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문제 정의
- 본 연구에서는 빈용 한약재에 식품에 이용되는 각종 가공 방법을 응용하였을 경우 이에 따라 변화하는 성분 및 약효를 추적하고자 하였으며, 목단피에 대하여 roasting 처리, extrusion, 효소처리 등의 가공방법을 적용한 결과, 효소처리 시에는 변화가 없었으나, roasting 및 extrusion처리 시 1종의 화합물의 함량증가를 확인하였으므로, 본보에서는 이 중 roasting 처리에 의해 생성되는 화합물에대하여 보고하고자 한다.
제안 방법
- 5 gm membrane filter로 여과 후 이 중 20 #를 HPLC로 분석하였다. HPLC 조건은 1%의 acetic acid를 포함한 acetonitrile을 0%에서 100%가 되도록 60분간 농도구배를 주어 분석하였다. 사용된 columne ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.
- Paeonol 의 정량-본실험에서 분리한 paeonol(HPLC UV 280 nm상 순도 95% 이상)을 표준물질로 하여 HPLC 에서의 peak area와 농도간의 상관관계를 이용하여 검 량선[Y(peak area) = 0.0469 XX(concentration in |ig) + 0.0014625,『=0.9948}을 작성하였으며 미지농도의 peak area를 상관관계식에 대입하여 paeonol의 함량을 정량하였다. Roasting 처리 후 증가하는 paeonol의 함량을 정 량하기 위하여 roasting 처리 후 목단피 에탄올 추출물 10 mg을 1 mZ의 에탄올에녹인 후, 4.
- Paeonol 함량증가를 위한 최적 roasting 조건 - 목단피를 roasting 처리 시 roasting 온도와 시간에 따른 paeonol의함량변화를 측정하여 보았다. 우선 시간을 30분으로 고정한후 150, 170, 190, 210℃의 온도조건에서 roasting처리한 후 에탄올로 추출하여 paeonol의 함량변화를 조사한 결과 190℃ 에서 paeonol이 최대함량을 나타내었다(Fig.
- 9948}을 작성하였으며 미지농도의 peak area를 상관관계식에 대입하여 paeonol의 함량을 정량하였다. Roasting 처리 후 증가하는 paeonol의 함량을 정 량하기 위하여 roasting 처리 후 목단피 에탄올 추출물 10 mg을 1 mZ의 에탄올에녹인 후, 4.5 gm membrane filter로 여과 후 이 중 20 #를 HPLC로 분석하였다. HPLC 조건은 1%의 acetic acid를 포함한 acetonitrile을 0%에서 100%가 되도록 60분간 농도구배를 주어 분석하였다.
- Roasting 처리에 의한 목단피 추출물의 HPLC pattern 변화 - 목단피 에탄올 추출물과 roasting 처리 후 목단피 에탄올 추출물의 HPLC pattern을 비교하였다. 목단피 에탄올 추출물보다 roasting 처리 후의 목단피 에탄올 추출물에서 area가 매우 증가된 peak (tR, 28 min)를 발견할 수 있었다(Fig.
- 7734, 70-230 mesh, Merck, NJ, USA) 을 사용하였다. [H- 및 #-NMRe Broker Avance Digital 400 Spectrometer(Karlsruhe, Germany)로 400과 100 MHz에서 각각 측정하였다. Chemical shift는 TMS를 표준물질로 하여 a(ppm)로 나타내었다.
- 여기서 C는 시료를 포함하지않는 200 #의 에탄올 용액의 흡광도치이며, S는 시료를 가하였을 때 흡광도치다. 결과치는 2반복 실험 후 평균치로나타내었으며 이때 양성대조군으로서는 BHAebutylated hydroxyanisol)를 사용하였다.
- 목단피의 DPPH radical 소거활성능에 대한 roasting 처리의 영향 - 목단피를 최적 조건하에서 roasting 처리한 다음, 이의 에탄올 추출물에 대하여 DPPH에 대한 항산화 효과를 처리 전과 비교하였다. 그 결과, paeonol 함량의 증가에도 불구하고 roasting 처리가 항산화 활성에는 거의 영향을 미치지 못하였다(Fig.
대상 데이터
- 구입하여 사용하였다. HPLC는 Dione?사의 AS50 Chromatography Compartment, AS50 Autosampler, AD25 Absorbance Detector, GS50 Gradient Pump로 구성하였다. TLC는 precoated silica gel plate(Kieselgel 60F254, Merck, NJ, USA)를 사용하였으며, silica gel column#romatography 는 Kieselgel 60(Art.
- 재료 및 시약 - 실험에 사용된 목단피는 대구 소재의 한약재상에서 구입하여 사용하였다. HPLC는 Dione?사의 AS50 Chromatography Compartment, AS50 Autosampler, AD25 Absorbance Detector, GS50 Gradient Pump로 구성하였다.
이론/모형
- DPPH에 의한 항산화 활성측정 -DPPH(l, l-diphenyl-2- picrylhydrazyl) radical 소거활성은 Blois ”의 방법에 준하여행하였다. 즉, 25 및 100 ppm 농도의 시료를 포함하는 200 #의 에탄올 용액에 4X10^ M DPPH 용액 800 #를 가하여 10 초간 혼합한 후 10분간 방치하고 525 nm에서 흡광도를 측정한 다음 소거활성 ={l-(S/C)}X10Q의 계산식에 의하여 소거활성을 나타내었다.
성능/효과
- 증가하였다. Roasting 처리의 시간과 온도에 대한 영향을 조사해본 결과 시간에 따라서는 paeonol의 함량변화가 거의 없었으나 150~210℃로 온도를 변화시켜 본 결과 190 ℃에서 paeonol 함량이 최대치를 나타내 roasting 시간보다는 온도가 함량증가에 다소 영향을 미치는 것을 알 수 있었다. 한편, roasting 처리시 DPPH 라디칼에 대한 소거활성은처리전에 비교하여 거의 변화가 없었다.
- 가열처리에 의하여 증가한 화합물의 구조 동정 -Roasting 처리에 의하여 목단피 에탄올 추출물 중 함량이 증가된compound 1의 *H-NMR 분석결과, 6 12.73 에서 hydrogen bond를 하고 있는 hydroxy proton이 검출되었으며, aromatic region에서 5 7.82(1H, d, J=8.9 Hz), 6.52 (1H, dd, J=8.9, 2.4 Hz), 6.47(1H, d, J=2A Hz)의 proton signal로부터 1, 2, 4-trisubstituted benzen ring 골격을 예상할 수 있었다. 또한 8 3.
- 처리 전과 비교하였다. 그 결과, paeonol 함량의 증가에도 불구하고 roasting 처리가 항산화 활성에는 거의 영향을 미치지 못하였다(Fig. 4). 한편, extrusion을 행한 경우도 paeonol의 함량은 매우 증가하였으나 항산화 활성은 처리 전에 비교하여 약 2배정도 증가하는 것을 관찰할 수 있었다(data 미제시).
- 한편 이 조건에서 5, 10, 30, 60분간 시간을 달리하여 목단피를 roasting 한 후 에탄올로 추출하여 paeonol의 함량변화를 조사해본 결과 함량변화는 매우 미미하였다(data 미제시). 따라서 roasting시간보다는 온도에 영향을 받으며 190℃가 가장 좋은 온도조건임을 알 수 있었고, 이 조건 하에서 목단피 에탄올 추출물 중 paeonol의 함량은 에탄올 추출물 1 g당 454.3±5.7 mg으로 처리전(142.4±3.3 mg/g)의 3배에 달하는 것으로 분석되었다.
- 추출물의 HPLC pattern을 비교하였다. 목단피 에탄올 추출물보다 roasting 처리 후의 목단피 에탄올 추출물에서 area가 매우 증가된 peak (tR, 28 min)를 발견할 수 있었다(Fig. 1).
- roasting 처리 시 roasting 온도와 시간에 따른 paeonol의함량변화를 측정하여 보았다. 우선 시간을 30분으로 고정한후 150, 170, 190, 210℃의 온도조건에서 roasting처리한 후 에탄올로 추출하여 paeonol의 함량변화를 조사한 결과 190℃ 에서 paeonol이 최대함량을 나타내었다(Fig. 3). 한편 이 조건에서 5, 10, 30, 60분간 시간을 달리하여 목단피를 roasting 한 후 에탄올로 추출하여 paeonol의 함량변화를 조사해본 결과 함량변화는 매우 미미하였다(data 미제시).
- 4). 한편, extrusion을 행한 경우도 paeonol의 함량은 매우 증가하였으나 항산화 활성은 처리 전에 비교하여 약 2배정도 증가하는 것을 관찰할 수 있었다(data 미제시). 이러한 결과는 extrusion을 행한 경우, paeonol의 함량 증가 뿐 아니라 HPLC 상에서 잘 검출되지 않는 화합물들의 생성이 증가되어 항산화 활성이 높아진 것으로 예측된다.
후속연구
- 이러한 결과는 extrusion을 행한 경우, paeonol의 함량 증가 뿐 아니라 HPLC 상에서 잘 검출되지 않는 화합물들의 생성이 증가되어 항산화 활성이 높아진 것으로 예측된다. Extrusion에 의해 생성되는 항산화물질에 대한 본체는 앞으로 더 연구가 이루어져야할 것이다. 또한 각종 처리 후 항산화활성의 변화 뿐 아니라 ACE(Angiotensin Converting Enzyme) 및 TNF-oc(Tumor Necrosis Factor-a)등에 대한 활성 변화를 측정하여 보았으나 뚜렸한 활성의변화는 관측되지 않았다.
- 한편, roasting 처리시 DPPH 라디칼에 대한 소거활성은처리전에 비교하여 거의 변화가 없었다. Paeonole 간보호활성, 항염증작용 등 많은 생물활성m끄)이 알려져 있어 roasting 처리된 paeonol 고함유 목단피를 건강 기능성 식품또는 천연물 의약품의 원료로 이용할 수 있을 것으로 기대된다.
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