해서는 25% 이하의 생육억제율을 보였다. 이는 암세포에 대한 높은 억제효과에 비해 정상세포에 대해서는 비교적 낮은 독성효과를 나타냄을 알 수 있었다.

Abstract ▼ AI-Helper

Cirsium japonicum var. ussuriense were extracted with methanol and then fractionated with nhexane, EtOAc and BuOH to get active fractions. And their antioxidant and antimicrobial activities in each fraction were determined. Ethyl acetate and butanol fraction of Cirsium japonicum var. ussuriense showed strong antioxidant activities, but hexane fraction did not show any activities. But in the antimicrobial test, Ethyl acetate fraction showed strong antimicrobial activities except to Aspergillus awamori, Asperigillus niger. Especially, Ethyl acetate fraction showed the strongest activities against Bacillus subtilis. And aqueous fraction showed the strongest activities against Cladosporium herbarum, Hypocrea nigricans. This study was performed to determine the antimutagenic and cytotoxic effect of Cirsium japonicum var. ussuriense methanol extract on Salmonella typhimurium TA98, TA100 and cancer cell lines using Ames test and cytotoxicity assay, respectively. Cancer cell lines include human lung carcinoma(A549), human breast adenocarcinoma(MCF-7) and human hepatocellular carcinoma (Hep3B). Futher fractionations with hexane, ethyl acetate, butanol and water from methanol extract of Cirsium japonicum var. ussuriense were performed to obtain effective fraction, methanol extract showed 60.14% inhibition effect on the mutagenesis induced by MNNG against TA100, while 77% and 72.5% inhibition was observed on the mutagenesis induced by 4NQO against TA98 and TA100, respectively. and methanol extract showed 82.25% and 73.7% inhibitory effect on the mutagenesis induced by Trp-P-1 against TA98 and TA100, respectively. methanol extract showed the strongest effect against A549, MCF-7 and Hep3B at the same concentration compared to those of other fration.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

따라서 우리나라 산야에서 존재하며 예부터 식용으로 이용되고 있는 산채류인 엉겅퀴의 생리활성 기능 탐색 작업의 일환으로 엉겅퀴 부위별 추출물과 그 분획물을 대상으로 항산화 활성, 항미생물 활성, 직접 및 간접 변이원에 대한 항돌연변이 효과 및 암세포 증식 억제 효과를 검토하고자 하였다.

제안 방법

A549, MCF-7 세포주는 RPMI(Gibco; Grand Island, NY) Medium 1640 복합배지(U 당 RPMI Ipack, NaHCCb 2g, Hepes 2g, gentamycin sulfate 0.057g, serum 10%(v/v), pH 7.0~7.2)를, Hep3B 세포주는 DMEM(Dulbeco' s Modified Eagle Medium, IS 당 DMEMlpack, NaHCCX 2g, Hepes 2g, gentamycin sulfate 0, 057g, serum 10%(v/v), pH 7.0~7.2)를, 그리고 293 세포주는 MEM(Minimum Essential Medium, 1ℓ 당 RPMI Ipack, NaHCOs 2g, Hepes 2g, gentamycin sulfate 0.057g, serum 10%(v/v), pH 7.0~7.2)를 이용하여 10% fetal bovine serum(Inteigen, Purchase, NY)을 첨가하여 37℃, 5% CO^₂에 적응시켜 각각 배양시켰다.
이것을 37℃에서 30분간 예비배양하였다. Histidine/biotin이 첨가된 45 ℃ 의 top agar를 2㎖ 씩 각 tube에 붓고 3초간 vortex하고 minimal glucose agar plate상에 도말하고 평판 고화시켜 37℃에서 48시간 배양하여 생긴 복귀 돌연변이(his+ revertant colony)수를 측정하여 돌연변이원성의 유무를 판정하였다.
그 여과액을 얻어 현미경으로 관찰하면서 1×10⁶의 포자가 관찰될 때까지 희석한 후 96 well micro assay plate 에 100㎕씩 분주하였다. 각각의 시료를 lOOOppm에서 8ppm 정도까지 serial 2-fold dilution method로 제조하여 30℃에서 암배양하면서 24시간이 경과한 다음 현미경으로 포자발아가 저해되는 최저활성농도(MIC)를 측정하였다.
virens등을 사용하였다. 곰팡이 배양용 PDB Slant에 곰팡이 포자발아 저해시험용 배지(glucose 0.2%, yeast extract 0.1%, NazHPO . 12HzO 0.37%, citric acid 0.1%) 2㎖를 첨가하여 유리봉으로 상기 곰팡이 포자를 분리시키고 이를 다시 gauze로 여과하였다. 그 여과액을 얻어 현미경으로 관찰하면서 1×10⁶의 포자가 관찰될 때까지 희석한 후 96 well micro assay plate 에 100㎕씩 분주하였다.
엉겅퀴를 부위별로 세분화한 후 MeOH에 일주일간 침적시켜 3회 반복 냉침 추출하여 각각의 메탄올 추출물을 얻었다. 메탄올 추출물을 증류수에 현탁시킨 후 n-hexane, EtOAc, BuOH 순으로 용매분획을 실시하였으며, 3 반복하였다. 위에서 얻은 각 분획을 감압농축하여 핵산, 에칠아세테이트, 부탄올 및 물 분획물을 각각 얻었다.
Trp-PT을 사용하였다. 미리 건열 멸균시킨 glass cap tube에 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 분획물을 각각 50㎕ 첨가한 다음 대사 활성물질이 필요한 경우에는 실험실에서 제조한 S-9 mix를 250㎕씩 각각 첨가하였다. 여기에 하룻밤 배양된 균주를 100㎕씩 주입한 후, 0.
본 실험에 사용한 엉겅퀴의 뿌리 추출물 및 분획물에 대한 돌연변이원성 유무를 확인하기 위하여 실험에 널리 이용되고 있는 Salmonella typhimurium TA98과 TA100 을 사용하여 Ames test를 실시하였다.
, 1980)를 이용하였다. 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 분획물을 미리 건열 멸균시킨 glass cap tube에 각각 50㎕씩 가하고 여기에 미리 TA culture배지(Difco nutrient broth 0.8g+NaCl 0.5g+증류수 100㎖에서 하룻밤 배양된 균주 100㎕를 가한 다음 0.2M sodium phosphate buffeKpH 7.4)로 전체량이 700 ㎕가 되도록 하였다. 이것을 37℃에서 30분간 예비배양하였다.
메탄올 추출물을 증류수에 현탁시킨 후 n-hexane, EtOAc, BuOH 순으로 용매분획을 실시하였으며, 3 반복하였다. 위에서 얻은 각 분획을 감압농축하여 핵산, 에칠아세테이트, 부탄올 및 물 분획물을 각각 얻었다. Salmonella typhimunum TA98과 TA 100은 미국 캘리포니아 대학의 Ames 교수로부터 제공받아 사용하였다.
, 1993)을 이용하였다. 유리 시험관에 4㎖의 메탄올을 넣고 시료 화합물을 농도별 (1.5~30㎕)로 첨가한 다음 상기 DPPH (0.15mM) 용액을 1㎖ 첨가하여 실온에서 30분간 반응시키고 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 이 때 RC⁵⁰(㎍/㎖)은 화합물을 첨가하지 않은 대조군의 값을 50% 감소시키는 화합물의 농도를 나타냈으며, 기존의 항산화제인 o-tocopherol 및 BHA와 비교하였다.
15mM) 용액을 1㎖ 첨가하여 실온에서 30분간 반응시키고 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 이 때 RC⁵⁰(㎍/㎖)은 화합물을 첨가하지 않은 대조군의 값을 50% 감소시키는 화합물의 농도를 나타냈으며, 기존의 항산화제인 o-tocopherol 및 BHA와 비교하였다.
4)로 전체량이 700㎕가 되도록 하였다. 이것을 20분간 예비배양한 다음 histidine/biotin 이 첨가된 45℃의 top agar를' 2㎖씩 각 tube에 붓고 3초간 vortex하고 minimal glucose agar plate상에 도말하고 평판 고화시켜 37℃에서 48시간 배양하여 생긴 복귀돌연변이(his+ revertant colony)수를 즉정하여 돌연변이원성의 유무를 판정하였다.
시료를 96 well micro assay plate의 제 1번 구에 넣고 조제된 균체 현탁액을 분주하여 2배씩 희석하여 사용하였다. 이것을 27℃에서 24시간 동안 암 조건에서 배양하면서 세균의 증식을 육안으로 관찰하였다. 항균 활성은 세균의 생육을 억제하는 최저농도(MKMo: minimum inhibitoiy concentration)# 즉정하였다(Kim et al.
한편 실험에 사용된 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 분획물과 돌연변이 유발물질의 농도는 예비실험(Maron & Ames, 1983) (dose reponse 및 독성검사)을 통하여 결정하였다.

대상 데이터

위에서 얻은 각 분획을 감압농축하여 핵산, 에칠아세테이트, 부탄올 및 물 분획물을 각각 얻었다. Salmonella typhimunum TA98과 TA 100은 미국 캘리포니아 대학의 Ames 교수로부터 제공받아 사용하였다. 폐암 세포주인 A549(lung carcinoma, human), 유방암 세포주인 MCF-7(breast adenocarcinoma, human), 간암 세포주인 Hep3B (hepatocellular carcinoma, human), 인간 유래의 정상 간세포주인 293(human embryo liver)을 Korea Cell Line Bank (KCLB)로부터 구입하여 실험실에서 배양하면서 실험에 사용하였다.
돌연변이 유발원으로는 직접 돌연변이원인 4-ritroquinoline -l-oxide(4NQO), N' -methyl- N' -nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG)는 Sigma사(USA)로부터 구입하였고, 간접 돌연변이 원인 3-amino-l, 4-dimethyl-5H-pyrido-(4, 3- b)indole(Trp-P-l) 그리고 기타시약은 일본 和光純藥 특급시약을 구입하였다. 이들 변이원 물질은 DMSO(Aldrich chemical Co.
또한, 곰팡이에 대한 포자발아 억제 시험은 피검균으로 Aspergillus awamori, Aspeiigillus niger, Cladospoiium herbarum, Hypocrea nigricans, Penicillium citrinum, Trichoderma virens등을 사용하였다. 곰팡이 배양용 PDB Slant에 곰팡이 포자발아 저해시험용 배지(glucose 0.
박테리아에 대한 항균시험은 Gram positive bacteria로는 패혈증, 화농성질환을 일으키는 Bacillus cereus, 고초균인 Bacillus subti]is, 화농성질환 병원균이며 식중독 원인균인 Staphylococcus aureus를 gram negative bacteria로는 식품오염의 지표균인 Escherichia coh, 식중독 미생물인 Salmonella typhimuhum, 세균성 폐염을 일으키는 Klebsiella pneumonia를 사용하였다. Bacillus cereus에 대한 항균실험에서는 ethyl acetate 분획물에서 활성을 나타냈으며, Bacillus subtilis의 경우 ethyl acetate 분획물에서 대조구와 유사한 활성을 보였으며 뿌리 시료에서는 MeOH 추출물과 hexane 분획물에서도 우수한 활성을 보였다.
, 1996)에 따라 조사하였다. 세균에 대한 항균 시험은 피검균으로 Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Klebsiella pneumonia, Staphylococcus aureus, Salmonella typhimuiium를 이용하였으며, 효모에 대한 항균 시험에서는 피검균으로 Candida albicans, Pichia jadinif를 이용하였다. 피검균을 PDB배지 10㎖를 넣은 직경 25mm 시험관에 접종하여 37 ℃ 에서 12시간 동안 진탕 배양(rpm 100 정도)하여 얻은 배양액을 PDB 배지에 100배로 희석하여 항균 시험에 사용하였다.
실험에 사용한 엉겅퀴(Cirsium japonicum var. ussuriense)는 전남 고흥 야산에서 채취하여 실험에 이용하였다. 엉겅퀴를 부위별로 세분화한 후 MeOH에 일주일간 침적시켜 3회 반복 냉침 추출하여 각각의 메탄올 추출물을 얻었다.
엉겅퀴 뿌리 추출물 및 분획물의 세포독성을 규명하기 위하여 임세포주(A549, Hep3B, MCF-7)를 이용하였다. 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 용매 극성을 이용한 분획물을 대상으로 암세포주에 대한 세포독성을 실험한 결과(Table 4), 폐암세포주인 A549세포에서 메탄올 추출물이 70.
3333px;">' -methyl- N' -nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG)는 Sigma사(USA)로부터 구입하였고, 간접 돌연변이 원인 3-amino-l, 4-dimethyl-5H-pyrido-(4, 3- b)indole(Trp-P-l) 그리고 기타시약은 일본 和光純藥 특급시약을 구입하였다. 이들 변이원 물질은 DMSO(Aldrich chemical Co., USA)에 녹여 실험에 사용하였다.
Salmonella typhimunum TA98과 TA 100은 미국 캘리포니아 대학의 Ames 교수로부터 제공받아 사용하였다. 폐암 세포주인 A549(lung carcinoma, human), 유방암 세포주인 MCF-7(breast adenocarcinoma, human), 간암 세포주인 Hep3B (hepatocellular carcinoma, human), 인간 유래의 정상 간세포주인 293(human embryo liver)을 Korea Cell Line Bank (KCLB)로부터 구입하여 실험실에서 배양하면서 실험에 사용하였다.
항돌연변이 실험에 사용된 발암물질은 MNNG, 4NQO 및 Trp-PT을 사용하였다. 미리 건열 멸균시킨 glass cap tube에 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 분획물을 각각 50㎕ 첨가한 다음 대사 활성물질이 필요한 경우에는 실험실에서 제조한 S-9 mix를 250㎕씩 각각 첨가하였다.

데이터처리

실험에서 측정된 결과는 실험군당 평균(mean)와 표준편차(SEM)로 나타냈으며, 이들 데이터들은 SAS(Statistical Analysis System) program을 이용하여 분산분석을 한 후 Student's test 와* Duncan's multiple range test로서 분석하였다.

이론/모형

돌연변이원성 실험에 사용한 Salmonella typhimunum의 histidine 영양요구성 변이주는 TA98, TA100의 두 종류를 이용하여 Ames test를 개량한 preincubation Mutagenicity test(Matsushima et al., 1980)를 이용하였다. 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 분획물을 미리 건열 멸균시킨 glass cap tube에 각각 50㎕씩 가하고 여기에 미리 TA culture배지(Difco nutrient broth 0.
자유 라디칼 (Free radical)인 1, 1-디페닐-2-피크릴하이드라질 (l, l-diphenyl-2-piciy] hydrazyl, DPPH)을 사용한 항산화 활성 측정방법 (Xing et al., 1996; Choi et al., 1993)을 이용하였다. 유리 시험관에 4㎖의 메탄올을 넣고 시료 화합물을 농도별 (1.
항미생물 활성을 조사하기 위하여 Kobayasi 등의 포자 발아시험 방법(Kobayasi et al., 1996)에 따라 조사하였다. 세균에 대한 항균 시험은 피검균으로 Bacillus cereus, Bacillus subtilis, Escherichia coli, Klebsiella pneumonia, Staphylococcus aureus, Salmonella typhimuiium를 이용하였으며, 효모에 대한 항균 시험에서는 피검균으로 Candida albicans, Pichia jadinif를 이용하였다.

성능/효과

18%로 가장 높은 억제효과가 나타났다. 4NQO（0.15㎍/plate）에 대한 S. typhymunuin TA98 균주 에서 시료농도 1000㎍/plate에서는 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 에칠아세테이트 분획물이 77, 75.8%의 억제효과를 나 타냈으며, TA100 균주에서도 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 에 칠아세테이트 분획물이 72.5, 74.3%의 억제효과를 나타 냈다. Trp-P-l（0.
pneumonia를 사용하였다. Bacillus cereus에 대한 항균실험에서는 ethyl acetate 분획물에서 활성을 나타냈으며, Bacillus subtilis의 경우 ethyl acetate 분획물에서 대조구와 유사한 활성을 보였으며 뿌리 시료에서는 MeOH 추출물과 hexane 분획물에서도 우수한 활성을 보였다. Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Salmonella typhimunum 및 Klebsiella pneumonia에서는 ethyl acetate 분획물에서 활성을 나타냈다.
Aspergillus속 곰팡이에 대한 활성을 보면 뿌리 및 줄기 시료에서는 물 분획에서 대조구인 cyclohexamide와 유사하거나 우수한 활성을 보였으나 잎 시료에서는 ethyl acetate 분획에서 약한 활성을 나타냈다. Cladosporium lierbarum과 Hypocrea nigricans에서는 모든 시료에서 우수한 활성을 나타냈으며, 특히 물 분획물에서 대조구보다 우수한 활성을 보였다.Penicilliiun cigium에서는 부위별 독특한 활성을 나타내었다.
typhymuriuni TA98과 TA100 균주 실험 결과는 다음과 같았다. TA98 균주에서 시료농도 1000㎍ /plate에서는 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 에칠아세테이트 분획물이 77, 75.8%의 억제효과를 나타냈으며, TA100 균주에서도 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 에칠아세테이트 분획물이 72.5, 74.3%의 억제효과를 나타냈다(Fig. 2).
뿌리에서는 다소 비슷한 활성을 보였으나 줄기에서는 hexane과 물 분획물에서 우수하게 나타났으며 잎에서는 ethyl acetate 분획물에서 우수하게 나타났다. Trichoderma virens에서는 대체적으로 물 분획물에서 우수한 활성을 보였으며, 특히 잎에서는 hexane 분획물에서 우수한 활성을 보였다.
3%의 억제효과를 나타 냈다. Trp-P-l（0.15㎍/plate）을 사용한 S. typhimurium TA98 균주에서는 시료농도 1000㎍/plate에서 엉겅퀴 뿌 리 추출물（1000㎍/plate）에서 82.25%의 가장 높은 억제 효과를 보였으며, TA100 균주의 경우, 시료농도 1000㎍/plate에서 부탄올 분획물에서 77.75%의 가장 높은 억제 효과를 보였다.
강력한 발암물질로써 직접 변이원으로 사용된 MNNG (0.4㎍/plate)의 경우 S. typhimurium TA100 균주에서 시료농도 1000㎍/plate에서 핵산 분획물이 88.18%로 가장 높은 억제효과가 나타났다. 또한, 시료농도 1000㎍/plate 에서 에칠아세테이트, 부탄올 분획물에서도 75, 71.
곰팡이에 대한 포자발아 억제시험(Table 3)은 기관지천식, allergy성 기관지염을 일으키는 Aspergillus속 awamoner niger, 냉동 식용고기에 흑반을 유발시키는 CladosporLum herbarum, 흑부병을 일으키는 Hypocrea nigricans, 부패 유발균인 Penicillium citrinumer Tdchoderma virens를 사용하였는데, 전반적으로 물 분획물에서 우수한 활성을 나타냈다. Aspergillus속 곰팡이에 대한 활성을 보면 뿌리 및 줄기 시료에서는 물 분획에서 대조구인 cyclohexamide와 유사하거나 우수한 활성을 보였으나 잎 시료에서는 ethyl acetate 분획에서 약한 활성을 나타냈다.
2)를 보면 부위 별 ethyl acetate 분획물과 butan이분획물에서 강한 항산 화 활성을 보였으며, 특히 뿌리의 ethyl acetate 분획물 (RC50： 11㎍/㎖)과 butanol 분획물(RC50：14㎍/㎖), 잎의 butanol 분획 물(RCm： 15㎍/㎖)에서 대조구인 a tocopherol(RC50：12㎍/㎖)이 나 BHA(RC50： 14㎍/㎖)정도의 항산화활성을 보였다. 또한 잎의 ethyl acetate 분획물 (RC50：26㎍/㎖)과 물 분획물(RC50：28㎍/㎖)에서도 우수한 항산화 활성을 보였다. 그러나 대체적으로 줄기부위에서는 항산화 활성 이 약하게 나타났다.
25%의 가장 높은 억제효과를 보였다. 또한, TA100 균주의 경우, 시료농도 1000㎍/plate 에서 부탄올 분획물에서 77.75%의 가장 높은 억제 효과를 보였다(Fig. 3).
18%로 가장 높은 억제효과가 나타났다. 또한, 시료농도 1000㎍/plate 에서 에칠아세테이트, 부탄올 분획물에서도 75, 71.03% 로 높은 억제효과를 보였다(Fig. 1). 4NQO(0.
얻어진 추출물을 다시 용매 극성을 이용하여 분획하여 Table 1과 같은 결과를 얻었다. 뿌리 및 잎 추출물은 10% 정도의 수율을 보였으나 줄기 추출물은 2.8%의 낮은 수율을 보였다. 이 결과는 비록 줄기 추출물이 다른 부위에 비해 극히 낮은 수율을 보였지만 다른 부위에서의 결과는 이의 보고(Lee et al, 2002)에서 유기용매(에탄올)에서 추출할 경우 8.
Penicilliiun cigium에서는 부위별 독특한 활성을 나타내었다. 뿌리에서는 다소 비슷한 활성을 보였으나 줄기에서는 hexane과 물 분획물에서 우수하게 나타났으며 잎에서는 ethyl acetate 분획물에서 우수하게 나타났다. Trichoderma virens에서는 대체적으로 물 분획물에서 우수한 활성을 보였으며, 특히 잎에서는 hexane 분획물에서 우수한 활성을 보였다.
아미노산 가열분해물인 Bp-PT(0.15㎍/plate)을 사용한 S. typhimurium TA98 균주에서는 시료농도 l000㎍ /plate에서 물 분획물을 제외한 모든 시료에서 60% 이상의 높은 억제효과를 나타냈으며 엉겅퀴 뿌리 추출물 (1000㎍/plate)에서 82.25%의 가장 높은 억제효과를 보였다. 또한, TA100 균주의 경우, 시료농도 1000㎍/plate 에서 부탄올 분획물에서 77.
엉겅퀴 부위별 메탄올 추출 수율을 구한 결과 뿌리 및 잎 추출물은 10% 정도의 수율을 보였으나 줄기 추출물 은 2.8%의 낮은 수율을 보였다.
엉겅퀴 뿌리 추출물 및 용매 극성을 이용한 분획물을 대상으로 암세포주에 대한 세포독성을 실험한 결과(Table 4), 폐암세포주인 A549세포에서 메탄올 추출물이 70.75%의 억제 효과를 나타내었고, 간암세포주인 Hep3B에서도 메탄올 추출물이 75.5%의 억제효과를 나타내었다. 또한, 유방암 세포주인 MCF-7에서도 메탄올 추출물이 83.
엉겅퀴 뿌리 추출물 및 용매 극성을 이용한 분획물을 대상으로 암세포주에 대한 증식 억제 효과를 실험한 결 과, A549, Hep3B, MCF-7 세포주에서 메탄올 추출물이 가장 우수한 억제효과를 나타내었으며 인간유래의 정상 간세포 293에 대하여 시료농도에 따른 세포독성 효과는 1000㎍/㎖시료 첨가시 암세포에 대하여 대부분 60% 전 후의 억제율을 보이는데 반해 293에 대해서는 25% 이하 의 생육억제율을 보였다. 이는 암세포에 대한 높은 억제 효과에 비해 정상세포에 대해서는 비교적 낮은 독성효과 를 나타냄을 알 수 있었다.
위 실험의 결과로 미루어 보아 엉겅퀴 뿌리 추출물 및 분획물의 항돌연변이 효과를 나타내는 성분은 핵산에 잘 용해되는 지용성의 것과 부탄올이나 물에 잘 용해되는 수용성 물질이 함께 존재하면서 활성을 나타내는 것으로 사료된다.
천연물에는 변이원 및 항돌연변이원을 포함한 여러가지 성분이 혼재되어 있을 수 있어 엉겅퀴 뿌리 추출물과 그 분획물 자체의 돌연변이원성 유무를 확인한 결과, 자료는 나타내지 않았지만 시료농도의 증가에 따른 his* revertant colony수의 증감이 없는 것으로 보아 시료 자체에 의한 돌연변이원성은 존재하지 않았다.
항산화활성 실험 결과 부위별 ethyl acetate 분획물과 butanol분획물에서 강한 항산화 활성을 보였으며, 특히 뿌리의 ethyl acetate 분획물（RC50:11㎍/㎖）과 butanol 분 획물（RC50:14㎍/㎖）, 잎의 butanol 분획물（RC50:15㎍/㎖）에 서 대조구인 a-tocopherol（RC50:12㎍/㎖）이나 BHA（RC50:14㎍/㎖）정도의 항산화활성을 보였다.
항산화활성 실험을 시행한 결과(Table. 2)를 보면 부위 별 ethyl acetate 분획물과 butan이분획물에서 강한 항산 화 활성을 보였으며, 특히 뿌리의 ethyl acetate 분획물 (RC50： 11㎍/㎖)과 butanol 분획물(RC50：14㎍/㎖), 잎의 butanol 분획 물(RCm： 15㎍/㎖)에서 대조구인 a tocopherol(RC50：12㎍/㎖)이 나 BHA(RC50： 14㎍/㎖)정도의 항산화활성을 보였다. 또한 잎의 ethyl acetate 분획물 (RC50：26㎍/㎖)과 물 분획물(RC50：28㎍/㎖)에서도 우수한 항산화 활성을 보였다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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