선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구는 천연물로부터 자극완화 효과가 우수한 향나무추출물을 스크리닝 후 몇백년씩 장수하는 향나무 특유의 성분 및 photoprotection 효과를 활용하여 다양한 생리활성 효과와 화장품 응용에 대해 실험하였다.
제안 방법
- Mexameter MX16 (C+K, Germany)는 reflectance pho- tometer로서 실험부위로부터 반사된 빛의 강도를 측정하여 홍반지수(erythema index, EI)의 값을 2회씩 측정하였다. 측정한 시간대별 홍반지수의 평균값을 구하고, 도포 전과 비교하여 홍반지수의 변화율을 계산하였다.
- SLS (0.5%) 인체첩포(human patch test)는 피검자의 양측 상완 내측에 0.5% SLS 용액(w/v in distilled water) 을 filter paper disc 에 적셔 직경 11 mm large Finn chamber on scanpor tape (Epitest, Helsinki, Finland) 에 24시간 부착하여 인위적으로 자극성 피부염을 유발하고 첩 포를 제거하였다. 첩포 제거 후 30분, 24시간, 72시간(3 일), 120시간(5일) 마다 실험부위의 피부반응 정도를 평가하였다 [17, 18].
- Well plate에 5xl04 cell/well로 섬유아세포를 분주하고 24시간 동안 안정화시킨 후 세포에 UVA를 4.2 J 조사하고 향나무추출물을 농도별로 처리한다. 시료 처리 후 24 시간 동안 37℃ CO2 배양기에서 배양한다.
- 각질형성세포(1X1O55 cells/mLX 자외선 조사기(UVB G15T8E, Sankyo Denki, Japan)로 10 mj/cm2 세기로 조사한 후 serum free DMEM 배지를 500 “L 첨가하고 향나무추출물 시료를 농도별로 첨가하였다. 24시간 동안 배양 후 배양상등액을 weU plate에 4℃에서 코팅한다.
- 경피수분손실량 측정은 실내온도 20-22℃, 상대습도 40-60% 항온항습 조건에서 Tewameter 210 (C+K, Germany)를 이용하여 측정하였다. 도포 전 및 대조군과 비교하여 경피 수분손실량을 측정하여 피부장벽기능 회복 정도를 비교하였다.
- 대조 부위와 각 실험물질 도포 부위를 도포 전, 도포 1일 후, 도포 3일 후, 도포 5일 후에 각각 측정하였으며, 도포 전과 비교하여 a*값 변화를 비교하였다.
- 이용하여 측정하였다. 도포 전 및 대조군과 비교하여 경피 수분손실량을 측정하여 피부장벽기능 회복 정도를 비교하였다.
- 또한, 향나무 추출물이 UVA 조사에 의해 유도된 MMP- 2 (gelatinase)의 발현 억제 효과를 평가하기 위해 zymo- graphy를 실시하였다. 실험 결과 향나무추출물은 농도 의존적으로 뚜렷한 활성 변화가 관찰되어 MMP-2 활성 저해 효과가 우수함을 확인할 수 있었다(Figure 6).
- 색차겨】 (SPECTROPHOTOMETER CM 2002, Minolta, Japan)를 이용하여 홍반 정도를 의미하는 a*값을 측정하였다. 대조 부위와 각 실험물질 도포 부위를 도포 전, 도포 1일 후, 도포 3일 후, 도포 5일 후에 각각 측정하였으며, 도포 전과 비교하여 a*값 변화를 비교하였다.
- 3% BSA로 37℃ 2시간 동안 blocking하고 primary antibody (anti-human IL-6) in PBST를 첨가하여 37t 90분 동안 반응시킨다. 세척 후 secondary antibody (Goat antirabbit IgG conjugated with peroxidase)를 첨가하고 90분 동안 37℃ 반응시킨 후 o-phenylene diamine0] 함유된 기질 용액을 첨가하여 발색시켜 490 nm에서 흡광도를 측정하였다 [16].
- DQ gelatin 기질에는 형광이 표식되어 있으며 효소에 의해 기질이 분해되면 형광이 노출되기 때문에 coJagenase 효소활성이 증가할수록 형광값이 증가한다. 시간 경과에 따른 형광값 변화를 형광 spectrophotometer (PERKIN ELMER, USA)를 이용하여 형광값을 측정하였다.
- 시험물질 함유 에멀젼은 SLS 첩포를 제거하고 30분 경과 후 피부상태를 측정한 뒤 시험물질을 각 부위에 도포하였다. 시험물질은 공시료와 향나무추출물을 함유한 O/W 에멀젼을 각 실험부위에 5일간 1일 2회씩 도포하였다.
- 시험물질은 공시료와 향나무추출물을 함유한 O/W 에멀젼을 각 실험부위에 5일간 1일 2회씩 도포하였다. 실험 부위의 측정은 물질을 도포하기 전인 오전에 측정하였다.
- 인산완충액을 500μL첨가한 다음 자외선(UVB)을 10 mJ로 조사 후 신선한 세포배양 배지로 교체해준다. 실험원료를 농도별로 처리하여 자외선 조사 후 시료를 처리하지 않은 대조군과 세포생존률을 비교하였다.
- 활성산소와 지질이 반응하면 과산화 지질이 생성되어 혈관벽이나 세포막의 구조가 파괴되어 조직이 손상된다. 이런 산화반응에서 활성산소에 의해 피부 노화가 가속화되며, 활성산소의 프리라디칼에 대한 피부보호 효과를 측정하기 위해 프리라디칼인 DPPH에 대한 라디칼 소거 효과와 xanthine oxidase가 xanthine과 반응하여 uric acid로 전환되고 이때 생성되는 O2(superoxide rad- ical)를 소거하는 효과를 평가하였다[19, 20].
- 관심과 필요성이 증가하고 있다. 이에 향나무추출물의 외부 자극원에 대한 피부세포 보호효과를 in uitm와 in vivo 사람피부에서 실험을 실시하였다. 프리라디칼 및 superoxide 소거 효과도 우수하게 나타났으며, 피부세포 (섬유아세포, 각질형성세포)에서 자외선에 대한 향나무추출물의 세포보호작용 실험을 실시한 결과 자외선에 의한 세포독성 완화와 MMP 생성 저해 효과가 매우 우수하게 나타났다.
- 배양된 각질 형성 세포에서 배양배지를 제거하고 인산완충 액 (phosphated buffered saline, PBS)으로 세척한다. 인산완충액을 500μL첨가한 다음 자외선(UVB)을 10 mJ로 조사 후 신선한 세포배양 배지로 교체해준다. 실험원료를 농도별로 처리하여 자외선 조사 후 시료를 처리하지 않은 대조군과 세포생존률을 비교하였다.
- 자외선에 대한 피부보호 작용을 평가하기 위해 세포독성 완화 효과 실험을 실시하였다[211 자외선(UVB)을 10 mJ로 조사 후 시료를 농도별로 처리하여 자외선 조사 후 시료를 처리하지 않은 대조군과 세포생존률을 비교하였다. 향나무추출물을 농도별로 처리 후 각질형성세포를 24 시간 배양하여 세포생존률 측정 결과 시료를 처리하지 않은 대조군보다 35% 정도의 세포 생존률을 증가시켜 매우 우수한 세포 독성 완화 효과를 나타내었다(Figure 4).
- 5% SLS 용액(w/v in distilled water) 을 filter paper disc 에 적셔 직경 11 mm large Finn chamber on scanpor tape (Epitest, Helsinki, Finland) 에 24시간 부착하여 인위적으로 자극성 피부염을 유발하고 첩 포를 제거하였다. 첩포 제거 후 30분, 24시간, 72시간(3 일), 120시간(5일) 마다 실험부위의 피부반응 정도를 평가하였다 [17, 18].
- 측정한 시간대별 홍반지수의 평균값을 구하고, 도포 전과 비교하여 홍반지수의 변화율을 계산하였다.
대상 데이터
- 각질형성세포(HaCaT)는 American Type Culture Collec- tion으로부터 구입하였고, 10% fetal bovine serum (FBS) 이 첨가된 DMEM, 37℃, 5% CCh incubator에서 배양하였다. 신생아의 포피조직에서 분리한 human dermal fibroblast (HDF)는 Modem Tissue Technology (MTT, Korea)로부터 구입하였다.
- 신생아의 포피조직에서 분리한 human dermal fibroblast (HDF)는 Modem Tissue Technology (MTT, Korea)로부터 구입하였다. 구입한 HDF를 DMEM/F12 (3 :1) 배지에 10% FBS (fetal bovine serum), 1% peni- cillin-streptomycin을 첨가하여 37℃, 5% CO 조건 하에 배양하고 trypsinization으로 계대 배양한 뒤 6~10세대 세포를 실험에 이용하였다.
- PGEz 정 량은 Cayman chemical (Ann Arbor, MI, USA)의 enzyme immunoassay kit를 사용하였다. 사람 피부에서 의 자극유발실험에서는 11 mm large Finn chamber on scanizor tape (Epitest Helsinki, Finland) 을 사용하였으며, sodium lauryl sulfate는 Sigma chemical Co. (St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다.
- 신생아의 포피조직에서 분리한 human dermal fibroblast (HDF)는 Modem Tissue Technology (MTT, Korea)로부터 구입하였다. 구입한 HDF를 DMEM/F12 (3 :1) 배지에 10% FBS (fetal bovine serum), 1% peni- cillin-streptomycin을 첨가하여 37℃, 5% CO 조건 하에 배양하고 trypsinization으로 계대 배양한 뒤 6~10세대 세포를 실험에 이용하였다.
- 연구대상은 과거에 알레르기성 질환이나 아토피 피부염 등 질환의 병력이 없는 건강한 성인 남녀 10명을 대상으로 하였다. 검사 전 최소 일주일 동안 경구 부신피질호르몬제나 항히스타민제, 항염제를 복용하지 않았으며, 검사부위에 국소 부신피질 호르몬제를 바르지 않았다.
- 1 세였다. 연구에 사용된 자극완화 원료는 기존의 in vitro 실험에서 항염효과가 우수하게 나타난 원료를 중심으로 하였으며, 향나무추출물을 함유한 O/W 에멀젼을 제조하여 피부에 도포하였다.
- 향나무는 서울경동시장 약재 구입상가에서 구입하였으며, 건조 및 세절하여 시료로 사용하였다. BHT (buty- lated hydroxytoluene), Anti-MMP~1 antibody (Ab-5), Anti-Human Interleukin-6, anti-rabbit IgG conjugated with horse radish peroxidase (HRP) and anti-mouse IgG conjugated with alkaline phosphatase (AP)는 Sigma chemical Co.
이론/모형
- Hyaluronic acid가 hyaluronidase에 의해 분해되어 생성되는 N-acetyiglucosamine을 Morgan-Elson assay를 이용하여 정량하였다[15].
- Xanthine, xanthine oxidase 반응에서 형성된 superoxide radical를 소거하는 효과를 SOD Test Wako 방법에 의해 측정하였다[13. 0.
- 있다. [22, 23], 향나무추출물의 UVA 조사에 의해 유도된 MMP 의 발현 억제 효과를 평가하기 위하여 효소면역분석법으로 배양 배지에서의 MMP-1 (collagenase)을 정량하였다. 시료를 처리하지 않은 대조군과 비교하여 향나무추출물의 MMP-1 발현 저해 효과는 50 pg/mL 농도에서 98% 의 저해 효과를 나타내었다(Figure 5).
- 이 각질형성세포에 자외선 B를 10 mj/cn?를 조사한 후, 각질형성세포 배양액 500 μL를 첨가하고 실험원료를 각 실험농도로 처리한 후 배양하였다. 배양상층액에서 프로스타글란딘 E2 (PGE2) 량을 효소면 역 분석 법 을 이 용하여 정량 하였다(enzyme immunoassay kit, Cayman chemical, Ann Arbor, MI, USA) [8].
성능/효과
- Ⅱ.-6 의 생성 억제 효과도 나타났으며, PGE2 생성 저해 효과도 우수하게 나타났다.
- Mexameter는 피부에 침착된 피부 홍반의 정도를 수치로 표시하여 측정하는 기기로 SLS에 의해 홍반을 유발시킨 후 실험물질의 자극완화 효과를 측정한 결과 향나무추출물을 함유한 에멀젼 도포 실험에서 도포 5일 후 우수한 홍반량 감소 효과가 나타났다(FigUTO 10).
- SLS (0, 5%}첩포로 유발된 자극성 피부염의 항염증 효과 평가 시 SLS에 의해 유발되는 자극정도가 피검자의 피부 상태에 따라 다양하게 나타났으며, 자극완화 물질 도포에 따른 피부 회복력에도 차이가 있었다. 향나무추출물함유 제품에서 비교적 우수한 자극완화 효과를 나타내었으나, 공시료(Placebo)의 경우는 별다른 효과가 나타나지 않았다.
- 되면 생성이 촉진된다[25, 26]. 각질형성세포에서 5$ 조사 실험을 실시한 결과, 조사량에 따라 PGE2 량이 유의하게 증가하였으며, UVB 10 mJ에서 60 ng/mL 정도의 PGE2가 생성되었다. 자외선 조사 후 향나무추출물을 처리하면 농도 의존적으로 PGE2 생성량이 줄어들었으며, 25μg/mL 농도에서 약 50%의 생성 저해 효과가 나타나 전체적으로 항염 및 자외선에 대한 피부 보호 효과가 우수한 것으로 나타났다.
- 경피 수분 증발량(transepidermal water loss, TEWL) 은 향나무추출물을 함유한 에멀젼 제품 도포 시 향나무추출물 함유 제품 도포 3일 후와 도포 5일 후 공시료에비해 피부수분손실량이 줄어들어 우수한 피부 장벽 회복 효과가 있는 것으로 나타났다(Figure 12).
- 따라서 피부염증 억제 효과를 평가하기 위해 향나무추출물의 hyaluronidase 저해 활성을 측정한 결과 2 mg/mL 농도에서 81%의 효과를 나타내었다(Figure 7).
- 따라서, 향나무추출물은 자외선에 의해 유도되는 MMP- 1과 MMP-2의 발현을 농도 의존적으로 저해하는 것으로 나타나 자외선에 대한 피부세포 보호 효과가 우수한 것으로 나타났다.
- 또한, 사람피부에 0.5% SLS로 자극을 유발한 후 향나무추출물 함유 제품에서 피부 홍반 완화 효과와 피부 장벽 회복 효과가 우수하게 나타났다. 따라서 향나무추출물은 자외선 및 외부자극물질에 의해서 발생할 수 있는 피부손상에 대하여 효과적으로 보호할 수 있는 우수한 자극완화 소재로 적용될 수 있을 것으로 사료된다.
- 나타내었다(Figure 1). 또한, 향나무추출물은 100μg/mL 농도에서 98% 정도의 우수한 항산화 효과를 나타내었으며, 독성이 강한 라디칼인 O2 소거 효과도 BHT (butylated hydroxytoluene)보다 우수하게 나타났다(Figure 2).
- 색차계를 이용하여 홍반정도를 나타내는 a* 값을 측정한 결과 SLS에 의해 유발된 홍반유발 실험에서 lactic acid 의 경우 오히려 홍반지수가 높아지는 경향이 있었으며, 향나무추출물 함유제품 도포 시 공시료에 비해 홍반 지수가 감소한 것으로 나타났다(Figure 11).
- 실시하였다. 실험 결과 향나무추출물은 농도 의존적으로 뚜렷한 활성 변화가 관찰되어 MMP-2 활성 저해 효과가 우수함을 확인할 수 있었다(Figure 6).
- 각질형성세포에서 5$ 조사 실험을 실시한 결과, 조사량에 따라 PGE2 량이 유의하게 증가하였으며, UVB 10 mJ에서 60 ng/mL 정도의 PGE2가 생성되었다. 자외선 조사 후 향나무추출물을 처리하면 농도 의존적으로 PGE2 생성량이 줄어들었으며, 25μg/mL 농도에서 약 50%의 생성 저해 효과가 나타나 전체적으로 항염 및 자외선에 대한 피부 보호 효과가 우수한 것으로 나타났다. 따라서 향나무추출물은 염증성 사이토카인의 억제와 염증발생 경로 중 cyclooxygenase (COX)에 의한 경로에서 억제 효과가 있는 것으로 생각된다(Figure 9).
- 이에 향나무추출물의 외부 자극원에 대한 피부세포 보호효과를 in uitm와 in vivo 사람피부에서 실험을 실시하였다. 프리라디칼 및 superoxide 소거 효과도 우수하게 나타났으며, 피부세포 (섬유아세포, 각질형성세포)에서 자외선에 대한 향나무추출물의 세포보호작용 실험을 실시한 결과 자외선에 의한 세포독성 완화와 MMP 생성 저해 효과가 매우 우수하게 나타났다.
- 피부 이상 반응의 유발인자에는 화학물질, 세정제, 자외선 등 여러 가지가 있으며, 이에 대한 피부보호 작용을 평가하기 위해 자외선(UVB)에 의해 유도된 염증관련 사이토카인인 IL-6의 생성량을 측정한 결과, WB에 의해 유발된 염증관련 싸이토카인인 IL-6의 생성률은 향나무추출물에 의해 30% 정도 감소되는 것으로 나타났다(Figure 8).
- 향나무추출물을 농도별로 MMP 활성 저해 효과를 측정 결과 100μg/mL 이상의 농도에서 95% 이상 저해되었다(Figure 3).
- 향나무추출물을 농도별로 처리 후 각질형성세포를 24 시간 배양하여 세포생존률 측정 결과 시료를 처리하지 않은 대조군보다 35% 정도의 세포 생존률을 증가시켜 매우 우수한 세포 독성 완화 효과를 나타내었다(Figure 4).
- 향나무추출물함유 제품에서 비교적 우수한 자극완화 효과를 나타내었으나, 공시료(Placebo)의 경우는 별다른 효과가 나타나지 않았다.
후속연구
- 5% SLS로 자극을 유발한 후 향나무추출물 함유 제품에서 피부 홍반 완화 효과와 피부 장벽 회복 효과가 우수하게 나타났다. 따라서 향나무추출물은 자외선 및 외부자극물질에 의해서 발생할 수 있는 피부손상에 대하여 효과적으로 보호할 수 있는 우수한 자극완화 소재로 적용될 수 있을 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.