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문제 정의
- 결명자 추출액의 추출 특성과 추출액의 항산화성을 검토하여 결명자의 추출 조건을 결정함으로써 결명자 유효성분의 식품 소재화를 위한 기초자료를 얻고자 하였다. 용매와의 비율을 결정하기 위해 8 배, 10배, 12배, 14배의 water를 가하여 추출 수율을 비교한 결과 water와의 비율이 10배일 때 추출 수율이 가장 좋은 것으로 나타났다.
- 따라서 생약재 내의 이러한 작용을 하는 유효물질들을 섭취함으로 인해 산화적 장해를 방이하고 노화를 억제하는 효과를 기대할 수 있다15). 본 연구에서는 결명자 추출액의 추출 특 성과 추출액의 항산화 효과를 토하여 결명자의 추출 조건을 결정함으로써 결명자 유효성분의 식품 소재화를 위한 기초자료를 얻고자 하였다.
제안 방법
- 용매와의 비율을 결정하기 위하여 결명자에 대한 water의 비율을 8배, 10배. 12배, 14배로 달리하여 환 류냉각 추출장치로 가열 추출하면서 시간별로 추출 되어 나오는 가용성 고형분량을 측정하였으며, 그 결과를 <Fig. 1>에 나타내었다.
- 결명자 등에 적정 용매비의 water, 50% ethand, 75% 也以电을 각각 가하여 에서 3시간 동안 추출하면서 가용성 고형분량의 변화를 측정하였다.가용성 고형분(soluble solid)은 굴절당도계 (Hand refrectaneter, modd Nl, range : 0~35%, Atago,Japan)를 사용하여 상온에서 3회 측정한 후 °Brix로 나타내었다.
- 결명자에 10배의 Wats', 50% ethanol, 75% ethand을 가하여 3시간 동안 추출하면서 가용성 고형분량 의 변화를 측정하여에 나타내었다.
- 결명자의 적정추출 용매비를 결정하기 위하여 결명자에 대한 water의 비율을 8배, 10배, 12배, 14배로 달리하고, 환류 냉각 추출 장치를 이용하여 100℃ 로 3시간 동안 가열 추출하면서 가용성 고형분량을 측정하여 적정 용매 비율을 결정하였다.
- 유리당 함량은 HPLC(TCM, Waters, Japan)를 사용하여 측정하였다. 이때 이동상은 78% acetonitrile 이었고, flow rate는 1.
- 9%EtOH 2ml을 가하여 총액의 부피가가 되도록 하였다. 이 반응앰은 약 10초간 혼합하고 실온에 10분방치한 후 분광광도계 (UV/VIS spectremeter, Jasoo, Japan)를 사용하여 52&un에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여효과는 추출물의 첨가 전·후의 차이를 백 분율로 나타내었다.
- 즉, 희석액 5mZ에 Fdin reagent 5mZ을 가하고 3분간 정치한 다음 5mZ의 10% Na2(O4용액을 가하였다. 이 혼합액을 1시간 동안 정치한 후 분광광도계를 사용하여 760nm에서 흡광도를 측정하고 (+)catechin을 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 총 폴리페놀 함량을 구하였다.
- 추출액의 산도는 water, 50% ethand, 75% ethand추출 시 추출 완료 시점에서 산도를 측정하였다. 적정 용액으로는 0.1N NaOH용액을 사용하였으며, 적정 시 pH 8.3의 종말점까지 소비된 0.1N NaOH 용액의 양을 측정하여 사과산(maBc acid)함량으로 환산 하였다-
- 주줄물의 전자공여 작용(electron donating abflities,EDA)은 강등의 방법17)을 변형하여 각각의 추출물에 대한 DPPH(a. a-diphenyl-picrylhydrazyl) 의 전자공여효과로 각 시료의 환원력을 측정하였다. 즉, 추출물 0.
- SOD 유사활성의 측정은 Marklund 와 Marklund의방법을 변형한 Kim 등의 방법을 이용하여 실시하였다. 즉, 각 추출물을 감압농축한 Tris-HClbuffer(50mMtris[hydroxy- methyl]amino-methane + lOmM EDTA, pH 8.5)를 이용하여 pH 8.5로 조절된 시료액을 만들었다. 각 시료 0.
- a-diphenyl-picrylhydrazyl) 의 전자공여효과로 각 시료의 환원력을 측정하였다. 즉, 추출물 0.2ml에 4X1O-4M DPPH용액(99.9% EtOH에 용해) 0.8m/, 0.1M phosphate bufer(pH 6.5) 2m;와 99.9%EtOH 2ml을 가하여 총액의 부피가가 되도록 하였다. 이 반응앰은 약 10초간 혼합하고 실온에 10분방치한 후 분광광도계 (UV/VIS spectremeter, Jasoo, Japan)를 사용하여 52&un에서 흡광도를 측정하였다.
- 추출액의 산도는 water, 50% ethand, 75% ethand추출 시 추출 완료 시점에서 산도를 측정하였다. 적정 용액으로는 0.
- 추출액의 탁도 (turtidity) 는 water, 50% ethanol, 75% ethand 추출한 시료를 spectrophotometer (V- 550, Jasco, Japan)를 이용하여 650&rm에서 측정하여 흡광도로 나타내었다. 색도는 색 차계 (Colordifference meta, Cdor QUEST U Sphere Systan, USA)를 이용하여 water, 50% ethand, 75% ethanol추출한 시료의 L(명도), a(적색도), b(황색도)값을 측겅하였다.
대상 데이터
- SA). 검출기는 RI detecta(RI-903, Jasco,JAPAN)를 사용하였다.
- 본 실험에 사용된 결명자는 경동시장에서 구입하여 4℃ 에서 보관하면서 실험에 사용하였다.
이론/모형
- SOD 유사활성의 측정은 Marklund 와 Marklund의방법을 변형한 Kim 등의 방법을 이용하여 실시하였다. 즉, 각 추출물을 감압농축한 Tris-HClbuffer(50mMtris[hydroxy- methyl]amino-methane + lOmM EDTA, pH 8.
- 종 폴리페놀의 함량(total polyphenol content)은 분석방법으로 널리 사용되고 있는 Folins-Denis방법 ⑹으로 측정하였으며, 각각의 추출조건에 따라 제조된 추출액의 2배희석액을 사용하였다. 즉, 희석액 5mZ에 Fdin reagent 5mZ을 가하고 3분간 정치한 다음 5mZ의 10% Na2(O4용액을 가하였다.
성능/효과
- 03%로 가장 높은 함량을 나타 내었으며..75% ethanol 추출액은 0.02%로 다른 용매에 비해 현저하게 낮은 함량을 나타내었다. 전자공 여능은 50% ethan이에서 66.
- 8배, 10배, 12배, 14배의 water를 가했을 때 120분까지 급격하게 상승하다가 120분 이후에는 평형에 도달하였으며, 각 시료의 8배, 10배. 12배, 14배 처리구별 추출 수율은 각각24.0%, 25.0%, 22.8%, 21.0%, 나타나 물과의 비율이10배일 때 추출 수율이 가장 좋은 것으로 나타났다. 이는 상황버섯 분말의 추출에서 추출시간이 증가할수록 가용성 성분이 증가하다가 추출평형 시점 이후부터는 일정하였다는 연구보고와 가수량이 10배수 일 때 가용성 성분의 함량이 가장 높았다20)는 연구보고와 유사한 결과를 보여 주었다.
- 또한 추출 용매별 활성은 총 폴리페놀 함량과 전자공여능 측정 결과와 비숫한 경향으로. 50% ethanol 추출액이 다른 두 용매보다 우수한 것으로 나타났다. 송 등6은 찔레 영지버섯 추출물의 생리 활성 연구에서 폴리페놀 성분과 단백 다당체 등에 의해 SOD 유사활성이 나타난 것으로 보고하였는데, 본 실험의 결과도 이와 같이 폴리페놀 성분이 SOD 유사활성을 나타내는 것으로 사료된다.
- 1>에 나타내었다. 8배, 10배, 12배, 14배의 water를 가했을 때 120분까지 급격하게 상승하다가 120분 이후에는 평형에 도달하였으며, 각 시료의 8배, 10배. 12배, 14배 처리구별 추출 수율은 각각24.
- 함량과 비슷한 경향을 나타내었다. SOD 유 사활성 측정 결과는 50% ethanol 추출액에서50.56%로 가장 높은 활성을 나타냈었으며, 총 폴리 페놀 함량과 전자공여능 측정 결과와 비숫한 경향으로, 50% ethanol 추출액이 다른 두 용매보다 우수한 것으로 나타났다.
- 추출 용매별 유리당의 함량은 water가 다른 '추출용매에 비해 높게 나타났으며. ethanol 함량이 증가할수록 유리당 함량은 감소하는 것으로 나타났다.
- 페놀화 합물들은 수소공여작용에 따른 환원 활성에 의하여 지질의 산화를 억제시키거나 지연시키는 것으로 알려져 있다X). 따라서 결명자 추출액도 항산화 효과를 나타낼 것이라 사료되며, 특히 다른 용매에 비해 50% ethanol 추출액이 높은 효과를 나타낼 것으로 판단된다.
- 결명자 추출액의 추출 특성과 추출액의 항산화성을 검토하여 결명자의 추출 조건을 결정함으로써 결명자 유효성분의 식품 소재화를 위한 기초자료를 얻고자 하였다. 용매와의 비율을 결정하기 위해 8 배, 10배, 12배, 14배의 water를 가하여 추출 수율을 비교한 결과 water와의 비율이 10배일 때 추출 수율이 가장 좋은 것으로 나타났다. 탁도는 water 추출 액에서 가장 높았으며, 추출용매의 ethanol 농도가 증가할수록 낮아졌다.
- 적정산도는 추출용매의 50% ethand에서 가장 높았으나, 전체적으로 산도가 매우낮았다. 유리당 함량은 fructose 0.08~O.llmg%, glucose 0.09~0.32mg%, sucrose 0.08~126mg% 로나타났다. 총 폴리페놀 함량을 나타낸 것으로 50% ethanol 추출액에서 2.
- 결명자 추출액의 적정산도와 유리당 함량을 측정한 결과는<Table 1>에 나타내었다. 적정산도는 추 출용매의 50% ethaml에서 가장 높았으나, 전체적으로 산도가 매우 낮았다.
- 탁도는 water 추출 액에서 가장 높았으며, 추출용매의 ethanol 농도가 증가할수록 낮아졌다. 적정산도는 추출용매의 50% ethand에서 가장 높았으나, 전체적으로 산도가 매우낮았다. 유리당 함량은 fructose 0.
- 결명자에 10배의 Wats', 50% ethanol, 75% ethand을 가하여 3시간 동안 추출하면서 가용성 고형분량 의 변화를 측정하여<Fig 2>에 나타내었다. 전반적으로 다른 두 용매에 비해 water 추출에서 1.6 °Brix로 가장 높은 가용성 고형분 함량을 나타내었고,75% ethand 추출에서는 0.3 °Brix로 현저하게 낮은가용성 고형분 함량을 나타내었으며, 추출 완료 시점은 120분이내 인 것으로 나타났다.
- 08~126mg% 로나타났다. 총 폴리페놀 함량을 나타낸 것으로 50% ethanol 추출액에서 2.03%로 가장 높은 함량을 나타 내었으며..
- 3>에 나타내었다. 탁도는 water 추출액에서 가장 높았으며, 추출용매의 ethanoi 농도가 증가할수록 낮아져 추출액이 투명항 맑은 노란색을 띠었다.<Fig.
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