인삼(Panax ginseng C. A Meyer)의 뿌리는 전통적인 항-노화 및 항-주름제로 동양에서 사용되어 왔다. 그러나 인삼의 어떤 성분이 주름 형성을 억제하는데 효과적인지는 아직 밝혀지지 않았다. 최근 인삼의 주요 활성 성분으로 생각되는 ginsenosides가 20가지 이상 분리되었다. 이들 중 본 연구원들은 인삼에 의한 항-주름의 작용기작을 밝히기 위해 세포간질(extracellular matrix, ECM) 물질대사에 있어 ginsenoside Rg3의 진피에서의 효과를 시험하였다. 본 연구에서, ginsenoside Rg3의 항-주름 효과를 연구하기 위해 진피의 세포간질 구성 성분과 성장 인자를 ELISA (enzyme-1in14ed immunosorbent assay) 측정법으로 평가하였다. Ginsenoside Rg3은 human dermal fibroblasts 배양에서 type I procollagen과 fibronectin(FN) 생합성을 농도 증가에 비례하여 촉진시키고(p < 0.05, n=3), 농도에 비례하여 TGF-$\beta$1 수준을 증가 (p < 0.05, n=3) 시키는 것으로 밝혀졌다. RT-PCR 분석에서 AP-1전사 인자(transcription factor)의 일부인 c-Jun의 mRNA 수준이 human dermal fibroblasts에서 ginsenoside Rg3에 의해 감소되었다. 이들 결과들은 ginsenoside Rg3이 fibroblasts에서 TGF-$\beta$1과 AP-1의 발현을 변화시킴으로써 type I collagen과 FN합성을 촉진시킴을 보여준다.
인삼(Panax ginseng C. A Meyer)의 뿌리는 전통적인 항-노화 및 항-주름제로 동양에서 사용되어 왔다. 그러나 인삼의 어떤 성분이 주름 형성을 억제하는데 효과적인지는 아직 밝혀지지 않았다. 최근 인삼의 주요 활성 성분으로 생각되는 ginsenosides가 20가지 이상 분리되었다. 이들 중 본 연구원들은 인삼에 의한 항-주름의 작용기작을 밝히기 위해 세포간질(extracellular matrix, ECM) 물질대사에 있어 ginsenoside Rg3의 진피에서의 효과를 시험하였다. 본 연구에서, ginsenoside Rg3의 항-주름 효과를 연구하기 위해 진피의 세포간질 구성 성분과 성장 인자를 ELISA (enzyme-1in14ed immunosorbent assay) 측정법으로 평가하였다. Ginsenoside Rg3은 human dermal fibroblasts 배양에서 type I procollagen과 fibronectin(FN) 생합성을 농도 증가에 비례하여 촉진시키고(p < 0.05, n=3), 농도에 비례하여 TGF-$\beta$1 수준을 증가 (p < 0.05, n=3) 시키는 것으로 밝혀졌다. RT-PCR 분석에서 AP-1 전사 인자(transcription factor)의 일부인 c-Jun의 mRNA 수준이 human dermal fibroblasts에서 ginsenoside Rg3에 의해 감소되었다. 이들 결과들은 ginsenoside Rg3이 fibroblasts에서 TGF-$\beta$1과 AP-1의 발현을 변화시킴으로써 type I collagen과 FN합성을 촉진시킴을 보여준다.
The root of Panax ginseng C. A. Meyer has been used as a traditional anti-aging and anti-wrinkle agent in the Orient. However, it is still unknown which component of ginseng is effective at suppressing wrinkle formation. Recently at least twenty ginsenosides regarded as the main active ingredients o...
The root of Panax ginseng C. A. Meyer has been used as a traditional anti-aging and anti-wrinkle agent in the Orient. However, it is still unknown which component of ginseng is effective at suppressing wrinkle formation. Recently at least twenty ginsenosides regarded as the main active ingredients of ginseng have been isolated. Among them, we examined the effect of ginsenoside Rg3 on dermal ECM metabolism to elucidate the mechanism of anti-wrinkle by ginseng. In our study, to investigate the anti-wrinkle effect of the ginsenoside Rg3, ECM component and growth factor in dennis were evaluated by ELISA assay. Ginsenoside Rg3 was found to stimulate type I procollagen and fibronectin (FN) biosynthesis in a dose-dependent manner in normal human fibroblast culture (p < 0.05, n =3), and dose-dependently enhance TGF- ${\beta}$1 level (p < 0.05, n =3). In RT-PCR analysis mRNA level of c-Jun, a member of AP-1 transcription factor, was reduced by ginsenoside Rg3 in normal human fibroblast culture. These results indicate that ginsenoside Rg3 stimulates type I collagen and FN synthesis through the changes of TGF - ${\beta}$1 and AP-1 expression in fibroblasts.
The root of Panax ginseng C. A. Meyer has been used as a traditional anti-aging and anti-wrinkle agent in the Orient. However, it is still unknown which component of ginseng is effective at suppressing wrinkle formation. Recently at least twenty ginsenosides regarded as the main active ingredients of ginseng have been isolated. Among them, we examined the effect of ginsenoside Rg3 on dermal ECM metabolism to elucidate the mechanism of anti-wrinkle by ginseng. In our study, to investigate the anti-wrinkle effect of the ginsenoside Rg3, ECM component and growth factor in dennis were evaluated by ELISA assay. Ginsenoside Rg3 was found to stimulate type I procollagen and fibronectin (FN) biosynthesis in a dose-dependent manner in normal human fibroblast culture (p < 0.05, n =3), and dose-dependently enhance TGF- ${\beta}$1 level (p < 0.05, n =3). In RT-PCR analysis mRNA level of c-Jun, a member of AP-1 transcription factor, was reduced by ginsenoside Rg3 in normal human fibroblast culture. These results indicate that ginsenoside Rg3 stimulates type I collagen and FN synthesis through the changes of TGF - ${\beta}$1 and AP-1 expression in fibroblasts.
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문제 정의
본 연구자들은 ginsenoside Rg3에 의해 dermal coUagen 합성이 증가되는 현상이 TGF-gl에 의해 유발된 것이라는 가정하에, TGF-61 유도와 collagen 물질대사, 그리고 FN 합성간의 상호관계를 ginsenoside Rg3이 첨가된 human dermal fibroblasts에서의 type I procollagen, FN, 그리고 TGF-81의 수준을 측정함으로써 연구하였다. 또한, RT-PCR 분석에서 본 연구자들은 ginsenoside Rg3의 처리에 의한 c-Jun 발현의 양상을 평가하였다.
제안 방법
Human dermal fibro blasts 배양 30 mm dishes에 800 의 MTT (1 mg/mL) 를 첨가하여 1 〜2 h 배양하였다. 200 의 10% (w/v) so dium dodecyl sulfate/0.01 M HC1 을 첨가하여 반응을 중지시키고 세포로부터 용해된 forma球an을 얻어 570 nm의 파장에서 흡광도를 측정하였다.
PCR 산물은 2% agarose gel 전기영동하고 ethidium bromide로 염색하여 자외선광하에서 관찰하였다. Band의 강도는 G신- Pro analyzer (Media Cybernetics Inc., Silver Spring, MD, USA)를 이용하여 정량화하였다.
배양세포를 phosphate-buffered saline (PBS)으로 3회 세척하고우태아 혈청이 첨가되지 않은 RPMI 1640 배지를 가하였다. Ginsenoside Rg3 또는 TGF-61 (Invitrogen)을 최종농도가 각각 10〜30 “g/mL 그리고 10 ng/mL이 되도록 첨가하였다.
Reverse transcription 반응물은 PCR 증폭에 직접 사용하였다. PCR 산물은 2% agarose gel 전기영동하고 ethidium bromide로 염색하여 자외선광하에서 관찰하였다. Band의 강도는 G신- Pro analyzer (Media Cybernetics Inc.
RNA 분석을 위해 세포 내의 total RNA를 human dermal fibroblasts 배양으로부터 추출하였다. RNA 추출과 정제는 Trizol kit (Invitrogen)에 기술된 방법에 의해 수행하였다.
RNA 추출과 정제는 Trizol kit (Invitrogen)에 기술된 방법에 의해 수행하였다. RNA의 순도와 무결성은 A26O nrn/A28o nm 비율 측정과 agarose g신 전기영동을 통해 확인하였다. RNA 수득율은 260 nm에서의 흡광도로 측정하였고 사용전까지 -70C에서 보관하였다.
30 “g/mL로 ginsenoside Rg3을 첨가 배양하였고 human dermal fibroblasts는 6, 12, 그리고 24 h 배양 후 RNA를 분리하였다. RT-PCR은 total RNA를 사용하여 수행하였고 그 결과는 agarose g신 electrophorisis에서 분석하였다. Figure 4에 나타난 바와 같이, c-Jun mRNA는 6 h 내에 감소하기 시작하여, 24 h까지 점차적으로 감소하였으며, 24 h 이후에는 c-Jun mRNA 수준이 변화하지 않았다(data not shown).
본 연구자들은 ginsenoside Rg3에 의해 dermal coUagen 합성이 증가되는 현상이 TGF-gl에 의해 유발된 것이라는 가정하에, TGF-61 유도와 collagen 물질대사, 그리고 FN 합성간의 상호관계를 ginsenoside Rg3이 첨가된 human dermal fibroblasts에서의 type I procollagen, FN, 그리고 TGF-81의 수준을 측정함으로써 연구하였다. 또한, RT-PCR 분석에서 본 연구자들은 ginsenoside Rg3의 처리에 의한 c-Jun 발현의 양상을 평가하였다.
5 X106 cells/mL로 분주하였다. 배양세포를 phosphate-buffered saline (PBS)으로 3회 세척하고우태아 혈청이 첨가되지 않은 RPMI 1640 배지를 가하였다. Ginsenoside Rg3 또는 TGF-61 (Invitrogen)을 최종농도가 각각 10〜30 “g/mL 그리고 10 ng/mL이 되도록 첨가하였다.
세포 생존률은 MTT (3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)^2, 5- diphenyl tetrazolium bromide) 의 환원에 의한 blue for- mazan 형성을 이용하여 측정하였다. Human dermal fibro blasts 배양 30 mm dishes에 800 의 MTT (1 mg/mL) 를 첨가하여 1 〜2 h 배양하였다.
대상 데이터
Ginsenoside Rg3은 Biosapogen Technology Co., LTD (Seoul, South Korea)으로부터 제공되어 사용하였다. 그 외의 시약은 모두 특급으로 사용하였으며, 별도의 언급이 없는 것들은 모두 Sigma-Aldrich fine chemicals (St Louis, MI, USA)에서 구입하여 사용하였다.
반응하였다. cDNA 합성은 Moloney murine leucemia virus reverse transcriptase (Progega)를 사용하여 수행하였다. Reverse transcription 반응물은 PCR 증폭에 직접 사용하였다.
, LTD (Seoul, South Korea)으로부터 제공되어 사용하였다. 그 외의 시약은 모두 특급으로 사용하였으며, 별도의 언급이 없는 것들은 모두 Sigma-Aldrich fine chemicals (St Louis, MI, USA)에서 구입하여 사용하였다.
°C 조건 하에서 유지하였다. 세포는 passage 3〜8만을 사용하였다.
신생아 포피조직에서 분리한 human dermal fibroblasts 는 BioWhittaker (WalkersviUe, MD, USA)에서 구입하여 10% 우태아 혈청 (Invitrogen life technologies, Carlsbad, CA, USA), 2 mM glutamine (Invitrogen), 그리고 1% Antibiotic-Antimycotic (Invitrogen) 이 첨가된 RPMI 1640 (HyClone Laboratories, Logan, UT, USA) 과 5% CO, 37 °C 조건 하에서 유지하였다. 세포는 passage 3〜8만을 사용하였다.
데이터처리
자료는 one-side「tests로 분석하였다. 모든 차이는 P< 0.
이론/모형
Ginsenoside Rg3에 노출된 human dermal fibroblasts에서의 c-Jun mRNA의 발현 양상을 RT-PCR 방법으로 측정하였다. 30 “g/mL로 ginsenoside Rg3을 첨가 배양하였고 human dermal fibroblasts는 6, 12, 그리고 24 h 배양 후 RNA를 분리하였다.
배양으로부터 추출하였다. RNA 추출과 정제는 Trizol kit (Invitrogen)에 기술된 방법에 의해 수행하였다. RNA의 순도와 무결성은 A26O nrn/A28o nm 비율 측정과 agarose g신 전기영동을 통해 확인하였다.
각 실험군의 배양 시간에 따른 세포 배양액의 Procolla gen type I C-terminal peptide (PICP), FN 그리고 TGF- 61의 함유량은 ELISA에 의해 분석되었다. ELISA kit은 PICP ELISA kit (Takara Bio Inc.
성능/효과
1, 2, 그리고 3일 시료처리 후 세포로부터 얻어진 forma- zan을 분석한 결과 ginsenoside Rg3의 첨가에 의한 세포 생존율에 변화가 없었다(data not 아iown).
1). 10 Mg/mL로 ginsenoside Rg3이 첨가되었을 때, normal fibroblasts에서 생산된 PICP 수준은 24, 48, 그리고 72 h에서 각각 3.3%, 92.9%, 그리고 109.8% 증가하였다. 20 祯 mL로 ginsenoside Rg3이 첨가되었을 때, PICP 수준은 24, 48, 그리고 72 h에서 각각 78% 144.
6% 증가하였다. 30 飓/mL로 ginsenoside Rg3이 첨가되었을 때, 생산된 PICP 수준은 24, 48, 그리고 72 h에서 각각 28.8%, 106.6%, 그리고 110.6% 증가하였다. 각 군의 표준 편차를 고려할 때, 10 飓/mL과 30 卩g/mL로 ginsenoside Rg3이 첨가되었을 때 48 그리고 72 h에서 유사한 증가도를 나타냈다.
후속연구
Ginsenoside Rg3에 의한 이들의 조절은 ECM 대사가 비정상적인 경우 matrix의 합성을 유발하고 분해를 억제하는 효과를 나타낼 수 있을 것으로 생각된다. 따라서 ginsenoside Rg3은 내부 또는 외부 인자에 의해 야기되는 주름의 방지와 치유에 탁월한 효과를 나타내는 화장품 원료로 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
참고문헌 (11)
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