노화과정에 산소라디칼이 관여할 가능성을 난소를 절제한 횐 쥐를 동물모델로 하여 알아보았다. 난소를 절제한 쥐와 난소를 절제하지 않은 정상 쥐에서의 생리활성 및 항산화 효과를 알아보기 위하여 CS를 사용하였다. 난소를 절제한 횐 쥐에 각각 CS를 각 100 mg/kg과 200 mg/kg을 투여하고, 이것과 비교하기 위해 난소를 절제한 대조군과 난소를 절제하지 않은 정상군으로 하여 항산화 효과에 관한 실험방법으로 진행하였다. 노화 유도된 쥐의 각 조직에서 지질 과산화가 증가되었고 유리기 반응이 더 심하게 일어난 간 조직에서 노화 진행이 그만큼 촉진되었음을 알 수 있었다. 산소라디칼 반응이 항진된 원인을 규명코자 간 조직에서 항산화 효소의 활성을 조사한 결과, SOD와 GSH의 활성이 감소되었으며, 노화나 지질과산화가 심하게 진행되었던 간 조직에서 이들 항산화 효소의 활성감소가 심한 경향을 나타내었다. AST의 활성은 OVX 군이 Sham 군에 비해 2.1배 높게 나타났으며, ALT 활성은 크게 변화하지 않았다. 과산화지질한량은 OVX 군이 Sham 군에 비해 1.4배 높게 나타났으며, CS를 투여한 군에서는 31%-38%의 저해율을 보였다. 항산화 효소들은 Sham 군에 비해 OVX 군에서 낮게 나타났으며, 물질 투여 군에서는 정도의 차이는 있지만 대체로 증가하는 경향을 보였다. 이러한 결과에서 보듯이, 난소절제로 생성된 유리기는 물질 투여로 인한 항산화 효소의 증가를 가져오고 이는 결국 유리기로 손상된 막의 지질과산화 정도를 완화시켜 세포를 보호하는 효과를 가져왔다고 할 수 있다. 따라서 CS는 여러 가지 측면에서 난소절제로 인해 유도된 지질과산화 및 활성산소에 의한 공격으로부터 세포를 보호하고 회복시켜주는 효과가 있다고 사료되어진다.
노화과정에 산소라디칼이 관여할 가능성을 난소를 절제한 횐 쥐를 동물모델로 하여 알아보았다. 난소를 절제한 쥐와 난소를 절제하지 않은 정상 쥐에서의 생리활성 및 항산화 효과를 알아보기 위하여 CS를 사용하였다. 난소를 절제한 횐 쥐에 각각 CS를 각 100 mg/kg과 200 mg/kg을 투여하고, 이것과 비교하기 위해 난소를 절제한 대조군과 난소를 절제하지 않은 정상군으로 하여 항산화 효과에 관한 실험방법으로 진행하였다. 노화 유도된 쥐의 각 조직에서 지질 과산화가 증가되었고 유리기 반응이 더 심하게 일어난 간 조직에서 노화 진행이 그만큼 촉진되었음을 알 수 있었다. 산소라디칼 반응이 항진된 원인을 규명코자 간 조직에서 항산화 효소의 활성을 조사한 결과, SOD와 GSH의 활성이 감소되었으며, 노화나 지질과산화가 심하게 진행되었던 간 조직에서 이들 항산화 효소의 활성감소가 심한 경향을 나타내었다. AST의 활성은 OVX 군이 Sham 군에 비해 2.1배 높게 나타났으며, ALT 활성은 크게 변화하지 않았다. 과산화지질한량은 OVX 군이 Sham 군에 비해 1.4배 높게 나타났으며, CS를 투여한 군에서는 31%-38%의 저해율을 보였다. 항산화 효소들은 Sham 군에 비해 OVX 군에서 낮게 나타났으며, 물질 투여 군에서는 정도의 차이는 있지만 대체로 증가하는 경향을 보였다. 이러한 결과에서 보듯이, 난소절제로 생성된 유리기는 물질 투여로 인한 항산화 효소의 증가를 가져오고 이는 결국 유리기로 손상된 막의 지질과산화 정도를 완화시켜 세포를 보호하는 효과를 가져왔다고 할 수 있다. 따라서 CS는 여러 가지 측면에서 난소절제로 인해 유도된 지질과산화 및 활성산소에 의한 공격으로부터 세포를 보호하고 회복시켜주는 효과가 있다고 사료되어진다.
The ovarian hormone-deficiency induced ovariectomy rat is widely used as an aging model due to its practicality, convenience, and cost effectiveness. The surgically ovariectomized rat induces reactive oxygen species (ROS) generation like aging phenomena. Free oxygen radicals have been proposed as im...
The ovarian hormone-deficiency induced ovariectomy rat is widely used as an aging model due to its practicality, convenience, and cost effectiveness. The surgically ovariectomized rat induces reactive oxygen species (ROS) generation like aging phenomena. Free oxygen radicals have been proposed as important causative agents of aging. The purpose of this study was to investigate the effect of chondroitin sulfate (CS) to prevent ovariectomy (OVX)-induced oxidative stress. The OVX rats were given intraperitoneally CS at doses of 100 mg/kg and 200 mg/kg daily for fifteen weeks. Malondialdehyde (MDA) levels were determined as well as the activities of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), reduced-glutathione (GSH), oxidized-glutathione (GSSG), glutathione peroxidase (GPx) in the liver. The liver antioxidative enzyme activity was elevated while MDA concentration decreased in all CS treated animals. The results demonstrated that CS reduced oxidative stress in a dose dependent manner. These results suggest that CS might be a useful candidate for antioxidative reagent.
The ovarian hormone-deficiency induced ovariectomy rat is widely used as an aging model due to its practicality, convenience, and cost effectiveness. The surgically ovariectomized rat induces reactive oxygen species (ROS) generation like aging phenomena. Free oxygen radicals have been proposed as important causative agents of aging. The purpose of this study was to investigate the effect of chondroitin sulfate (CS) to prevent ovariectomy (OVX)-induced oxidative stress. The OVX rats were given intraperitoneally CS at doses of 100 mg/kg and 200 mg/kg daily for fifteen weeks. Malondialdehyde (MDA) levels were determined as well as the activities of superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), reduced-glutathione (GSH), oxidized-glutathione (GSSG), glutathione peroxidase (GPx) in the liver. The liver antioxidative enzyme activity was elevated while MDA concentration decreased in all CS treated animals. The results demonstrated that CS reduced oxidative stress in a dose dependent manner. These results suggest that CS might be a useful candidate for antioxidative reagent.
9% saline, CS를 용량별로 투여하였다. 난소 절제 후 물질 투여군은 매일 쥐무게 kg당 100 mg과 200 mg의 CS를 D.D.W.에 용해시켜 난소 절제 이틀 후부터 복강 내로 주입하였다. 15주째에 모든 쥐를 에테르마취 후해부하여 혈액과 간을 채취하였다.
횐쥐를 동물 모델로 하여 알아보았다. 난소를 절제한 쥐와 난소를 절제하지 않은 정상 쥐에서의 생리활성 및 항산화 효과를 알아보기 위하여 CS를 사용하였다. 난소를 절제한 횐쥐에 각각 CS를 각 100 ㎎/㎏과 200 ㎎/㎏을 투여하고, 이것과 비교하기 위해 난소를 절제한 대조군과 난소를 절제하지 않은 정상군으로 하여 항산화 효과에 관한 실험 방법으로 진행하였다.
난소를 절제한 쥐와 난소를 절제하지 않은 정상 쥐에서의 생리활성 및 항산화 효과를 알아보기 위하여 CS를 사용하였다. 난소를 절제한 횐쥐에 각각 CS를 각 100 ㎎/㎏과 200 ㎎/㎏을 투여하고, 이것과 비교하기 위해 난소를 절제한 대조군과 난소를 절제하지 않은 정상군으로 하여 항산화 효과에 관한 실험 방법으로 진행하였다. 노화유도된 쥐의 각 조직에서 지질 과산화가 증가되었고 유리기 반응이 더 심하게 일어난 간 조직에서 노화 진행이 그만큼 촉진되었음을 알 수 있었다.
적응시킨 후 다음과 같이 나누었다. 동물의 체중에 따라 각각 7마리씩 4군으로 나누어 난소 절제를 하지 않은 군 (Sham)은 0.9% saline을 투여하였고, 3개의 OVX군은 각각 0.9% saline, CS를 용량별로 투여하였다. 난소 절제 후 물질 투여군은 매일 쥐무게 kg당 100 mg과 200 mg의 CS를 D.
대상 데이터
2 mM cytochrome C 150 μ1 를 넣고 sample 5 μ1를 섞은 후, xanthine oxidase 원액을 10 μ1를 넣고, 550 nM에서의 흡광도 감소를 2분 동안 측정하였다. Sample의 효소 활성도를 알아보기 위한 표준물질로서는 superoxide dismutase (Sigma) 를 사용하였다.
실험동물은 체중 160±10 g의 female rat를 구입하여 본 실험실에서 1 주일간 고형사료와 물을 자유급식시켜 실험실에서 적응시킨 후 다음과 같이 나누었다. 동물의 체중에 따라 각각 7마리씩 4군으로 나누어 난소 절제를 하지 않은 군 (Sham)은 0.
데이터처리
본 실험에 대한 모든 실험 결과는 평균치와 표준편차로 나타내었고, 통계적 유의성은 Student's t-test에 의해 검정하였다.
이론/모형
CAT 활성 측정은 Aebi에 의해 고안된 방법[1]을 이용해 다음과 같이 실시하였다. Phosphate Buffer 1.
SOD활성 측정은 Beauchamp와 Fridovich의 방법[4]에 따라 실시하였다. 0.
간 조직 중 GPx의 활성도는 Lawrence[18]등의 방법으로 다음과 같이 실시하였다. 0.
단백질의 정량은 Lowry[19]의 방법에 의하여 측정하였고, bovine serum albumin (BSA)을 표준으로 하여 단백질 함량을 계산하였다.
성능/효과
간세포 손상 시막 투과성이 항진되어 혈중으로 유출되어 나오는 AST와 ALT 수치가 시간이 경과됨에 따라 증가된 것으로 보아 노화로 인 한 간 조직의 손상으로 인한 결과로 볼 수 있다. AST의 급격한 상승에 비해 ALT는 정상 수치를 크게 벗어나 지 않았고, 각시료투여군은 높아진 AST 활성치가 현저히 낮아진 것으로 보아난소 절제로 인한 세포막 손상이 CS 투여로 인해 회복된 것으로 사료된다.
Table 4에서 보면 간 조직 중의 OVX 군은 total glutathione 량이 Sham 군에 비해서 약 20% 정도 낮게 나타났다. OVX+ CS100과 OVX+CS200 군에서 total glutathione량은 OVX 군에 비해서 각각 9%, 20% 증가시키는 것으로 관찰 되었다. CS 투여군은 total glutathione 량에서도 볼 수 있듯이 결과적으로, 난소 절제로 인한 쥐의 간 조직에서 GSH의 역할을 대신하였기 때문에 GSSG의 양적인 변화를 보이지 않는 것으로 생각된다.
1 배 증가하였다. OVX+CS100과 OVX+CS200 군은 OVX에따른 증가를 각각 47%와 73% 억제하였다. 간세포 손상 시막 투과성이 항진되어 혈중으로 유출되어 나오는 AST와 ALT 수치가 시간이 경과됨에 따라 증가된 것으로 보아 노화로 인 한 간 조직의 손상으로 인한 결과로 볼 수 있다.
1배 높게 나타났으며, ALT 활성은 크게 변화하지 않았다. 과산화지질 함량은 OVX 군이 Sham 군에 비해 1.4배 높게 나타났으며, CS를 투여한 군에서는 31%-38%의 저해율을 보였다. 항산화 효소들은 Sham 군에 비해 OVX 군에서 낮게 나타났으며, 물질 투여군에서는 정도의 차이는 있지만 대체로 증가하는 경향을 보였다.
난소를 절제한 횐쥐에 각각 CS를 각 100 ㎎/㎏과 200 ㎎/㎏을 투여하고, 이것과 비교하기 위해 난소를 절제한 대조군과 난소를 절제하지 않은 정상군으로 하여 항산화 효과에 관한 실험 방법으로 진행하였다. 노화유도된 쥐의 각 조직에서 지질 과산화가 증가되었고 유리기 반응이 더 심하게 일어난 간 조직에서 노화 진행이 그만큼 촉진되었음을 알 수 있었다. 산소라디칼 반응이 항진된 원인을 규명 코자 간 조직에서 항산화 효소의 활성을 조사한 결과, SOD와 GSH의활성이 감소되었으며, 노화나 지질과 산화가 심하게 진행되었던 간 조직에서 이들 항산화 효소의 활성 감소가 심한 경향을 나타내었다.
노화유도된 쥐의 각 조직에서 지질 과산화가 증가되었고 유리기 반응이 더 심하게 일어난 간 조직에서 노화 진행이 그만큼 촉진되었음을 알 수 있었다. 산소라디칼 반응이 항진된 원인을 규명 코자 간 조직에서 항산화 효소의 활성을 조사한 결과, SOD와 GSH의활성이 감소되었으며, 노화나 지질과 산화가 심하게 진행되었던 간 조직에서 이들 항산화 효소의 활성 감소가 심한 경향을 나타내었다. AST의 활성은 OVX 군이 Sham 군에 비해 2.
항산화 효소들은 Sham 군에 비해 OVX 군에서 낮게 나타났으며, 물질 투여군에서는 정도의 차이는 있지만 대체로 증가하는 경향을 보였다. 이러한 결과에서 보듯이, 난소 절제로 생성된 유리기는 물질 투여로 인한 항산화 효소의 증가를 가져오고 이는 결국 유리기로 손상된 막의 지질과산화 정도를 완화시켜 세포를 보호하는 효과를 가져왔다고 할 수 있다. 따라서 CS는 여러 가지 측면에서 난소절제로 인해 유도된 지질과 산화 및 활성산소에 의한 공격으로부터 세포를 보호하고 회복시켜주는 효과가 있다고 사료되어진다.
그리고, Table 3에서 보면 OVX 군에서의 CAT 활성치는 Sham 군과 비교했을 때 31% 감소를 보였다. 즉, OVX 군에서의 CAT활성은 Sham 군 보다 낮아졌음을 알 수 있다 ' 반면, OVX+CS100 과 OVX+CS200 군의 경우 CAT활성이 OVX에 따른 감소를 각각 19%, 23% 증가시킴을 관찰할 수 있었다. 이는 물질 투여군에서 지질과 산화도가 감소하여 막 손상 정도가 완화된 것이 역시 물질 투여로 인한 이들 효소 활성의 증가가 ROS로부터의 공격을 완충해주는 역할을 한 결과라 생각된다.
인위적인 난소 절제로 노화가 유도된 쥐에서 산소유리기에 의한 간 조직 손상에 의해서 과산화지질 함량이 높게 나타났으며, 이는 난소가 절제된 쥐의 간 조직이 산소유리기의 공격을 더 많이 받았으며 이로 인해서 과산화지질이 많이 축적되어진 결과로 보여진다. 한편, 유리기에 의해 손상받은 간 조직 세포막을 어느 정도 회복시켜 지질 과산화의 축적을 지연시킨 결과로 MDA 함량이 유의한 수준으로 억제됨을 관찰할 수 있었다.
4배 높게 나타났으며, CS를 투여한 군에서는 31%-38%의 저해율을 보였다. 항산화 효소들은 Sham 군에 비해 OVX 군에서 낮게 나타났으며, 물질 투여군에서는 정도의 차이는 있지만 대체로 증가하는 경향을 보였다. 이러한 결과에서 보듯이, 난소 절제로 생성된 유리기는 물질 투여로 인한 항산화 효소의 증가를 가져오고 이는 결국 유리기로 손상된 막의 지질과산화 정도를 완화시켜 세포를 보호하는 효과를 가져왔다고 할 수 있다.
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