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문제 정의
- 그러나 국내 소 세균성 호흡기 질병에 대한 연구가 미진하고, 특정한 균종에 대한 연구보고는 있으나 전반적인 균 분포 상황 및 분리율에 대한 보고는 아직 없는 실정이다. 따라서 본 연구에서는 국내에서 사육되는 소의 세균성 호흡기 질병의 감염상황 및 분리균의 분포율, 약제 감수성 양상 등을 조사하고자 한다.
제안 방법
- 나타내는 7개월령이하 송아지 비점액 195건, 3) 7 개 농가에서 호흡기 질병으로 폐사한 송아지의 병변폐 7건 등을 수거하여 P multocida, P. haemolytica, H. somnus, A. pyogenes 등의 분리를 시도하였다.
- 균분리 재료를 면양혈액한천배지에 접종 (37oC, 1일 배양) 하여 집락형태, 용혈성, 그람염색성 등을 확인한 후, H2S 및 nitrate 시험, catalase와 urease 시험 등의 생물화학적인 성상시험을 실시하여 P multocida와 P. haemolytica를 분리하였다 [10]. P multocida A형의 판정은 면양혈액한천배지에 분리균주를 획선도말한 후 hyaluronidase를 산생하는 Staphylococcus(S.
- haemolytica를 분리하였다 [10]. P multocida A형의 판정은 면양혈액한천배지에 분리균주를 획선도말한 후 hyaluronidase를 산생하는 Staphylococcus(S.) aureuet 수직으로 도말(37oC, 1일 배양)하여 S. aureus 주위의 P. multocida가 발육억 제 되는 것을 양성으로 판정 하였다 [7].
- somnue] 효율적인 분리 를 위하여 Slee와 Stephens의 방법에 따라 선택배지를 제조하였다 [21]. 즉, blood agar base (Difco, USA)에 탈섬유된 면양혈액을 5% 첨가한 뒤 여과멸균된 vancomycin(5 ug/ml), neomycin(5 ug/ml), sodium azide(50 ug/ml), nystatin(100 lU/ml), cyclohexamide(100ug/ml) 과 thiamine monophosphate( 1 ug/ml)을 혼합하여 초대분리배지로 사용하였으며, 집락 형태 및 생물화학적인 성상시험을 거친 후 PCS 확인하였다 [3].
- A. pyogenes 분리동정은, 균분리 재료를 면양 혈액한천배지에 접종(5% CO2, 39oC, 2일 배양)하여 용혈성의 pin-point 집락을 대상으로 생물화학적인 성상시험을 실시한 후 A. pyogenes로 추정되는 균주를 PCR로 최종 동정하였다. A.
- pyogenes로 추정되는 균주를 PCR로 최종 동정하였다. A. pyogenes의 PCRe 용혈성 외독소인 pyolysin을 지배하는 plo 유전자를이 용하였으며, 5'-GGCCCGAATGTCACCGC-3' 와 5'-AACTCCGCCTCTAGCGC-3' 의 primere 시'용하여 270 bp의 증폭산물 형성유무를 관찰하였다 [4].
- 분리주에 대한 항생제 감수성 시험은 디스크 확산법으로 실시하였다. 즉, 분리균을 Mueller Hinton broth (Difg에서 37oC, 18시간 배양한 뒤 Mueller Hinton agar(Difco) 에 도말하여 항생제 디스크를 접종하고 배양후 디스크 주위의 발육억제대로 감수성 유-무를 확인하였다. 감수성 시험에 사용된 항생제는 amikacin(30 ug), amoxicillin/clavulanic acid(20/10 ug), cephalothin (30 ug), chloramphenicol(30 ug), ciprofloxacin(5 ug), enrofloxacin(5 ug), fluorophenicol(30 ug), gentamicin(10 ug), kanamycin(30 ug), lincomycin(2 ug), neomycin(30 ug), norfloxacin(10 ug), penicillin(10 U), tetracycline(30 ug), trimethopiim/sulfamethoxazole(1.
- 도축우의 병변폐 69건을 육안적으로 관찰한 후 각 폐엽의 조직을 10% 중성완충포르말린용액에 고정, 탈수하여 파라핀 절편을 만든 다음 hematoxylin & eosin 염색하여 광학현미경으로 관찰하였다. 각 폐렴의 분류는 Carlton과 McGavin에 근거하여 다음과 같이 분류하였다 [6].
- 각 폐렴의 분류는 Carlton과 McGavin에 근거하여 다음과 같이 분류하였다 [6]. 즉, 기관지염과 세기관지염을 동반한 기관지 간질성폐렴 소견을 보이는 마이코플라즈마성 폐렴, 간질성 폐렴 및 호산구 침윤, 유충 등이 관찰되는 기생충성 폐렴, 대엽 섬유소성 폐렴과 기관지 폐렴 소견을 보이는 세균성 폐렴 그리고 세엽폐포와 기도에 염증을 동반한 세기관지 간질성 폐렴 소견을 보이는 바이러스성 폐렴둥으로 구분하였다.
- 소의 호흡기 질병 가검물을 대상으로 P multocida, P haemolytica, A. pyogenes, H. somnus 등 4종의 호흡기 세균을 분리하였으며, 분리균의 약제감수성 및 병변폐의폐렴 소견 등을 조사하였다.
대상 데이터
- 즉, 분리균을 Mueller Hinton broth (Difg에서 37oC, 18시간 배양한 뒤 Mueller Hinton agar(Difco) 에 도말하여 항생제 디스크를 접종하고 배양후 디스크 주위의 발육억제대로 감수성 유-무를 확인하였다. 감수성 시험에 사용된 항생제는 amikacin(30 ug), amoxicillin/clavulanic acid(20/10 ug), cephalothin (30 ug), chloramphenicol(30 ug), ciprofloxacin(5 ug), enrofloxacin(5 ug), fluorophenicol(30 ug), gentamicin(10 ug), kanamycin(30 ug), lincomycin(2 ug), neomycin(30 ug), norfloxacin(10 ug), penicillin(10 U), tetracycline(30 ug), trimethopiim/sulfamethoxazole(1.25/23.75 ug) 등 15 종을 사용하였다.
이론/모형
- H. somnue] 효율적인 분리 를 위하여 Slee와 Stephens의 방법에 따라 선택배지를 제조하였다 [21]. 즉, blood agar base (Difco, USA)에 탈섬유된 면양혈액을 5% 첨가한 뒤 여과멸균된 vancomycin(5 ug/ml), neomycin(5 ug/ml), sodium azide(50 ug/ml), nystatin(100 lU/ml), cyclohexamide(100ug/ml) 과 thiamine monophosphate( 1 ug/ml)을 혼합하여 초대분리배지로 사용하였으며, 집락 형태 및 생물화학적인 성상시험을 거친 후 PCS 확인하였다 [3].
- Pasteurella spp. 분리주에 대한 항생제 감수성 시험은 디스크 확산법으로 실시하였다. 즉, 분리균을 Mueller Hinton broth (Difg에서 37oC, 18시간 배양한 뒤 Mueller Hinton agar(Difco) 에 도말하여 항생제 디스크를 접종하고 배양후 디스크 주위의 발육억제대로 감수성 유-무를 확인하였다.
성능/효과
- 국내 소 세균성 호흡기 질병의 감염상황을 알아보기 위하여 병변폐 및 비점액에서 P. multocida 등 4종의 호홉기 세균을 분리한 결과, 병변폐 95건 중 41건(43.2%) 에서 54주의 호흡기 세균이 분리되었다. 그 중 P multocida type A 단독 분리된 경우가 25건(26.
- 5%)이었다. 분리된 54주 중 34 주(63.0%)가 P multocida type A, 14주(25.9%)가 A. pyogenes 이었으며, 이들 두 균종이 전체 도죽우 병변폐분리주의 88.9%(n = 48厝 차지하였다. 한편, 호흡기 증상을 나타내는 7개월령 이하 송아지 비점액 195건 중 158건(81.
- 단독 분리가 우세하였다. 호흡기 질병으로 폐사한 송아지 9두를 부검한 결과, 자료로 제시되지는 않았지만, 전두수에서 출혈성 화농성 폐렴 소견을 관찰할 수 있었다. 9건의 병변폐에서 12주의 호흡기 세균이 분리되었으며 P multocida type A가 6주(50.
- 호흡기 질병으로 폐사한 송아지 9두를 부검한 결과, 자료로 제시되지는 않았지만, 전두수에서 출혈성 화농성 폐렴 소견을 관찰할 수 있었다. 9건의 병변폐에서 12주의 호흡기 세균이 분리되었으며 P multocida type A가 6주(50.0%连 가장 많이 분리되었고 A. pyogenee} 4주(33.3%), P haemolytica、2 주(16.7%) 분리되었다. 이상의 결과에서 나타난 바와 같이 국내 소 세균성 호흡기 질병에서는 P haemolytica 보다 P multocida type A 단독 분리가 훨씬 우세하였으며, 병변폐에서는 P multocida type A와 A.
- 7%) 분리되었다. 이상의 결과에서 나타난 바와 같이 국내 소 세균성 호흡기 질병에서는 P haemolytica 보다 P multocida type A 단독 분리가 훨씬 우세하였으며, 병변폐에서는 P multocida type A와 A. pyogenes 의 혼합 분리가 높은 반면에 비점액에서는 P haemolytica 단독 분리가 우세하였다 (Table 1).
- 를 대상으로 항생제 감수성시험을 실시하였던 결과, P multocida type A(n = 78)는 amoxicillin/ clavulanic acid, ciprofloxacin, fluorophenic 이에서 분리주의 대부분이 고도의 감수성을 나타내었고, cephalothin, enrofloxacin, norfloxacin에서도 80%이상이 감수성을 나타낸 반면, amikacin, gentamicin, kanamycin, lincomycin, trimethoprim/sulfamethoxazole 에서는 분리주의 30% 이하에서만 감수성이 나타났다. 한편, P. haemolytica(n = 23) 는 amoxicillin/clavulanic acid, cephalothin, chloramphenicol, ciprofloxacin, enrofloxacin, fluorophenicol, norfloxacin 에서는 분리균주의 대부분이 고도의 감수성을 보였고, kanamycin, lincomycin, trimethoprim/sulfamethoxazole 서는 분리주의 대부분이 감수성이 없는 것으로 나타났다 (Table 2).
- 도축우의 병변폐 69건에 대해서 병리조직학적인 검사를 실시한 결과, 마이코플라즈마성 폐렴과 세균성 폐렴이 혼합된 폐가 27건(39.1%)으로 가장 우세하였으며, 마이코플라즈마성 폐렴만 관찰된 폐가 22건(31.9%), 세균성 폐렴만 관찰된 폐가 15건(21.7%)으로 나타나 이들이 국내 소의 병변폐중 92.8%(n = 64)를 차지하였으며, 그 외 바이러스성 폐렴과 기생충성 폐렴은 분포도가 극히 미약하였다 (Table 3).
- 백신개발이 절실히 요구됨을 알 수 있었다. 한편, 병변폐에서는 P multocida type A와 A. pyogenes가 함께 분리된 경우가 우세하였으나 송아지 비점액에서는 오히려 P haemolytica 단독 분리된 경우가 높았으며, H. somnuW 병변폐에서는 전혀 분리가 되지 않고 비 점액 시료에서만 분리가 되어 폐와 비강의 호흡기 세균의 분포도 차이가 있음을 알 수 있었다.
- [16]. 그러나 본 연구에서 소의 병변폐에 대해서 병리조직학적인 조사를 실시한 결과, 바이러스가 폐렴에 관여한 것은 4.3%(n=3) 에 불과하였으며, 국내 소 호흡기 질병의 원인체로써 바이러스보다는 세균이나 마이코플라즈마가 대부분을 차지함을 알 수 있었다.
- (1) 도축우의 병변폐 95건 중 41건(43.2%)에서 54주의 호흡기 세균이 분리되었으며, 그 중 34주(63.0%)가 P. multocida type A, 14주(25.9%)가 A. pyogenes 이었으며, 이들 두 균종이 전체 도축우 병변폐 분리주의 88.9% 를 차지하였다.
- (2) 호흡기 증상을 나타내는 7개월령 이하 송아지 비점액 195건 중 158건(81.0%)에서 167주의 호흡기 세균이 분리되었으며, P multocida type A가 단독 분리된 경우가 99건(50.8%)으로 가장 많았다.
- (3) 호흡기 질병으로 폐사한 송아지 9두의 병변폐에서 12주의 호흡기 세균이 분리 되 었으며 P multocida type A가 6주(50.0%), A. pyogenes가 4주(33.3%) 분리되었다.
- 송아지 비점액에서 분리된 Pasteurella spp.로 항생제 감수성시험을 실시하였던 결과, amoxicillin/clavulanic acid, cephalothin, ciprofloxacin, enrofloxacin, fluorophenicol, norfloxacin 둥에서는 분리균주의 80% 이상이 높은 감수성을 나타내었고, kanamycin, lincomycin, trimethoprim/ sulfamethoxazole 에서는 매우 낮은 감수성을 나타내었다.
- (5) 도축우의 병변폐 69건에 대해서 병리 조직 학적인 검사를 실시한 결과, 마이코플라즈마성 폐렴과 세균성폐렴이 혼합된 폐가 27건(39.1%)으로 가장 우세하였으며, 마이코플라즈마성 폐렴만 관찰된 폐가 22건(31.9%), 세균성 폐렴만 관찰된 폐가 15건(21.7%)으로 나타나 이들이 병변폐의 대부분(92.8%)을 차지하였다.
- spp.를 대상으로 항생제 감수성시험을 실시하였던 결과, P multocida type A(n = 78)는 amoxicillin/ clavulanic acid, ciprofloxacin, fluorophenic 이에서 분리주의 대부분이 고도의 감수성을 나타내었고, cephalothin, enrofloxacin, norfloxacin에서도 80%이상이 감수성을 나타낸 반면, amikacin, gentamicin, kanamycin, lincomycin, trimethoprim/sulfamethoxazole 에서는 분리주의 30% 이하에서만 감수성이 나타났다. 한편, P.
후속연구
- 본 연구에서는 도축우의 병변폐 뿐만 아니라 호흡기 증상을 나타낸 송아지의 비점액, 폐사한 송아지의 병변 폐 등 모든 시험군에서 P multocida type A의 분리가 월둥히 높아서 국내 소 세균성 호흡기 질병을 근절하기 위해서는 P haemoleecaeeer P multocida에 대한 연구 및 백신개발이 절실히 요구됨을 알 수 있었다. 한편, 병변폐에서는 P multocida type A와 A.
- 2] 그러나 본 연구에서는 P haemolytica 모든 분리 균들이 trimethoprim/sulphamethoxazole] 내성을 보여 Allan 둥의 보고와는 차이가 있었다. 이렇듯 농장별로 항생제 내성을 획득한 균주의 차이가 있을 수 있으므로, 정기적으로 분리주를 이용한 항생제 감수성 시험을 실시하여 유용한 치료 약제를 선발하는 것이 좋을 것으로 생각된다.
- 이상의 연구결과를 기초로 소의 세균성 호흡기 질병에서 가장 많이 분리되는 P multocida type A와 P haemolytica 등을 이용하여 국내 실정에 적합한 소 세균성 호흡기 질병 백신개발이 신속히 이루어져야 할 것으로 생각된다.
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