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문제 정의
- 그러나 아직까지 이러한 염생 식물에 대한 생리활성이나 화학성분 연구가 거의 없다. 따라서 본 연구에서는 20종의 염생식물을 대상으로 peroxynitrite 와 DPPH radical의 소거 활성을 측정하여 항산화 효과를 검색하였다.
- 본 연구에서는 항산화 활성을 갖는 유용한 선도 물질을 찾 기 위한 일환으로 20종의 염생식물의 추출물에 대해 peroxynitritee DPPH 라디칼 소거 활성을 측정하였다. 그 결과 해당화 (Rosa rugosa), 개망초 (Erigeron annus), 냇씀바귀 (Ixeris tamagawaensis), 띠 (Imperata cylindricd), 범행초 (Tetragonia tetragonoides), 사-철쑥 (Artemisia capillaris)^] MeOH 추출물에서 우수한 DPPH 라디칼 소거 효과가 확인되었다.
제안 방법
- ONOCX소거 활성은 dihydrorhodamine 123 (DHR123)의 산화되는 정도를 측정함으로써 검색하였다. DHR 123 (5 mM)은 dimethylformamide로 녹여서 stock 용액은 질소로 purge 하여 -80℃에 보관하고, DHR123 (f.
- 얻은 각각의 CH2C12 추출 여액과 MeOH 추출 여액을 40℃ 수욕 상에서 진공 회전 농축기 (Eyela, Japan)로 농축한 후 건조하여 냉장 보관하면서 시료로 사용하였다. 그리고 DPPH 자유 라디칼의 활 성 실험은 시료를 100% ethanol에 용해시켜 사용하였고, peroxynitrite 소거 활성 실험은 10% ethanol에 녹여 사용하였다.
- Excitation 파장은 485 nm, emission 파장은 530 nm로 하였으며 실온에서 측정하였다. 그리고 ONOCT (f.c. 10 “M)의 바탕용액은 0.3 N NaOH를 사용하였고, 실험은 triplicate로 행하였으며, 평균한 값으로 소거율을 계산하였다.
- 이 buffer 용액에 DHR123 용액을 혼합한 뒤 시료와 peroxynitrite를 첨가하고 실온에서 5분간 방치하였다. 그리고는 multi-detection microplate fluorescene spectrophotometer Synergy HT (Bio-Tek instruments, USA) 로 측정하였다. Authentic peroxynitrite 대신에 SIN-1 을 첨가할 경우는 실온에서 1시간 동안 방치한 후 측정하였다, SIN」에 의한 DHR123의 산화는 점진적으로 일어나는 반면에 authentic peroxynitrite 는 아주 급속히 산화를 시키기 때문이다.
- 또한, nitric oxide (NO)와 superoxide anion (Q)을 동시에 생성시키는 것으로 알려져 있는 SIN-1 을 첨가하여 염생 식 물의 peroxynitrite에 대한 소거 활성을 측정하였다(Table 3). Table 2의 결과와 비교했을 때 전반적으로 소거 활성이 더 뛰어난 것을 알 수 있었다.
- 본 실험에서 사용한 20종의 염생식물은 경기도 대부도, 경상북도 포항, 경상남도 거제도에서 2002년 8~9월에 채집하였다. 모든 원료는 그늘에서 저온 (37℃) 건조하였고, 추출에 적합하도록 세절한 후 추출 관에 넣고 CH2CI2와 MeOH로 연 차적으로 각각 추출하였다. 각각의 시료 50 g에 CH2CI2 (시 약용 1급)을 가하여 침지하였다.
- 100 座/ml) 50 以와 제조한 DPPH용액 을 혼합하여 10분간 상온에서 반응시킨 후 518 nm에서 흡광도를 측정한다. 시료를 첨가하지 않은 대조군과 비교하여 유리 라디칼 소거 활성을 백분율로 나타내었으며, 대조군의 UV-Vis 흡광도는 0.94~0.97이 되도록 조정하였다. 그리고 3회 반복 실험하여 얻은 결과를 평균한 값으로 나타내었다.
대상 데이터
- Authentic peroxynitrite 대신에 SIN-1 을 첨가할 경우는 실온에서 1시간 동안 방치한 후 측정하였다, SIN」에 의한 DHR123의 산화는 점진적으로 일어나는 반면에 authentic peroxynitrite 는 아주 급속히 산화를 시키기 때문이다. Excitation 파장은 485 nm, emission 파장은 530 nm로 하였으며 실온에서 측정하였다. 그리고 ONOCT (f.
- Penicillamine (DL-2-amino-3-mercapto-3-methylbutanoic acid) 과 dihydrorhodamine 123 (DHR 123), DPPH (l, l-diphenyl-2- picrylhydrazyl radical) 는 Sigma사 (St Louis, MO, USA)에서 구 입하였다. 그리고 authentic ONOCT는 Cayman (Ann Arbor, MI, USA)에서 구입하였다.
- 그리고 authentic ONOCT는 Cayman (Ann Arbor, MI, USA)에서 구입하였다. 그 외 다른 모든 시약은 Sigma사 (St Louis, MO, USA)나 Junsei사 (Tokyo, Japan)의 일급 또는 특급 시약을 사용하였다.
- 본 실험에서 사용한 20종의 염생식물은 경기도 대부도, 경상북도 포항, 경상남도 거제도에서 2002년 8~9월에 채집하였다. 모든 원료는 그늘에서 저온 (37℃) 건조하였고, 추출에 적합하도록 세절한 후 추출 관에 넣고 CH2CI2와 MeOH로 연 차적으로 각각 추출하였다.
데이터처리
- 97이 되도록 조정하였다. 그리고 3회 반복 실험하여 얻은 결과를 평균한 값으로 나타내었다.
성능/효과
- 20종 염생식물의 유기용매 추출물에 대해 peroxynitrite의 소거활성을 측정하기 위해 시판되고 있는 peroxynitrite의 표 준품을 첨가한 결과 6종의 식물이 peroxynitrite 소거 활성이 뛰어난 것을 확인하였다(Table 2). 해당화 (Rosa rugosd), 개 망초 (Erigeron annus), 칠면초 (Suaeda japonica), 냇씀바귀 (Ixeris tamagawaensis), 띠 (Imperata cylindrica), 범행초 (Tetragonia tetragonoides)^] MeOH 추출물과 CH2CI2 추출물 에서 각각 peroxynitrite의 소거효과가 관찰되었다.
- DPPH 라디칼에 대한 전자공여능을 측정한 결과 해당화 (Rosa rugosa), 사철쑥 (Artemisia capillaris), 개망초 (Erigeron annus), 냇씀바귀 (Ixeris tamagawaensis), 범행초 (Tetragonia tetragcmoides)의 MeOH 추출물이 100 〃g/ml (f.c.) 농도에서 각각 87.51%, 88.67%, 78.49%, 69.99%, 58.66%의 소거율을 나타내었다(Table 1). 그러나 CH2CI2 추출물은 100 陽/ml (f.
- 23%로서 비교적 우수한 것으로 나타났다. 개망초는 DPPH 래디칼 소 거 활성과 마찬가지로 CH2C12 추출물에서는 거의 효과가 관 찰되지 않은데 비해 MeOH 추출물에서 강력한 peroxynitrite 효과가 있음을 알 수 있었다.
- 본 연구에서는 항산화 활성을 갖는 유용한 선도 물질을 찾 기 위한 일환으로 20종의 염생식물의 추출물에 대해 peroxynitritee DPPH 라디칼 소거 활성을 측정하였다. 그 결과 해당화 (Rosa rugosa), 개망초 (Erigeron annus), 냇씀바귀 (Ixeris tamagawaensis), 띠 (Imperata cylindricd), 범행초 (Tetragonia tetragonoides), 사-철쑥 (Artemisia capillaris)^] MeOH 추출물에서 우수한 DPPH 라디칼 소거 효과가 확인되었다. 또한, 해당화(曲% rugosa), 개망초 (Erigeron annus), 칠면초 (Suaeda japonica), 냇씀바귀 (Ixeris tamagawaensis), 띠 (Jmperm cylindrica), 갯방풍 (Gl아mia littoralis), 함초 (Salicornia herbaced), 해국 spathulifolius'), 범행초 (Tetragonia tetragonoides)^] MeOH 추출물과 CH2CI? 추출물 에서 각각 peroxynitrite의 소거효과가 관찰되었다.
- 해당화 (Rosa rugosd), 개 망초 (Erigeron annus), 칠면초 (Suaeda japonica), 냇씀바귀 (Ixeris tamagawaensis), 띠 (Imperata cylindrica), 범행초 (Tetragonia tetragonoides)^] MeOH 추출물과 CH2CI2 추출물 에서 각각 peroxynitrite의 소거효과가 관찰되었다. 그 중에서 해당화가 가장 우수한 것으로 나타났는데, MeOH 추출물에서97.03%, CH2CI2 추출물에서 57.95%의 peroxynitritee 소거 효과가 있었다. 이것은 대조군으로 사용된 penicillamine보다 뛰어난 효과였으며, L-ascorbic acid와 거의 대등한 효과였다.
- 따라서 범행초는 CH2C12 추출물과 MeOH 추출물의 peroxynitrite의 소거 활성이 비슷한 것으로 나타났다. 그리고 칠면초는 DPPH 래디칼에 대한 전자 공여능은 거의 없었지 만, peroxynitrite 소거 활성은 MeOH 추출물에서 73.23%로서 비교적 우수한 것으로 나타났다. 개망초는 DPPH 래디칼 소 거 활성과 마찬가지로 CH2C12 추출물에서는 거의 효과가 관 찰되지 않은데 비해 MeOH 추출물에서 강력한 peroxynitrite 효과가 있음을 알 수 있었다.
- 51 %)의 효과와 비슷한 정도였다. 그리고 함초나 해국 그리고 갯방풍은 authenic ONOO보다는 SIN-1에 대해 선택적인 효과가 있는 것을 확인할 수 있었다. SIN-1에 대한 peroxynitrite 소거 효 과는 2가지의 메카니즘을 추측할 수 있다.
- 그중에서도 해당화 MeOH 추출물의 DPPH 래디칼 소거효과는 100 四 ml (f.c.) 농도에서 87.51%로 나타났고, peroxynitrite 소거효과는 5 阐ml 농도에서 표 품의 ONOCT를 첨가했을 때 97.03%와 SIN-1 을 첨가했을 때 9848%로서 가장 강력한 항산화 활성을 가지는 것으로 나타났다. 해당화의 peroxynitrite의 효과는 대조군으로 사용된 penicillamine보다도 우수하며, L-ascorbic acid와 비슷한 효과였다.
- 47%의 소거효과가 나타남으로써 실험한 염생 식물 중에서 ch2ci2 추출물의 효과가 가장 우수하였다. 따라서 범행초는 CH2C12 추출물과 MeOH 추출물의 peroxynitrite의 소거 활성이 비슷한 것으로 나타났다. 그리고 칠면초는 DPPH 래디칼에 대한 전자 공여능은 거의 없었지 만, peroxynitrite 소거 활성은 MeOH 추출물에서 73.
- 67%)의 시료를 제외하고는 거의 효과가 없는 것으로 나타났다. 따라서 염생 식물에 의한 DPPH 라디칼의 소거 효과가 비교적 극성이 큰 화합물이 많이 포함되어 있는 MeOH 추출물에 의한 것임을 알 수 있었다. 또한 DPPH 구조에 전자를 하나 공여하고서도 비편재화 된 안정한 구조를 유지할 수 있는 phenol성 구조의 화합물들 에 의해 라디칼 소거가 일어날 것이라 생각된다.
- 80%의 peroxynitrite 소거 활성이 있었다. 또한 범행초의 MeOH 추출물은 74.87%, CH2C12 추출물은 70.47%의 소거효과가 나타남으로써 실험한 염생 식물 중에서 ch2ci2 추출물의 효과가 가장 우수하였다. 따라서 범행초는 CH2C12 추출물과 MeOH 추출물의 peroxynitrite의 소거 활성이 비슷한 것으로 나타났다.
- 그리고 냇씀바귀와 띠의 경우도 해당화와 비슷한 양상을 보였다. 즉, 냇씀바귀는 MeOH 추출물 87.28%, CH2C12 추출물은 47.16%였고, 띠의 MeOH 추출물은 75.67%, CH2C12 추출물은 59.80%의 peroxynitrite 소거 활성이 있었다. 또한 범행초의 MeOH 추출물은 74.
- 또한 DPPH 구조에 전자를 하나 공여하고서도 비편재화 된 안정한 구조를 유지할 수 있는 phenol성 구조의 화합물들 에 의해 라디칼 소거가 일어날 것이라 생각된다. 해당화 (87.51%)와 개망초 (78.49%)의 MeOH 추출물은 대조군으로 사용한 L-ascorbic acid (96.33%)나 a -tocopherol (92.13%)보다 는 약했지만 강력한 DPPH 소거 효과를 나타내었다. 그러나 CH2C12 추출물에서는 각각 7.
- 20종 염생식물의 유기용매 추출물에 대해 peroxynitrite의 소거활성을 측정하기 위해 시판되고 있는 peroxynitrite의 표 준품을 첨가한 결과 6종의 식물이 peroxynitrite 소거 활성이 뛰어난 것을 확인하였다(Table 2). 해당화 (Rosa rugosd), 개 망초 (Erigeron annus), 칠면초 (Suaeda japonica), 냇씀바귀 (Ixeris tamagawaensis), 띠 (Imperata cylindrica), 범행초 (Tetragonia tetragonoides)^] MeOH 추출물과 CH2CI2 추출물 에서 각각 peroxynitrite의 소거효과가 관찰되었다. 그 중에서 해당화가 가장 우수한 것으로 나타났는데, MeOH 추출물에서97.
- 03%와 SIN-1 을 첨가했을 때 9848%로서 가장 강력한 항산화 활성을 가지는 것으로 나타났다. 해당화의 peroxynitrite의 효과는 대조군으로 사용된 penicillamine보다도 우수하며, L-ascorbic acid와 비슷한 효과였다.
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