[논문]ELISA 방법으로 계란의 난황에 존재하는 Salmonella enteritidis와 S. typhimurium에 대한 IgY 측정

이승배

ELISA 방법으로 계란의 난황에 존재하는 Salmonella enteritidis와 S. typhimurium에 대한 IgY 측정
Detection of IgY Specific to Salmonella enteritidris and S. typhimurium in the Yolk of Commercial Brand Eggs using ELISA 원문보기

Korean journal for food science of animal resources = 한국축산식품학회지, v.23 no.2, 2003년, pp.161 - 167

초록
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사람들에게 계란과 관련하여 일어나는 S. enteritidis(SE)와 S. typhimurium(ST)의 전파를 줄이기 위해서 감염된 상업적인 산란계군을 찾는 것은 매우 중요한 일이다. 그러므로 본 연구는 국내 산란계군에서 생산되는 계란의 주된 식중독균인 SE와 ST의 청정화 관리를 위한 기초 연구로서 SE와 ST에 대한 산란계군의 감염 여부를 파악하기 위해 시중에 유통하는 계란의 난황에 존재하는 SE와 ST에 대한 특이 항체를 ELISA방법으로 조사하였다. 시중에 유통되는 3개 제품의 계란의 난황을 1:100부터 1:1,600까지 두배 희석법으로 희석한 후 SE균체와 ST균체 및 ST의 OMP항원에 대해 특이 항체 역가를 ELISA로 측정한 결과 대조군에 비해 희석곡선의 형태가 차이가 나는 것을 알 수 있었다. 시중에 유통중인 2개 제품의 계란을 1:200과 1:1,000으로 희석한 후 ST항원, OMP항원과 SE항원에 대한 각각 ELISA를 실시한 결과 각각의 항원에 대해 난황특이 항체에 대한 역가는 같은 제품일지라도 차이가 있었다. 21개 제품의 계란을 각 회사마다 5개씩 무작위로 추출하여 계란난황을 1:1,000으로 희석한 후 3가지 항원 ST균체, SE균체 및 ST의 OMP 항원에 대해 ELISA을 실시한 결과 SE와 ST균체 항체보다 OMP항원에 대해 전반적으로 높은 항체 역가를 나타냈으며, ST는 30%, SE는 28.5%, OMP는 28.5% 수준에서 대조구와 비슷한 낮은 역가의 항체 값을 나타내었다. 본 논문의 결과는 난황항체 역가를 측정함으로서 산란계군에서 ST와 SE에 오염을 파악하거나 ST와 SE의 오염을 줄이는데 효과적으로 이용될 수 있는 민감한 방법이라고 생각된다.X>$10^{8}$ g ~ 3.05$\times$$10^{8}$ g 분포를 나타냈으며, 생녹각김치, 유산처리 녹각김치, 대조김치, 열수추출 녹각김치의 순으로 많았다. 녹각 김치를 사람들에게 맛보게 하여 짠맛, 신맛, 향기, 색, 조직감을 평가시킨 결과 열수추출 녹각김치와 생녹각김치가 가장 높은 값을 나타냈고 이어서 대조김치와 유산처리 녹각김치의 순을 나타냈다.TEX>0.13)은 무첨가 초콜릿(3.25$\pm$0.15)에 비해 모두 유의적(P<0.001)으로 낮은 점수를 나타냈으나, 2% 첨가수준에서는 맛, 향, 조직감 및 기호도에서 유의적인 차이를 보이지 않았다.의 소규모 와, 강한조류 및 지형적 특성(불규칙한 해저지형 및 고립도서)에 의해 이루어지는 왕성한 수평 및 연직 혼합 등과 같은 어장학적 호조건에 의해 마라도 주변에 체류하게 되고, 이들 체류어군은 조류방향에 따라 섬의 조상 측에 농밀군을 형성하는 섬의 조상측 어장이다.향을 주지 않는 것으로 나타났으므로 청소년 각자의 식습관 및 식품 섭취에 대한 관심을 고취시킬 필요가 있다고 생각된다.d with an MR peak in the vicinity of the coercive field. The low-field tunnel-type MR characteristics of thin films deposited on different substrates originates from the behavior of grain boundary properties. 않고 단지 안전 보호측면에서의 연구가 이루어졌을 뿐이었다. 따라서 서열환경하에서 머리부분의 쾌적성을 고려한 다양한 작업

Abstract ▼ AI-Helper

Identification of salmonellosis-infected commercial poultry flocks has become a pivotal component of efforts to reduce incidence of egg-associated transmission of S. enteritidis and S. typhimurium to humans. As a basic study for sanitary control of S. enteritidis and S. typhimurium, main food-borne pathogenic bacteria in eggs produced by domestic hens, commercial egg samples were tested for specific antibodies to whole cells of S. enteritidis and S. typhimurium and outer membrane protein(OMP) of S. typhimurium by ELISA to detect infection of S. enteritidis and S. typhimurium in various groups of hens. When the antibody titers of yolks from three commercial brand eggs were tested after diluting in the ratio from 1:100 to 1:1,600 with double dilution method, ELISA values of the specific antibodies could be shown as differences in dilution patterns by comparing with negative control egg. When the antibody titers of the yolks from two commercial brand eggs were tested after diluting in the ratio of 1:200 and 1:1,000, ELISA values of specific antibodies were different among same brand eggs. When the antibody titers of yolks from five eggs sampled randomly from twenty one commercial brand eggs were tested after diluting in the ratio of 1:1,000, ELISA value of the specific antibodies were shown generally high. ELISA values of 28.5, 30, and 28.5% of yolks from 21 brand eggs were shown low and similar to negative control egg in antibody titers to whole cells of S. enteritidis and S. typhimurium and OMP of S. typhimurium, respectively. The results demonstrated that ELISA test of egg yolk antibody could provide a highly sensitive indicator to detect contamination of S. typhimurium and S. enteritidis in poultry, and could be used effectively to reduce incidence of S. typhimurium and S. enteritidis infection in poultry.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

typhi-wm(ST)이다(정 등, 1992). 그러므로 본 연구는 국내 산란계군에서 생산되는 계란의 식중독균인 SE와 ST의 청정화관리를 위한 기초연구로서 국내에서 생산되는 계란에서 SE 와 ST에 대한 산란계군의 감염 여부를 파악하기 위해 시중에 유통하는 계란의 난황에 존재하는 SE와 ST에 대한 특이항체를 ELISA방법으로 조사하였다.
의 전파를 줄이기 위해서 감염된 상업적인 산란계군을 찾는 것은 매우 중요한 일이다. 그러므로 본연구는 국내 산란계군에서 생산되는 계란의 주된 식중독균인 SE와 ST의 청정화 관리를 위한 기초 연구로서 SE와 ST 에 대한 산란계군의 감염 여부를 파악하기 위해 시중에 유통하는 계란의 난황에 존재하는 SE와 ST에 대한 특이 항체를 EL1SA방법으로 조사하였다. 시중에 유통되는 3개 제품의 계란의 난황을 1:100부터 1:1, 600까지 두배 희석법으로 희석한 후 SE균체와 ST균체 및 ST의 OMP항원에 대해 특이 항체역가를 ELISA로 측정한 결과 대조군에 비해 희석곡선의 형태가 차이가 나는 것을 알 수 있었다.

제안 방법

S. typhimurium과 S. entertidis 대한 계란의 항체를 탐지하기 위해 시중에 유통되는 3종류 계란의 난황을 1:100부터1:1, 600까지 희석한 후 ST균체, ST의 outer membrane protein(OMP) 및 SE 균체 각각의 항원에 대한 항체 역가를 ELISA로 측정한 결과를 Fig. 1 ~3에 나타내었다.
난황에 들어있는 특이항체의 역가는 Eriksson 등(1995)이 사용한 ELISA 방법을 약간 변형하여 측정하였다. PBS로 균체 또는 ST의 OMP를 희석한 후 96 well polystyrene plate(Coming Coster, Cambridge, MA)에 100 ul씩 넣고 4℃ 에서 하룻밤 방치하여 coating 하였다.

대상 데이터

분석에 공시 한 계 란시료는 원주지역의 대형식품매장에서 브랜드별로 21개를 포장단위로 구입한 후 분석을 위해 4℃ 에 냉장보관하면서 사용하였으며, 음성 대조구로는 캐나다 Guelph 대학 식품학과의 Mine 박사로부터 얻은 살모넬라 항체가 없는 난황을 사용하였다.
실험에 사용된 균주는 한국생명공학연구원 유전자은 행에서 분양받은 Salmonella enteritids KCTC 2930(SE)와 Salmonella typhimurium KCTC 2514(ST)를 사용하였다. 37℃에서 SE와 ST를 Tryptic soy broth(Difco, U.

데이터처리

실험에서 얻어진 결과는 SAS program(2002)> 이용하여 Duncan의 다중검정을 통해 5%수준에서 유의성을 검증하였다

이론/모형

S. typhimurium 으로부터 OMP의 분리는 Chart(1984)의 방법에 따라 tryptic soy broth에 배양한 후 5 mM PBS buffer (pH 7.2) 완충액으로 3번 세척한 후, 10 mm EDTA, 0.1 ug/ml의 DNase 및 0.1 ug/ml의 RNase를 넣은 완충액으로 처리 한 다음 sonication으로 균체를 파괴하고, 4, 000xg로 30분간 원심분리한 상등액을 sodium lauryl sarcosinate로 용해시켰다. 그후 40, 000xg 로 1시간 초원심분리로 침강시켜 분리하였다.

성능/효과

05). 21개 브랜드 제품에 대해 살모넬라의 오염도를 음성 대조구와 비교해보면 ST항원으로 항체역가를 조사한 경우 30%, SE항원으로 항체를 조사한 경우 28.5%, ST의 OMP항원으로 항체를 조사한 경우도 28.5%로정도가 오염이 안된 음성 대조구와 비슷한 수준에서 유의차 (p<0.05)가 없는 낮은 항체 역가를 나타냈으며, ST 항원으로 사용한 것보다 ST의 OMP항원을 사용한 경우 1.5% 정도 낮게 음성으로 나타났다.
시중에 유통중인 2개 제품의 계란을 1:200과 1:1,000으로 희석한 후 ST항원, OMP 항원과 SE항원에 대한 각각 ELISA를 실시한 결과 각각의 항원에 대해 난황특이 항체에 대한 역가는 같은 제품일지라도 차이가 있었다. 21개 제품의 계란을 각 회사마다 5개씩 무작위로 추출하여 계란난황을 1:1,000으로 희석한 후 3가지 항원 ST균체, SE균체 및 ST의 OMP 항원에 대해 ELISA을실시한 결과 SE와 ST균체 항체보다 OMP항원에 대해 전반적으로 높은 항체 역가를 나타냈으며, ST는 30%, SE는 28.5%, OMP는 28.5% 수준에서 대조구와 비슷한 낮은 역가의 항체 값을 나타내었다. 본 논문의 결과는 난황항체 역가를 측정함으로서 산란계군에서 ST와 SE에 오염을 파악하거나 ST와 SE의 오염을 줄이는데 효과적으로 이용될 수 있는 민감한 방법이라고 생각된다.
Fig. 1 ~3의 결과를 종합해 희석 형태를 보면 브랜드 1의 난황은 ST항원, ST의 OMP 항원 및 SE 항원에 대해 전부 음성 대조구에 비해 유의차(p<0.05)가 높은 항체 역가를 갖는 것으로 나타났으나 브랜드 2의 경우는 모두 음성 대조구와 유의차(p<0.05)가 없는 수준에서 항체 역가가 거의 없는 것으로 볼 수 있었다. 약간의 항체 역가를 갖는 브랜드3의 경우는 ST항원과 ST의 OMP 항원에 대해서 나타난 결과는 음성대조 구에 비해 유의차는 없는 것으로 나타났으며 SE 항원에 대해서도 음성 대조구와 유의차가(p<0.
Fig. 3은 SE항원에 대해 3종류의 난황을 희석 배수에 따른 항체 역가를 나타낸 것으로 브랜드 1의 경우 희석 비율이1:100에서 OD값이 0.58이고 1:1, 600에서는 0.4의 OD 값으로 감소하는 희석 형태는 음성 대조구의 희석비율이 1:100부터 1:1, 600사이에서 OD 값이 0.05부터 0.01 로 감소는 희석형태에 비해 매우 높은 항체 역가를 갖는 유의차(p<0.05)를 보였으나 브랜드 3과 2는 음성 대조구와 유의차(p<0.05)가 없는 항체 역가를 갖는 희석형태를 보여주었다. Kim 등(1991)은 SE의 OMP항원에 대해 혈청을 희석비율을 1:100부터 1:1, 600 으로 희석하여 ELISA로 항체 역가를 측정한 결과 살모넬라 양성 혈청은 1:100에서 OD값에 1.
Fig. 4에서 브랜드 A와 B를 ST항원에 대해 난황을 1:200 과 1:1000으로 희석하여 비교한 결과 브랜드 A는 브랜드 B 에 비해 전체적으로 ST항원에 대한 항체 역가가 높은 것으로 유의차(p<0.05)가 나타났으며, 1:200과 1:1,000으로 희석한 희석 비율을 비교해보면 1:200에 비해 1:1,000으로 희석한 경우 항체 역가가 높은 브랜드 A의 경우 평균적으로 32% 정도로 역가가 감소한 반면 비교적 항체 역가가 낮은 브랜드 B의 경우 평균적으로 57%의 감소를 보여주었다.
Fig. 5의 경우 브랜드 A와 B에 있는 난황을 1:200과 1: 1, 000으로 희석하여 ST의 OMP항원을 이용하여 ELISA를 측정 한 결과 브랜드 A와 브랜드 B가 전체적으로 OMP항원에 대한 항체 역가가 비슷하게 유의차(p<0.05)가 없는 것으로 나타났으며, 희석 배율 1:1,000에서 보면 브랜드 A의 경우 A-3 을 제외하고는 Fig. 4의 ST항원에 대한 항체 역가와 비슷한 반응을 보인 반면 브랜드 B의 경우는 OMP 항원에 대해서 매우 높은 친화도를 보여 유의차(p<0.05)가 있는 높은 항체 역가를 나타냈다. 브랜드 B는 1:200에 비해 1:1, 000 으로 희석하는 경우 대부분은 36%-60% 정도 항체 역 가가 감소하였으나 특히, B-3는 70% 정도로 가장 많이 항체 역가가 감소하는 것으로 나타났다.
Fig. 7~9는 시중에 유통중인 21개 브랜드 제품의 계란을 각 브랜드마다 5개씩 무작위 추출하여 계란 난황을 1:1, 000 으로 희석한 후 3가지 항원 ST 균체, SE 균체 및 ST의 OMP 에 대해 EL1SA를 실시한 결과 3가지 항원 모두에 대해 전반적으로 살모넬라균의 음성 대조구에 비해 거의 대부분이 유의적인 차를 보여 높은 난황항체 역가를 같고 있으며(p<0.05), 전반적으로 SE와 ST의 균체 항원보다 ST의 OMP항원에 대해 유의적인 차를 나타내는 높은 난황항체의 역가를 나타내었다(p<0.05). 21개 브랜드 제품에 대해 살모넬라의 오염도를 음성 대조구와 비교해보면 ST항원으로 항체역가를 조사한 경우 30%, SE항원으로 항체를 조사한 경우 28.
05)를 보여주었다. ST의 OMP항원에 대해 ST 항원과 SE항원 모두 유의성에 차이는 있지만 상관관계에서는 SE항원(r=0.76)에 비해 ST항원(r=0.85)이 더 높은 상관관계를 갖는 것으로 나타났다.
ST항원에 대해 3종류의 계란 난황 항체 역가를 희석형태로 나타낸 Fig. 1에서 보면 브랜드 1은 희석비율 1:100에서 OD값이 0.58부터 1:1, 600에서는 0.37로 난황 희석 형태가 음성 대조구에 비해 상당히 높은 항체 역가를 갖는 것으로 유의차가 나타났다(p<0.05). 브랜드 3의 경우는 브랜드 1보다는 항체 역가가 다소 낮지만 살모넬라 음성 대조구에 비해서는 어느 정도는 항체 역가를 가지는 희석형태로 유의차 (p<0.
같은 계란에 대해 Fig. 1에 보여준 ST항원에 대한 희석 형태와 Fig. 2에서 보여준 ST의 OMP항원에 대한 희석형태를 비교해 보면 희석 형태는 거의 비슷하나 OMP항원인 경우 1:400이하의 낮은 희석배수에서는 항체역가가 ST 항원에 비해 유의차(P<0.05)가 보이나 1:800 이상의 높은 희석배수에서는 유의차(p<0.05)가 없는 것으로 나타났다.
10은 21 개의 브랜드 제품의 계란에 대해 ST항원, ST 의 OMP항원, SE항원에 대하여 실시한 ELISA value를 종합적으로 비교한 것이다. 대체로 OD값이 0.2 수준의 낮은 항체역가를 갖는 브랜드에서는 ST항원에 대한 결과와 ST의 OMP항원에 대한 결과가 유의적인 차이가 없이 비슷하게 나타나는 것을 볼 수 있으나(p<0.05), 0.2이상의 OD값을 갖는 브랜드 계 란에서는 ST의 OMP항원과 ST항원 사이의 결과에 유의차(p<0.05)를 보이나, 두 항원 모두에 대해 높은 항체역가를 보여주고 있다.
5% 수준에서 대조구와 비슷한 낮은 역가의 항체 값을 나타내었다. 본 논문의 결과는 난황항체 역가를 측정함으로서 산란계군에서 ST와 SE에 오염을 파악하거나 ST와 SE의 오염을 줄이는데 효과적으로 이용될 수 있는 민감한 방법이라고 생각된다.
수가 있다고 하였다. 본 실험에서 브랜드 A의 경우 전반적으로 항체의 역가가 높았으므로 희석 배율에 따라 비특이적 반응이 항체 역가의 감소가에 크게 영향을 주지 않았으나 브랜드 B의 경우 낮은 항체 역가를 가진 경우 1:200으로 적게 희석한 배율에서는 비특이적인 반응이 많아 높게 항체 역가가 나타났으나 1:1,000으로 높게 희석한 경우 비특이적 인 반응이 많이 제거된 상태에서 특이 항체 역가가 나온 것이라고 생각된다.
5% 수준으로 24일까지 특이 항체를 갖고 있는 것으로 보고하고 있다. 본 실험의 결과를 Gast 등(1997)의 결과에 비추어 볼 때 국내에서 생산된 21개의 상업적인 계란의 난황에서 SE균체 항원과 ST균체 항원 및 ST의 OMP항원에대한 특이항체를 ELISA로 조사시 살모넬라 음성 대조군보다 높은 특이 항체를 갖는 계란이 약 70% 정도를 보인 것은 이들 계란을 생산한 산란계 농장이 살모넬라에 거의 70% 정도가 오염되어 있는 것으로 추측되며, 본 실험에서 사용한 살모넬라 항원에 대한 난황항체 역가를 ELISA로 측정하는 방법이 산란계 농장에서 발생하는 ST와 SE에 오염을 파악하거나 ST와 SE의 오염을 줄이는데 효과적으로 이용됨으로서 계란에 의한 살모넬라 식중독을 미연에 막는데 사용될 수 있는 있다고 생각된다. 아울러 국내 계란의 등급제 시행에서도 위생적인 측면을 고려한다면 ELISA방법을 이용하여 살모넬라에 오염 여부를 신속히 파악하는 것은 중요한 요소라고 생각된다.
그러므로 본연구는 국내 산란계군에서 생산되는 계란의 주된 식중독균인 SE와 ST의 청정화 관리를 위한 기초 연구로서 SE와 ST 에 대한 산란계군의 감염 여부를 파악하기 위해 시중에 유통하는 계란의 난황에 존재하는 SE와 ST에 대한 특이 항체를 EL1SA방법으로 조사하였다. 시중에 유통되는 3개 제품의 계란의 난황을 1:100부터 1:1, 600까지 두배 희석법으로 희석한 후 SE균체와 ST균체 및 ST의 OMP항원에 대해 특이 항체역가를 ELISA로 측정한 결과 대조군에 비해 희석곡선의 형태가 차이가 나는 것을 알 수 있었다. 시중에 유통중인 2개 제품의 계란을 1:200과 1:1,000으로 희석한 후 ST항원, OMP 항원과 SE항원에 대한 각각 ELISA를 실시한 결과 각각의 항원에 대해 난황특이 항체에 대한 역가는 같은 제품일지라도 차이가 있었다.
05)가 없는 수준에서 항체 역가가 거의 없는 것으로 볼 수 있었다. 약간의 항체 역가를 갖는 브랜드3의 경우는 ST항원과 ST의 OMP 항원에 대해서 나타난 결과는 음성대조 구에 비해 유의차는 없는 것으로 나타났으며 SE 항원에 대해서도 음성 대조구와 유의차가(p<0.05) 없는 것을 볼 수 있었다. 이것은 브랜드 계란에 따라서도 ST항원과 SE 항원에 대해 차이가 나는 항체 역가를 갖는 것을 알 수 있었다.
05)가 없는 낮은항체 역가를 보였으며, Brand B는 대체로 비슷한 항체역가를 보여주고 있다. 음성 대조구에 비해서 A와 B 모두 SE 균체에 대한 유의차(p<0.05)가 있는 항체 역가를 갖는 것으로 나타났다. 희석 비율이 1:200에서는 OD값이 1.
전반적으로 SE 항원에 대해 높은 항체의 역가를 갖은 계란에서는 대체적으로 ST항원에 대한 항체 역가도 높은 것으로 나타난 것을 볼 수 있었으며 SE 항원과 ST 항원에 대해 나타난 항체역가는 유의차<p<0.05)를 보이지 않았다. 그러나 SE와 ST의 OMP항원에 대해 나타난 항체 역가 사이에서는 유의차(p<0.
05)가 있는 항체 역가를 갖는 것으로 나타났다. 희석 비율이 1:200에서는 OD값이 1.0이상의 높은항체역가를 나타낸 것에 비해 1:1,000에서는 약 60% 정도의 역가가 감소하였고, 같은 제품의 계란 난황을 1:200과 1: 1, 000으로 희석한 후 3가지 항원 ST 균체, SE 균체 및 ST의 OMP 항원에 대해 ELISA를 실시한 결과 난황 특이 항체의 역가는 같은 제품일지라도 유의차(p<0.05)가 있으며, 1:200 으로 희석한 것보다 1:1,000으로 희석한 것이 약 50-60% 정도로 항체의 역가가 감소되나, 비특이적인 반응이 적어지므로 특이 항체 역가를 더 정확하게 측정할 수 있다고 생각된다.

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저자의 다른 논문 :

표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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