Streptozotocin-유발 당뇨쥐에서 다시마 추출물 첨가식이의 항당뇨 및 항산화 효과 Hypoglycemic and Antioxidative Effects of Dietary Sea-Tangle Extracts Supplementation in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats원문보기
The purpose of this study was to investigate the effect of dietary sea-tangle extracts on blood glucose levels, serum lipid levels, thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) and glutathione enzymes in diabetic rats treated with streptozotocin (STZ) Four groups of rats (Sprague-Dawley male rats,...
The purpose of this study was to investigate the effect of dietary sea-tangle extracts on blood glucose levels, serum lipid levels, thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) and glutathione enzymes in diabetic rats treated with streptozotocin (STZ) Four groups of rats (Sprague-Dawley male rats, 180 - 200g) were consisted of normal rats fed control diet (C), diabetic rats fed control diet (CD), normal rats fed sea-tangl extracts diet (E), and diabetic rats fed sea-tangle extracts diet (ED). Diabetes was induced by single injection of streptozotocin (60 mg/kg B.W.). After 7 weeks, rats were sacrificed, serum glucose, serum total cholesterol, triglyceride levels and glutathione enzymes were measured. Urine was significantly higher in CD and ED groups than those of others (p < 0.05). Levels of amylase, calcium, uric acid, hemoglobin, cholesterol and low density lipoprotein (LDL)-cholesterol were different among four groups. But high density cholesterol (HDL)-cholesterol of ED group was significantly higher (p < 0.05) than other groups (C and E group) And the weekly change of serum glucose was decreased in the 3th,4th and 5th weeks. But serum triglyceride (TG) of diabetic rats fed sea-tangle extracts diet (ED) was lower than diabetic rats fed control diet (CD). Activity of hepatic microsomal G6Pase was significantly increased CD and ED groups higher than C and E group, but kidney was decreased ED group. Hepateic glutathione S-transferase (GST) of CD and ED group were significantly lower than C and E group (p<0.05), glutathione peroxidase (GPX) of E and ED group were significantly higher than C and CD group (p<0.05), glutathione reductase (GR) activities of ED group was significantly lower than other groups, malondialdehyde (MDA) of ED was lower than E and CD group, but kidney was increased significant in ED group compared to liver. These results suggested that dietary sea-tangle extracts reduce .hepatic disorders such as oxidant than kidney. In conclusion, dietary sea-tangle extracts groups reduced blood TG and hepatic MDA levels in STZ-induced diabetic rats.
The purpose of this study was to investigate the effect of dietary sea-tangle extracts on blood glucose levels, serum lipid levels, thiobarbituric acid reactive substance (TBARS) and glutathione enzymes in diabetic rats treated with streptozotocin (STZ) Four groups of rats (Sprague-Dawley male rats, 180 - 200g) were consisted of normal rats fed control diet (C), diabetic rats fed control diet (CD), normal rats fed sea-tangl extracts diet (E), and diabetic rats fed sea-tangle extracts diet (ED). Diabetes was induced by single injection of streptozotocin (60 mg/kg B.W.). After 7 weeks, rats were sacrificed, serum glucose, serum total cholesterol, triglyceride levels and glutathione enzymes were measured. Urine was significantly higher in CD and ED groups than those of others (p < 0.05). Levels of amylase, calcium, uric acid, hemoglobin, cholesterol and low density lipoprotein (LDL)-cholesterol were different among four groups. But high density cholesterol (HDL)-cholesterol of ED group was significantly higher (p < 0.05) than other groups (C and E group) And the weekly change of serum glucose was decreased in the 3th,4th and 5th weeks. But serum triglyceride (TG) of diabetic rats fed sea-tangle extracts diet (ED) was lower than diabetic rats fed control diet (CD). Activity of hepatic microsomal G6Pase was significantly increased CD and ED groups higher than C and E group, but kidney was decreased ED group. Hepateic glutathione S-transferase (GST) of CD and ED group were significantly lower than C and E group (p<0.05), glutathione peroxidase (GPX) of E and ED group were significantly higher than C and CD group (p<0.05), glutathione reductase (GR) activities of ED group was significantly lower than other groups, malondialdehyde (MDA) of ED was lower than E and CD group, but kidney was increased significant in ED group compared to liver. These results suggested that dietary sea-tangle extracts reduce .hepatic disorders such as oxidant than kidney. In conclusion, dietary sea-tangle extracts groups reduced blood TG and hepatic MDA levels in STZ-induced diabetic rats.
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문제 정의
그러므로 본 연구에서는 다시마 추출물를 당뇨쥐에 섭취 시켜 지질과 혈당에 미치는 효과를 조사하고, 더 나아가 당뇨합병증의 발생기전으로 생각되는 항 산화효소계 활성을 측정하여 기능성 식품으로서의 생리활성을 규명하고자 한다.
있었다. 또한 중성지방이 감소하고 HDL-콜레스테롤의 증가하는 경향으로 심혈관계와 관련되는 당뇨합병증의 억제 가능성을 제시하였다.
제안 방법
6으로 전남 무안군 청계면에 있는 허니비 식품 (주)에서 분석되었다. 4개의 식이 군을 각각 대조군, 당뇨를 유도한 당뇨 대조군, 다시마추출물 첨가군과 다시마 추출물 첨가 당뇨군으로 분리하였으며 당뇨군의 분리는 각 군당 평균 혈당이 비슷하도록 하였다. 식이는 자유롭게 먹이고 매일 신선한 것으로 공급하였으며 물은 자유롭게 섭취시켰다.
대조군은 동량의 citric acid buffer 용액을 주사하였다.的 당뇨 유발 확인은 꼬리 정맥에서 채혈하여 혈당계 (Medsense 2, USA)로 혈당을 측정하여 비공복 혈당이 250 mg/dl 이상 인동 물을 당뇨가 유발된 것으로 판정하였다.
다시마 추출물 첨가식이가 당뇨쥐의 당질과 지질대사 및 항산화 효소계에 미치는 영향을 규명하기 위하여 SD 계 흰쥐에 다시마 추출물을 물 대신 급여하여 7주간 실험 사육한 후 혈청의 포도당 및 지질농도와 주요장기의 항산화 효소의 활성도를 관찰하였다.
식이는 자유롭게 먹이고 매일 신선한 것으로 공급하였으며 물은 자유롭게 섭취시켰다. 동물 사육실의 온도는 20 ±2℃가 되도록 조정하였고, 광주기와 암주기를 12시간으로 유지하여 7주간 사육하였다 (Table 1).
매주 체중을 측정하고 매일 식이 섭취량과 다시마 추출물 섭취량은 급여량과 잔여량의 차이로 측정하였다. 다시마 추출물 군은 수분 섭취를 급여하지 않고 다시마 추출물만 급여하였다.
실험동물은 16시간 절식시키고 당뇨군은 streptozotocin (60 ㎎/㎏ B.W.) 을 0.01 M citric acid buffer (pH 4.5) 에 용해하여 1회 복강 주사하여 당뇨를 유도하였다. 대조군은 동량의 citric acid buffer 용액을 주사하였다.
실험을 실시하였다. 실험식이는 모든 영양소를 고루 함유한 (Table 1) 대조식이와 다시마 추출물 (허니 비식품 다시마 엑기스를 10배 희석한 수용액을 사용하였으며 이는 다시마 5 g/dl에 해당) 첨가 식이로 하였다 (Table 1). 다시마 추출물의 제조는 다시마 (중국산) 와 물 (1 : 8)을 steamer (60℃) 에서 12시간 추출하였다.
혈액분석기 (FUJI DRI-CHEM 3000)로 혈청과 뇨에서측정하였다.
전까지 -70℃ 냉동고에 보관하였다. 혈액을 받은 뒤 즉시 개복하여 간과 신장을 적출하여 혈액과 지방질 및 결체조직을 제거한 후 차가운 생리식 염수로 세척한 다음 여과지에 놓아 여분의 물을 흡수시키고 무게를 측정하였다. 간 8 g 을 잘게 다진 후 25 ml의 ice cold homogenizing media (M Tops, Misung Co.
혈청 총 콜레스테롤과 중성지방은 Bucolo 방법에 준한 효소 kit, HDL-콜레스테롤은 효소법에 의한 kit (아산제약) 로 각각 측정하고 이들 측정치로부터 LDL-콜레스테롤치 {LDL CHOL = Total CHOL - (HDL CHOL + TG/5)} 를구하였다.'”
대상 데이터
실험식이는 모든 영양소를 고루 함유한 (Table 1) 대조식이와 다시마 추출물 (허니 비식품 다시마 엑기스를 10배 희석한 수용액을 사용하였으며 이는 다시마 5 g/dl에 해당) 첨가 식이로 하였다 (Table 1). 다시마 추출물의 제조는 다시마 (중국산) 와 물 (1 : 8)을 steamer (60℃) 에서 12시간 추출하였다. 다시마 엑기스의 성분은 수분 (53.
생후 3주령의 Sprague-Dawley종 숫쥐 50마리를 삼육실험동물 센터에서 구입하여 고형사료를 먹이면서 사육환경에 적응시킨 후, 체중이 약 180 - 200 g 될때 4군으로 나누어 실험을 실시하였다. 실험식이는 모든 영양소를 고루 함유한 (Table 1) 대조식이와 다시마 추출물 (허니 비식품 다시마 엑기스를 10배 희석한 수용액을 사용하였으며 이는 다시마 5 g/dl에 해당) 첨가 식이로 하였다 (Table 1).
데이터처리
Values within the column with different alphabets are singnificantly different (p b>c>d).
구하였다. 각 실험군간 즉, 대조군 (C), 대조 당뇨군 (CD), 다시마 추출군 (E) 및 다시마 추출 당뇨군 (ED) 간의 유의성은 one-way AN0VA의 Duncan's multiple range test°1] 의해 p<0.05 수준에서 검증하였다.
실험 결과는 SPSS 통계 package를 이용하여 평균치와 표준편차를 구하였다. 각 실험군간 즉, 대조군 (C), 대조 당뇨군 (CD), 다시마 추출군 (E) 및 다시마 추출 당뇨군 (ED) 간의 유의성은 one-way AN0VA의 Duncan's multiple range test°1] 의해 p<0.
이론/모형
Baginski 등의 방법으로 glucose 6-phosphatase (G6Pase) 의 활성도를 측정하였고, ⑲ Buege와 Aust의 방법에 따라 지질과산화물함량을 각각 측정하였다
Habig 등의 방법으로 glutathione S-transferase (GST) 의 활성도를TappeL의 방법으로 glutathione peroxidase (GPx) 활성도를 측정하였다a,
Lowry 등의 방법으로 bovine serum albumin을 표준용액으로 사용하여 측정하였다.23
성능/효과
6) 간장의 GPX 활성도의 경우, 다시마 추출 대조군과 다시마 추출 당뇨군 (ED"] 유의적 (p < 0.05)으로 증가하였다.
1) 다시마 추출물 당뇨군 (ED에서 다사마 추출물 섭취는 당뇨에 의한 체중감소 현상을 보였다.
2) 당뇨군의 혈당농도는 다시마 추출물에 의한 혈당 강하 효과는 3주째에 나타났으나 7주째는 보이지 않았다.
3) 혈청지질 중 총 콜레스테롤과 LDL-콜레스테롤은 변화가 없었으나 중성지방은 다시마 추출 당뇨군 (ED) 에서감소하는 경향이고 HDL-콜레스테롤은 유의적 (p < 0.05) 증가를 했다.
4) 일반적으로 당뇨시 증가하는 신장의 G6Pase 활성도는 ED군에서 다시마 추출물의 섭취에 의해 감소하는 경향으로 나타났다.
5) 대조군 (C, E) 에서 간장의 GST 활성도는 당뇨 군에서 유의적 (p < 0.05)으로 감소 했다.
7) 간장의 GR 활성도는 다시마 추출물 당뇨쥐 (ED) 에서 다시마 추출물 섭취에 의해 유의적(P < 0.05)으로 감소하였다. 신장에서는 상반되는 경향으로 나타났다.
8) 신장의 MDA는 ED군에서 유의적으로 증기하는 경향이나 간장은 감소하는 경향이었다.
3). HDL (high density lipoprotein) —콜레스테롤농도는 C군에 비교하면 CD 군과 ED군에서 유의적 (p< 0.05)으로 증가하였으나 ED군은 CD군보다 증가하는 경향으로 다시마 추출물의 효과를 관찰할 수 있었다 (Fig. 4). LDL (low dmsity lipoprotein) - 콜레스테롤농도는 대조군에 비해 다른실험군이 감소하는 경향으로 관찰되었다 (Fig.
4). LDL (low dmsity lipoprotein) - 콜레스테롤농도는 대조군에 비해 다른실험군이 감소하는 경향으로 관찰되었다 (Fig. 5). 당뇨쥐에서 당뇨가 진행될수록 혈중 VLDL (very low density lipoprotein) 제거율이감소되어 혈중 중성지질이 증가되는 것으로 보고되고 있는 것"個과는 다른 결과라 할 수 있다.
그러나 당뇨군에서 두류의 경우 검정콩군과 완두군이 셀룰로오스군에 비해 지질과산화물의 농도가 낮았는데 이것은 두루의 높은 항산화 효과 때문이라고 사료된다고 보고하였다.项 그러므로 당뇨쥐의 간지 질과 산화물이 감소하는 경향은 다시마 추출물의 항산화 효과의 가능성을 관찰할 수 있었다 (Fig. 8, 9).
뇨중 Ca의 배설량은 대조군 (C) 에 비해 당뇨 대조군 (CD) 에서 감소하였으나 다른 실험군에서는 대조군(C) 수준으로 회복되는 경향을 보였다. 각 실험군의 hemoglobin 함량은 유의적 차이는 없었으나, 일반적으로 당뇨병 환자의 hemoglobin 함량은 신장기능의 저하로 인한 빈혈증세로 낮아지는 경향이나 본실험이 단기간에 시행되었으므로 변화가 없었다. Lee 등은 치커리 추출물이 실험기간동안 STZ 유발 당뇨쥐의 평균 혈당을 나타낼 수 있는 총 당화 헤모글로빈 (glycosylation hemoglobin) 함량을 저하시키다고 보고하였다 (Table 2-4).
간의 G6Pase 활성도는 대조군(C) 과 다시마 추출물 대조군 (E)에 비해 대조 당뇨군(CD) 과 다시마 추출물 당뇨군 (ED) 에서 유의적 (p< 0.05)으로 증가하고 ED군은 CD군보다 감소하는 경향으로 나타났다 (Fig. 6). 그러나 신장에서는 간과 상반되는 결과로 다시마 추출물 당뇨군이 G6Pase 활성도를 저하시키는 경향을 보였다 (Fig.
05) 감소를 했다. 그러나 신장에서 GR 활성도는 대조군(C) 에 비해 증가하였으나, 다시마 추출물을 섭취한 다시마 추출물 당뇨군 (ED)에서 GR 활성도의 증가는 유의적으로 억제하여 정상 수준을 나타내었다. GR 활성 경우도 신장보다 간장에서 유의적 (p < 0.
다시마 추출물의 제조는 다시마 (중국산) 와 물 (1 : 8)을 steamer (60℃) 에서 12시간 추출하였다. 다시마 엑기스의 성분은 수분 (53.2%), 염도 (13.1%), 조단백 (1.2%), 조지방 (0.03%), 총당질 (43.5%) 과 Brix 48.6으로 전남 무안군 청계면에 있는 허니비 식품 (주)에서 분석되었다. 4개의 식이 군을 각각 대조군, 당뇨를 유도한 당뇨 대조군, 다시마추출물 첨가군과 다시마 추출물 첨가 당뇨군으로 분리하였으며 당뇨군의 분리는 각 군당 평균 혈당이 비슷하도록 하였다.
이는 다시마 추출물급여로 인하여 ED군에서는 증가하지 않았다고 사료된다. 당뇨병에서 당질대사의 비정상과 관련된 주요 증상인 polydipsia, polyphasia, polyuria, glycouria와 hyperglygemia이나 다시마 추출물 당뇨 쥐에서 변배설량과 고혈당이 (3~5주째) 완화되었다. STZe 췌장의 g-cell를 파괴시켜 당뇨를 일으킨다.
대조 당뇨군 (CD) 과 다시마 추출물 당뇨군(ED) 은 대조군 (C)과 다시마 추출물 군 (E) 보다 최종 체중이 유의적 (P < 0.05)으로 감소하였다. 이는 당뇨에 의해서 체지방 및체단백을 분해하는 퇴행적인 대사에 기인한 것으로 생각된다.
따라서 7주간의 다시마 추출물의 섭취로 당뇨쥐의 고혈당이 강하되는 경향이 3주째에 나타났고 7주쩨에는 관찰하지 못하였으나, 당뇨에 의한 산화적 스트레스로 인해 증가한 항산화 효소 활성도는 (간의 GR 활성도가 다시마 추출물 섭취로 인해 정상 수준으로 저하되고 신장의 G6 Pase도 낮아지는 경향) 다시마 추출물의 섭취로 당뇨시 산화적 반응에 대한 방어기전을 제공할 수 있음을 유추할 수 있었다. 또한 중성지방이 감소하고 HDL-콜레스테롤의 증가하는 경향으로 심혈관계와 관련되는 당뇨합병증의 억제 가능성을 제시하였다.
당뇨상태에서 GPX 활성도의 경우, 당뇨 발생 초기 (72시간)에는 GPX 는 변화가 없이 superoxide dismutase (SOD) 가 증가하였고, 만성 당뇨시에는 SOD의 변화 없이 GPX 활성이 감소하였다는 보고, 5™ 나이가 증가할수록 활성이 감소한다는 보고와" 유의적 차이 없었다는 보고 및 alloxan 유도 당뇨쥐에서 GPX활성도의 감소는 혈당증가와 높은 상관관계를 보인다는 보고 등勵 일치된 견해가 없는 실정이다. 본 연구에서 다시마 추출물 당뇨군 (ED) 에서 GPX 의 활성이 증가하였는데. 이는 손상된 간장조직을 보상하고자 GPX 활성이 증가한다는 보고와 ISDBB (insulin-dependent spontaneously diabetic BB Wistar rats) 에서 신장의 GPX활성도가 증가했다는 보고와明 상반되었다.
실험기간 중 혈당의 변화는 대조군 (C) 과 다시마 추출물 대조군 (EC) 에 비해 대조 당뇨군 (CD) 과 다시마 추출물 당뇨군 (ED) 에서 1주와 2주에서 혈당이 높았으나 3주와 4 주에서 감소하다가 5주부터 상승하여 6주와 7주째에 당뇨 쥐의 상태를 유지하였다. 당뇨를 유도하지 않은 대조군 (C) 와 다시마 추출물 대조군 (E) 에서는 E 식이군의 혈당이 낮은 경향으로 나타났다 (Fig.
혈청지질중의 총 콜레스테롤농도는 대조군 (C) 에 비하여 다시마 추출물 대조군(E), 대조 당뇨군 (CD) 과 다시마 추출물 당뇨군(ED) 이 증가하는 경향으로 나타났다 (Fig. 2). 그러나 중성지방농도는 C군에 비하여 E군, CD군과 ED군에서 유의적 (p < 0.
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