Freeze dried antler, heat dried antler, antler were extracted through processing step by water, protease and hydrochloric acid(HCl). Extraction rate of freeze dried antler at 50$^{\circ}C$ by water was 9.01％(8.82, absorbance at 280 nm), that of heat dried antler was 9.01％(4.45, absorbance...
Freeze dried antler, heat dried antler, antler were extracted through processing step by water, protease and hydrochloric acid(HCl). Extraction rate of freeze dried antler at 50$^{\circ}C$ by water was 9.01％(8.82, absorbance at 280 nm), that of heat dried antler was 9.01％(4.45, absorbance at 280 nm), and that of antler was 1.10％(0.31, absorbance at 280 nm), respectively. Extraction rate of freeze dried antler by bacterial protease was 16.89％(4.50, absorbance at 280 nm), and that of heat dried antler was 17.29％(5.62, absorbance at 280 nm), and that of antler was 18.22％(0.64, absorbance at 280 nm), respectively. Extraction rate of freeze dried antler by 0.8N HCl was 72.25％(4.60, absorbance at 280 nm), that of heat dried antler was 71.14％(4.70 absorbance at 280 nm), and that of antler was 79.82％ (2.80, absorbance at 280 nm), respectively. Extraction rate of freeze dried antler through three processing steps was 98.15％, that of heat dried antler was 97.35％, that of antler was 99.14％, respectively. The result of analysis by HPLC shows that high molecular pe which appears in young antler and antler extraction was changed into a small molecular peak of about 1,000 by the reaction of protease, and protein of about MW 70,000 was extracted from their remaining residue by 0.8N HCl. The above result shows that water extraction and protease extraction in the freeze dried young antler, protease extraction and HCl extraction in dried young antler, and HCl extraction in antler are most effective.
Freeze dried antler, heat dried antler, antler were extracted through processing step by water, protease and hydrochloric acid(HCl). Extraction rate of freeze dried antler at 50$^{\circ}C$ by water was 9.01％(8.82, absorbance at 280 nm), that of heat dried antler was 9.01％(4.45, absorbance at 280 nm), and that of antler was 1.10％(0.31, absorbance at 280 nm), respectively. Extraction rate of freeze dried antler by bacterial protease was 16.89％(4.50, absorbance at 280 nm), and that of heat dried antler was 17.29％(5.62, absorbance at 280 nm), and that of antler was 18.22％(0.64, absorbance at 280 nm), respectively. Extraction rate of freeze dried antler by 0.8N HCl was 72.25％(4.60, absorbance at 280 nm), that of heat dried antler was 71.14％(4.70 absorbance at 280 nm), and that of antler was 79.82％ (2.80, absorbance at 280 nm), respectively. Extraction rate of freeze dried antler through three processing steps was 98.15％, that of heat dried antler was 97.35％, that of antler was 99.14％, respectively. The result of analysis by HPLC shows that high molecular pe which appears in young antler and antler extraction was changed into a small molecular peak of about 1,000 by the reaction of protease, and protein of about MW 70,000 was extracted from their remaining residue by 0.8N HCl. The above result shows that water extraction and protease extraction in the freeze dried young antler, protease extraction and HCl extraction in dried young antler, and HCl extraction in antler are most effective.
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제안 방법
HPLC (시마쯔 LC-10AD 펌프, SPD-10A 분광광도검출기, 크로마토팩 C-R5A) 를 사용하여 이동상은 0.2M NaCl을 함유한 0.1M K-인산완충액(pH 6.3), 고정상은 Superose 12(1.0 x 30cm), 유속 0.7 ml/min로 280 nm 및 210 nm에서 검출하였다. 시료는 원심분리 (15, 000 ipm, 10분)한 다음 상징 액을 사용하였다.
그래서 본 연구는 녹용 및 녹용추출 후 폐기하는 각질과 녹각을 단백질 가수분해 효소 및 염산으로 가용화 시키는 방법을 찾아서 추출물에 대하여 HPLC, 단백질 및 아미노산 함량, 분광광도 등의 분석을 하였다.
그래서 전보'A에서는 동결건조 녹용을 물 및 단백질가수분해 효소로 추출하여 분석하였고, 다음 논문 道에서는 녹용을 추출하고 폐기하고 있는 추출박을 단백질 가수 분해 소와 염산으로 녹여 추출하여 분석하였다.
동결건조 녹용, 열건조 녹용, 녹각 100 g씩에 0.8 N 염산을 가하여 2리터(5% 농도)로 만들어서 500에서 5시간 정치반응시킨 다음 여과지 No. 1으로 여과하였다. 남은 각질은 105℃의 항온건조기에서 말려서 무게를 재어 분해율을 계산하였다.
동결건조 녹용, 열건조 녹용, 녹각을 물, protease, 염산으로 단계적으로 추출하였다. 50 ℃ 물로 추출한 경우 동결건조 녹용은 9.
물추출하고 남은 녹용 각질에 태평양화학의 단백질 가수분해 효소 10 g(0.5% 농도 총 1600 unit)을 가하여 4(rc에서 5시간 정치반응시킨 다음 여과지 No 1로 여과하였다. 남은 각질은 1050의 항온건조기에서 말려서 무게를 재어 용해율을 계산하였다.
대상 데이터
동결건조 녹용은 엔지디코리아(주)의 뉴질랜드산 적록의 동결건조 제품을 사용하였다. 열풍건조 녹용 및 녹각은 동경종합상사(주)의 제품을 사용하였다.
시료는 원심분리 (15, 000 ipm, 10분)한 다음 상징 액을 사용하였다. 분자량 마커는 시그마사의 thyroglobulin(MW 670, 000), bovine serum albumin(MW 67, 000), ammonium molyb- date(MW 1, 236), acetone(MW 56)을 사용하였다.
열풍건조 녹용 및 녹각은 동경종합상사(주)의 제품을 사용하였다. 분자량용 마커는 시그마 제품을 사용하였다. 가용화에 사용한 단백질 가수분해효소는 태평양(주)의 Protease NP(활성 160 uni〃g)였다.
동결건조 제품을 사용하였다. 열풍건조 녹용 및 녹각은 동경종합상사(주)의 제품을 사용하였다. 분자량용 마커는 시그마 제품을 사용하였다.
이론/모형
전보3Z38)에서는 동결건조 녹용 및 추출 후 남는 각질에 대하여 물, 단백질 가수분해 효소 가열 방법으로 추출하였다.
성능/효과
0.8 N 염산으로 추출한 경우, 210 nm에서 동결건조 녹용, 열건조 녹용, 녹각 모두 21분 정도의 피크(분자량 7 만 정도)가 가장 높다.
50 ℃ 물로 추출하고 남은 녹용각질과 녹각을 세균 protease로 추출하여 280 nm의 흡광도로 추출율을 분석한 결과는 Table 1과 같이, 동결건조 녹용은 4.50, 열 건조 녹용은 5.62, 녹각은 0.64를 나타내어서 열 건조 녹용의 추출율이 동결건조 녹용보다 높았다.
단계적으로 추출하였다. 50 ℃ 물로 추출한 경우 동결건조 녹용은 9.01%(흡광도 8.82), 열건조 녹용은 9.01%(흡광도 4.45), 녹각은 1.10%(흡광도 0.31) 의추출율을 나타냈고, 세균 protease로 추출한 경우는 동결건조 녹용은 16.89%(홉광도 4.50), 열건조 녹용은 17.20 %(흡광도 5.62), 녹각은 18.22%(흡광도 0.64) 의추출율을 나타냈고, 0.8N 염산으로 추출한 경우는 동결건조 녹용은 72.25%(흡광도 4.60), 열건조 녹용은 71.14%(흡광도 4.70), 녹각은 79.82%(흡광도 2.80)의추출율을 나타냈다. 이들 삼단계 과정으로 동결건조녹용은 98.
14% 추출되었다. HI+C로 분석한 결과, 녹용 및 녹각추출물에서 나타나는 고분자 피크는 단백질 가수분해 효소의 작용으로 분자량 1,000 정도의 작은 피크로 분해되었고 남은 각질은 0.8 N 염산에 의하여 분자량 7만 정도의 단백질이 추출되었다. 이상의 결과로부터 동결건조 녹용의 추출에는 물과 protease에 의한 추출, 열 건조 녹용의 추출에는 protease 와 염산에 의한 추출, 녹각의 추출에는 염산에 의한 추출이 효과적이었다.
92를 나타냈다. 그 중 단백질 추출율은 동결건조 녹용 6.60(64.6%), 열건조 녹용 7.29 (64.6%), 녹각 1.69(57.9%)로, 녹용의 단백질 추출율은 동결건조 녹용과 열건조 녹용의 차이가 없었다. 중량으로 분석한 추출율은 동결건조 녹용은 79.
25%가 추출되었다. 그리고, 교반하지 않는 조건에서 동결건조녹용, 열건조 녹용 모두 물과 효소 염산에 의한 추출율은 그다지 차이가 나지 않았다.
녹각은 물추출율은 낮았고 효소추출율과 염산추출율은 녹용보다 높았다.
14%의 추출율을나타냈다. 녹각의 경우 물, 효소 염산에 의한 삼단계추출율은 99.14%였으나 염산으로 직접 단단계 추출하여도 98.44%를 나타내어 0.7% 차이 밖에 없으므로 녹각은 직접 산추출하는 것이 가장 좋은 것으로 나타났다.
항온 건조하여 무게를 재어 분석한 결과는 Table 2 와 같다. 동결건조 녹용을 교반하면 물추출단계에서 77.19%가 추출되는 반면, 열건조 녹용은 염산 추출과정에서 72.25%가 추출되었다. 그리고, 교반하지 않는 조건에서 동결건조녹용, 열건조 녹용 모두 물과 효소 염산에 의한 추출율은 그다지 차이가 나지 않았다.
동결건조 녹용의 물 추출물은, 전보에서는 6% 농도에서 6시간 후 14.37을 나타냈고, 그 중 단백질성 추출물은 8.43, 아미노산 및 펩티드성 추출물은 5.94을 나타냈다.
80을 나타냈다. 물과 단백질 가수분해 효소로 추출하는 경우는 동결건조 녹용의 추출율이 높았으나 염산으로 추출하는 경우는 열건조 녹용의 추출율이 높았다.
이 같이 녹각에 고분자량 물질이 더 많은 것은 녹각에 들어있는 단백질이 녹각 이 염산에 녹은 다음 추출되어 분해 속도가 느리기 때문이다. 물론, 전보舞)에서 확인한 사실이지만 염산의 농도가 높으면 분자량 7만 짜리 피크는 분자량 1000 정도의 피크로 분해되는 사실을 확인하였다. 그러므로, 염산의 농도, 반응시간, 반응온도를 조절하여 목적하는 크기의 단백질로 추출 및 분해할 수 있다.
80)의추출율을 나타냈다. 이들 삼단계 과정으로 동결건조녹용은 98.15%, 열건조 녹용은 97.35%, 녹각은 99.14% 추출되었다. HI+C로 분석한 결과, 녹용 및 녹각추출물에서 나타나는 고분자 피크는 단백질 가수분해 효소의 작용으로 분자량 1,000 정도의 작은 피크로 분해되었고 남은 각질은 0.
8 N 염산에 의하여 분자량 7만 정도의 단백질이 추출되었다. 이상의 결과로부터 동결건조 녹용의 추출에는 물과 protease에 의한 추출, 열 건조 녹용의 추출에는 protease 와 염산에 의한 추출, 녹각의 추출에는 염산에 의한 추출이 효과적이었다.
이상의 연속으로 이어진 삼단계 추출법으로 교반 추출한 동결건조 녹용은 98.6%, 교반하지 않은 것은 98.15%, 열건조 녹용은 97.35%, 녹각은 99.14% 추출되었다.
전보勺에서 동결건조 녹용을 교반 추출한 것은 98.6%, 본보에서 교반하지 않은 동결건조 녹용은 98.15 %, 열건조 녹용은 97.35%, 녹각은 99.14%의 추출율을나타냈다. 녹각의 경우 물, 효소 염산에 의한 삼단계추출율은 99.
9%)로, 녹용의 단백질 추출율은 동결건조 녹용과 열건조 녹용의 차이가 없었다. 중량으로 분석한 추출율은 동결건조 녹용은 79.14%, 열 건조 녹용은 82.64%, 녹각은 98.44%를 나타냈다. 열 건조 녹용의 추출율이 동결건조 녹용보다 약간 더 높은 것은 단백질이 열변성되어 분자구조가 흐트러져서 염산의 작용을 받기 쉬워졌기 때문이다.
총추출물 중에 단백질성 추출물은 동결건조 녹용은 81.1%(흡광도 7.16), 열건조 녹용은 613%(흡광도 2.73), 녹각은 58.1%(흡광도 0.18)를 나타냈다. 나머지는 아미노산 및 펩티드성 물질이다.
총추출물 중에 단백질성 추출물은 동결건조 녹용은64.8%(흡광도 2.98), 열건조 녹용은 65.5%(흡광도 3.08), 녹각은 65.0%(흡광도 1.82)로 추출율이 거의 같았다.
총추출물 중에 단백질성 추출물은 동결건조 녹용은65.1%(흡광도 2.93), 열건조 녹용은 65.4%(흡광도 3.68), 녹각은 70.3%(흡광도 0.45)를 나타냈다. 나머지는 아미노산 및 펩티드성 물질이다.
한편 직접 산처리한 추출액의 HPLC 는 Fig. 5와 같이 동결건조 녹용, 열건조 녹용 모두 210 nm에서 분자량 7만 정도의 피크량이 가장 많았고, 280 nm의 모습도 거의 같았다. 녹각의 경우, 분자량 7만 정도의 피크량이 가장 많지만 그보다 큰 분자량의 피크가 있는 점이 녹용과 다르다.
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