선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 제주산 감귤류 종자에 대한 생리기능을 가진 물질을 탐색하기 위한 일환으로 감귤종자 메탄올 추출물이 발암물질인 N-nitrosodiemthylamine생성억제에 미치는 영향을 검정하였다.
제안 방법
- Ethyl ether로 탈지시킨 감귤류 종자 100g에 메탄올 500㎖를 가하여 40℃ 수욕조에서 3시간 동안 추출한 다음 40℃에서 진공농축기로 메탄올을 제거하였다(Fig. 1), 여기에 dimethyl sulfoxide (DMSO)를 가하여 100㎖로 만들었으며, 이것을 micro filter(0.45μm)로 여과한 후 아질산염 소거를 위한 시료로 사용하였다.
- 4로 조절하여 37 ℃ 에서 12시간 반응시킨 다음 ammonium sulfamate를 가하여 반응을 정지시키고, NDPA 1㎖를 내부표준물질로 가하여 Hotchkiss 등28)의 방법에 따라 스팀증류기를 이용하여 반웅용액 중에 있는 NDMA를 추출하였으며 K-D 농축기로 농축하여 GC-TEA(Gas Chromatography-Thermal Analyzer) 로 NDMA를 분석하였다. 이 때 GC-TEA의 조건은 Table 2와 같으며, 대조구는 시료 대신 증류수를 사용하여 상기와 동일한 방법으로 실험하였으며, 생성억제 효과는 시료의 첨가 전 . 후에 나타나는 peak의 백분율(%)로써 환산하였다.
- 0으로 조정한 후 증류수를 가하여 총 부피를 25㎖로 하였다. 이 용액을 37 ℃ 에서 1, 3 및 5시간 반응시킨 후 각각 1㎖를 취하고 여기에 2% 초산용액 5M, Griess시약(30% 초산으로 각각 조제한 1% sulfanilic acid 와 1% naphthylamine 을 1:1 비율로 혼합한 것, 사용직전에 조제)을 0.4㎖ 가하여 잘 혼합시킨 다음 15분간 실온에서 방치시킨 후 520nm에서 흡광도를 측정하여 잔존하는 아질산염을 정량하였다. 공시험은 Griess 시약 대신 증류수 0.
- 측정하였다. 즉 1mM NaNOz 용액 1㎖에 감귤종자 추출물을 각각 1, 3 및 5㎖씩 가하고 여기에 0.1N HCI 및 0.2M 구연산완충용액을 사용하여 반응용액의 pH를 각각 1.2, 3.4 및 6.0으로 조정한 후 증류수를 가하여 총 부피를 25㎖로 하였다. 이 용액을 37 ℃ 에서 1, 3 및 5시간 반응시킨 후 각각 1㎖를 취하고 여기에 2% 초산용액 5M, Griess시약(30% 초산으로 각각 조제한 1% sulfanilic acid 와 1% naphthylamine 을 1:1 비율로 혼합한 것, 사용직전에 조제)을 0.
대상 데이터
- 제주도 내 과수원에서 직접 수집한 6종류의 감귤 (Table 1)의 종자를 분리하여 24시간 수침하고 물로 3~4회 정도 깨끗이 세척한 후, 45℃에서 열풍건조기로 건조시킨 다음 분쇄기로 분쇄하여 추출용 시료로 하였다.
이론/모형
- Flavonoid 정량은 메탄올로 추출하여 naringin 비교정량법으로, 총 페놀은 아세톤으로 추출하여 Follin-Penis법으로 정량하였다26).
- 감귤 종자 추출물들의 NDMA 생성억제 효과는 DMA lmC(l, 000ppm)와 NaNOz 5mg(l, 000ppm)에 감귤 종자 메탄올 추출물을 각각 1, 3 및 5㎖ 농도로 첨가한 후, pH 3.4로 조절하여 37 ℃ 에서 12시간 반응시킨 다음 ammonium sulfamate를 가하여 반응을 정지시키고, NDPA 1㎖를 내부표준물질로 가하여 Hotchkiss 등28)의 방법에 따라 스팀증류기를 이용하여 반웅용액 중에 있는 NDMA를 추출하였으며 K-D 농축기로 농축하여 GC-TEA(Gas Chromatography-Thermal Analyzer) 로 NDMA를 분석하였다. 이 때 GC-TEA의 조건은 Table 2와 같으며, 대조구는 시료 대신 증류수를 사용하여 상기와 동일한 방법으로 실험하였으며, 생성억제 효과는 시료의 첨가 전 .
- 감귤 종자의 수분함량은 상압가열 건조법, 조단백질은 micro kjeldahl 법(질소 계수 : 5.30), 조지방은 Soxhefs 추출법, 그리고 조회분은 직접회화법으로 분석하였다.25)
- 감귤종자 메탄올 추출물의 고형분 함량은 휘발법으로 즉정하였으며, 주출 수율은 각 감귤종자에 대한 수분함량을 보정하여 다음의 식에 의하여 구하였다.
- 아질산염의 소거작용은 Kato 등27)과 강 등'3)의 방법으로 측정하였다. 즉 1mM NaNOz 용액 1㎖에 감귤종자 추출물을 각각 1, 3 및 5㎖씩 가하고 여기에 0.
성능/효과
- 측정한 결과는 Table 3과 같다. 감귤 종자류들의 수분 함량은 4~6%로 대부분 5% 이하였으며, 조단백질 함량은 11-15%, 조지방 함량은 32~46%, 탄수화물 함량은 22~45%, 회분함량은 2~4%이었다. 감귤류 종자 중 산귤(Cites szmfci)은 단백질과 지방함량이 높은 반면 탄수화물 함량을 상대적으로 낮았고, 하귤(Citrus natsiidaidai)은 지방함량이, 당유자(Citrus grandis)는 탄수화물 함량이 각각 상대적으로 높았으며, 삼보감(Citrus sulcata) 인 경우 단백질과 지방함량이 다른 감귤종자에 비하여 상대적으로 높았다.
- 감귤 종자류들의 수분 함량은 4~6%로 대부분 5% 이하였으며, 조단백질 함량은 11-15%, 조지방 함량은 32~46%, 탄수화물 함량은 22~45%, 회분함량은 2~4%이었다. 감귤류 종자 중 산귤(Cites szmfci)은 단백질과 지방함량이 높은 반면 탄수화물 함량을 상대적으로 낮았고, 하귤(Citrus natsiidaidai)은 지방함량이, 당유자(Citrus grandis)는 탄수화물 함량이 각각 상대적으로 높았으며, 삼보감(Citrus sulcata) 인 경우 단백질과 지방함량이 다른 감귤종자에 비하여 상대적으로 높았다.
- 감귤종자 메탄올추출물을 3㎖ 첨가한 시료의 경우에서는 편귤에서 60%, 삼보감과 산귤이 40%가 넘는 억제율을 보였고, 나머지 시료 대부분이 추출물 Ing를 첨가했을 때보다 다소 높은 억제율을 보였다. 감귤종자 메탄올주줄물을 5m0 첨가하였을 때, 삼보감에서 94%의 NDMA 생성억제효과를 보였으며, 편귤에서 72%, 당유자가 64%로 비교적 높은 NDMA 생성 억제효과가 나타났다. 이것은 삼보감과 당유자가 다른 감귤종자에 비해 높은 플라보노이드를 함유하고 있고 또한 아질산염 소거능도 다른 감귤종자 추출물 보다 높게 나타나는 것으로 보아 플라보노이드에 의한 영향으로 추정이 되며, 이와 반대로 편귤은 다른 감귤종자 보다 총페놀 함량이 높아 이것에 의한 영향으로 추정된다.
- 감귤종자 메탄올추출물을 1M씩 첨가하였을 때 편귤종자와 산귤종자에서 약 40%의 NDMA 생성억제 효과를 보였지만 다른 감귤 종자류에서는 그 생성억제 효과가 비교적 낮았다. 감귤종자 메탄올추출물을 3㎖ 첨가한 시료의 경우에서는 편귤에서 60%, 삼보감과 산귤이 40%가 넘는 억제율을 보였고, 나머지 시료 대부분이 추출물 Ing를 첨가했을 때보다 다소 높은 억제율을 보였다. 감귤종자 메탄올주줄물을 5m0 첨가하였을 때, 삼보감에서 94%의 NDMA 생성억제효과를 보였으며, 편귤에서 72%, 당유자가 64%로 비교적 높은 NDMA 생성 억제효과가 나타났다.
- 감귤종자의 메탄올추출물을 pH 6.0에서 반응시켰을 때 아질산염의 소거효과는 시험된 모든 종자 추출물에 대하여 첨가량 증가할수록 증가하였으나, 반응시간이 길어질수록 대부분 감귤종자 추출물들에 의한 아질산염의 소거능이 감소하는 경향을 보였다(Table 8). 즉, 감귤종자 메탄올추출물을 각각 5㎖씩 첨가하여 pH 6.
- 이것은 삼보감과 당유자가 다른 감귤종자에 비해 높은 플라보노이드를 함유하고 있고 또한 아질산염 소거능도 다른 감귤종자 추출물 보다 높게 나타나는 것으로 보아 플라보노이드에 의한 영향으로 추정이 되며, 이와 반대로 편귤은 다른 감귤종자 보다 총페놀 함량이 높아 이것에 의한 영향으로 추정된다. 따라서 감귤종류에 다소간의 차이는 있지만, NDMA 생성 억제율은 첨가량이 증가할수록 높게 나타났으며 페놀 보다는 플라보노이드에 의한 영향이 큰 것으로 추정된다. 그러나 송31)은 밀 감, 오렌지 및 금귤에 대한 NDMA 생성억제효과는 아스코르빈산 획분 보다는 페놀획분에서 95%이상의 높은 NDMA 생성억제효과를 보고하였다.
- 4%의 아질산염 소거능을 보여 3시간 반응시켰을 때보다 약간 감소하였다. 아질산염과 제2급 아민과 반응하여 nitrosaMne을 생성시키는 최적 pH인 pH 3.4에서의 아질산염의 소거효과는 감귤종자 메탄올 추출물을 각각 씩 첨가하여 1시간 반응시켰을 때 32.5-67.9% 범위였으며, 3시간 및 5시간 반응시켰을 때 각각 36.7-70.2% 및 34.0~64.9%로 첨가량이 증가할수록 소거효과는 증가하였지만 반응시간을 5시간으로 조절하였을 때에는 3시간 반응 시 보다 아질산염 소거능이 감소하는 경향을 보였다(Table 7).
- 위액의 pH와 비슷한 pH L2에서 감귤종자 메탄올추출물의 아질산염 소거효과는 첨가량이 증가할수록, 그리고 반응시간이 길수록 증가하였다(Table 6). 즉, pH 1.
- 이상의 결과로부터 감귤종자 메탄올추출물에 의한 아질산염의 소거효과는 추출물 첨가량이 증가할수록 그 소거율이 증가하였으며, pH 의존성 이 커서 pH 1.2에서 가장 높은 소거능을 보였지만, pH가 증가할수록 감소하는 경향이 뚜렷하였으며, 아질산염을 소거하는 반응시간은 3시간 반응시켰을 때 가장 높은 아질산염 소거능을 보였다.
- 즉, pH 1.2에서 감귤종자 메탄올추출물을 각각 5㎖씩 첨가하여 1시간 반응시켰을 때 36.7~81.5%의 아질산염 소거효과를 보였으나, 3시간 반응 시 42.7~96.9%의 높은 아질산염 소거능을 보였으며 특히 산귤과 삼보감 추출물에서 90% 이상의 높은 소거능을 나타내 었다. 5시간 반응시켰을 때는 46.
- 감귤 종자류의 폴리페놀 중 플라보노이드 함량은 12~24mg% 함량을 나타내었으며, 특히 하귤과 삼보감, 그리고 당유자에서 20mg% 이상의 높은 함량을 나타내었다. 총 페놀 함량은 20.9~53.1mg%이었으며 당유자가 53.1mg%, 하귤이 33.7mg%으로 다른 감귤 종자에 비해 높은 페놀함량을 보였다. 페놀성 물질들은 phenolic hydroxyl 그룹이 단백질 또는 효소단백질, 기타 큰 분자와 결합해서 효소활성을 저해하거나 단백질의 침전을 초래하고 떫은맛을 주어 식욕을 저하시키는 것으로 알려지고 있다29).
후속연구
- 감귤종자에는 flavonoid, 페놀화합물 이외에 limonoid 등이 함유되어 있어 기능성 식품 이용소재로 그 가치가 높다고 하겠다. 따라서 감귤종자의 생리활성물질을 탐색하여 기능성 식품 및 기능성식품조리의 소재, 또는 의약품 소재로 이용가능성에 대한 연구에 대한 더 많은 진척이 요구된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.