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제안 방법
- Nynhydrin법을 사용하여 시료 1ml 에 0.2M 시트르산 완충액(pH 5.0) 0.5ml와 닌히드린 용액 1.2ml를 가하고 끓는 물로 15분동안 가열한 다음 60% 에탄을 10ml를가하여 570nm에서 비색정 량하였다. 표준 아미노산으로는 L-leucine를 사용하였다37)
- 본 연구에서는 폐기하는 각질을 단백질 가수분해효소 및 염산으로 가용화시킬 수 있는 조건을 찾아서 가용추출물에 대하여 HPLC, 단백질 및 아미노산 함량, 분광광도 분석, 무기물 분석을 하였다.
- 펩신, 파파인을 사용하였다. 본보에서는 그에 이어서 동결건조 녹용을 50℃에서 추출하고 남은 각질, 100 ℃에서 끓여서 추출하고 남은 각질에 세균protease, 펩신, 파파인을 작용시켜서 분석하고, 각질을 건조시켜서 염산을 농도별로 가하여 가용화 조건을 분석하였다. 그 결과, 50℃ 추출 각질에 대한 가용화율은 세균 protease가 가장 높은 32.
- 시마쯔 HPLC (LC-10AD 펌프, SPD-10A 분광광도 검출기, 크로마토팩 C-R5A) 를 사용하여 이동상은 0.2M NaCl을 함유한 0.1M K-인산완충액(pH 6.3), 고정상은 Superose 12(1.0 X 30cm), 유속 0.7ml/min로 280nm 및 210nm에서 검출하였다. 시료는 원심분리 (15, 000rpm, 10분)한 다음 상징액을 사용하였다.
- 0이었다. 아미노산은 시료 3ml에 5% trichloroacetic acid(TCA) 5ml를 가하고, No. 6 여과지로 여과하여 280nm에서의 흡광도를 측정하여 침전되지 않고 통과한 펩티드와 아미노산량으로 하였다.
- 양이온성 무기물은 금속이온 유도결합 플라즈마Mode Optima 3300(Perkinelmer사)을 사용하여 분석하였다, ICP-AES는 RF power 1300W, Coolant 가스 유속은 15리터/min, auxiliary 가스유속은 0.5리터/min, nebulizer 가스유속은 0.8리터/min로 작동하여 alumina injectors} Jet-tip nebulizer을 사용하였다. 음이온성 무기물은 Waters사 2690 HPLC를 사용한 이온교환 크로마토그래피(Waters사 HPLC), 컬럼은 IC Pak anion HR(4.
- 1 여과지로 여과하여 잔사를 1050 항온건조기에서 24시간 건조하여 칭량하였다. 여과액은 분해도, HPLC, 흡광광도 스펙트럼을 분석하였다.
- 8리터/min로 작동하여 alumina injectors} Jet-tip nebulizer을 사용하였다. 음이온성 무기물은 Waters사 2690 HPLC를 사용한 이온교환 크로마토그래피(Waters사 HPLC), 컬럼은 IC Pak anion HR(4.6 X75mm)을 사용하여 Na2CO3 1.4mM과 NaHCO3 1.6mM을 혼합한 완충액으로 유속 1ml/min으로 분석하였다.38)
- 열수추출 각질은 녹용 5g에 물을 가해 100ml 로 만들어서 100℃ 에서 20분간 끓여 추출 여과하고 잔사에 물을 가하여 다시 20분간 끓여서 추출 여과하고, 다시 물 250ml를 가하여 50℃ 에서 30분간 추출하여 남은 잔사를 각질로 사용하였다. 이들 물 및 열수 추출 잔사에 물 95ml를 가하고 단백질 가수분해 효소를 0.5g씩 가하고, 펩신은 0.2M sodium acetate-HCl 완충액(pH 2.15) 10ml를 가하고, 총량이 100ml가 되도록 조절한 다음 50℃에서 시간별로 분해도 HPLC, 흡광 광도 스펙트럼을 분석하였다.
- 저온추출 각질은 생녹용 5g에 물을 가해 100ml로하여 50℃에서 20분씩 두 번 교반 추출한 다음 물 250ml를 가하여 30분 추출하고, 여과하여 잔사를 사용하였다. 열수추출 각질은 녹용 5g에 물을 가해 100ml 로 만들어서 100℃ 에서 20분간 끓여 추출 여과하고 잔사에 물을 가하여 다시 20분간 끓여서 추출 여과하고, 다시 물 250ml를 가하여 50℃ 에서 30분간 추출하여 남은 잔사를 각질로 사용하였다.
- 즉, 회화용기에 녹용가루 2g을 넣고 회화로에서 6000로 항량이 될 때까지 가열하여 중량을 측정하였다.
- 추출액의 단백질, 펩티드 아미노산 함량은 시마쯔사의 UV-1601 분광광도기를 사용하여 280nm의 흡광도로 측정하였다. 스캐닝은 같은 기계를 사용하여 200mm에서 700nm까지 하였으며, 흡광도 최고값은 4.
대상 데이터
- 녹용은 엔지디코리아(주)의 뉴질랜드산 적록의 동결건조 제품을 사용하였다. 분자량용 마커는 시그마 제품을 사용하였다.
- 시료는 원심분리 (15, 000rpm, 10분)한 다음 상징액을 사용하였다. 분자량 마커는 시그마사의 thyroglobulin(MW 670, 000), bovine serum albumin(MW 67, 000), ammonium molyb-date(MW 1, 236), acetone(MW 56)을 사용하였다.
- 제품을 사용하였다. 분자량용 마커는 시그마 제품을 사용하였다. 가용화에 사용한 단백질 가수분해효소는 태평양(주)의 Protease NP(세규 활성 470, 000 pc/g), 시그마의 papain(EC 3.
- 다음 540nm에서 비색정 량하였다. 표준 단백질로는 Hammerstein 카제인을 사용하였다.36)
이론/모형
- 식품공전39)일반시험법의 회분시험법에 따라 수행하였다. 즉, 회화용기에 녹용가루 2g을 넣고 회화로에서 6000로 항량이 될 때까지 가열하여 중량을 측정하였다.
- 전보35)에서는 동결건조 녹용을 물, 단백질 가수분해효소, 가열 방법으로 추출하였고, 효소는 세균 pro tease, 펩신, 파파인을 사용하였다. 본보에서는 그에 이어서 동결건조 녹용을 50℃에서 추출하고 남은 각질, 100 ℃에서 끓여서 추출하고 남은 각질에 세균protease, 펩신, 파파인을 작용시켜서 분석하고, 각질을 건조시켜서 염산을 농도별로 가하여 가용화 조건을 분석하였다.
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