[논문]솔잎 추출물의 항산화 효과

유지현; 차재영; 정영기; 정경태; 조영수

doi:10.5352/JLS.2004.14.5.863

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솔잎 추출물의 항산화 효과

Antioxidative Effects of Pine (Pinus denstifora) Needle Extracts.

생명과학회지 = Journal of life science v.14 no.5 = no.66 , 2004년, pp.863 - 867

유지현 (동아대학교 생명공학과 ) ; 차재영 ( 동아대학교 생명공학과 ) ; 정영기 ( 동의대학교 생명응용과학과 ) ; 정경태 ( 동의대학교 생명응용과학과 ) ; 조영수 ( 동아대학교 생명공학과)

초록

용어
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식물성 성분 중에서 생리활성 인자를 탐색할 목적으로 솔잎의 수용성 추출물에 의한 항산화 활성을 DPPH법, thiocyanate법, TBA법 및 microsome 생 체 막 지 질 과산화물 생성정도를 TBARS법으로 측정 하고, 총 폴리페놀 함량을 측정하였다. 솔잎 수용성 추출물의 총 폴리페놀 화합물 함량은 1.61%이었으며, DPPH 측정법에서는 짙은 자색의 탈색되는 정도로 나타내는 전자 공여능이 솔잎 수용성 추출물의 0.1% 농도에서 BHT와 비슷한 수준으로 항산화 활성이 높게 나타났다. 간 microsome을 이용한 생체막 지질 과산화 억제정도는 솔잎 수용성 추출물의 0.1% (67.7%)>0.05% (63.1%)>0.01%(28.2%) 순으로 농도에 비례하여 증가하였다. Linoleic acid 산화 실험계를 이용한 thiocyanate법에서는 0.01%, 0.05%, 0.1%의 농도에서 모두 반응 7일째까지 대조구에 비해 매우 강한 항산화 활성을 보였으며, TBA법에서는 반응 6일째까지 는 0.1%>0.05%>0.01%의 순으로 농도 증가에 따라 항산화 활성도 높게 나타났다. 이상의 결과에서 솔잎 수용성 추출물 중에는 in vitro 항산화 실험에서 항산화 활성을 나타내는 생리활성 성분이 존재하는 것으로 볼 수 있으므로 천연 항산화제로서의 가능성을 시사하였다.

Abstract

Antioxidative activities of pine (Pinus denstifora) needle extracts were tested in vitro experimental models. The concentration of total polyphenolic compound of water extracts from pine needle was 1.61 %. In DPPH ($\alpha$, $\alpha'$-diphenyl-$\beta$-picrylhydrazyl) method, the electron donating activity of 0.1 % water extracts from pine needle was as high as BHT (0.05%, w/v). The antioxidative activity was measured by inhibition against lipid peroxidation of rat liver microsome, and this activity was shown in the following: 67.7% at 0.1% concentration >63.1% at 0.05% concentration > 28.2% at 0.01% concentration. In antioxidative activity determined by thiocyanate method against lipid peroxidation using linoleic acid, the antioxidative activities at all concentration of 0.01 %, 0.05% and 0.1 % were much higher than control during 7 days. In TBA method, the antioxidative activity was increased with increasing concentration until 6 days. These results support that water extracts from pine needle contain antioxidative compounds.

주제어

#Pind needle #polyphenolic compound #antioxidative activity #DPPH ( $\alpha$, $\alpha'$-diphenyl- $\beta$-picrylhydrazyl)

본문요약
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제안 방법

Tannic acid를 이용한 표준곡선은 tannic acid 1 g을 50% 메탄올 용액 1 ml에 녹이고 최종 농도 가 0, 50, 100, 150, 200, 300 및 500 ug/ml 용액이 되도록 조제하여 이를 일정량 취하여 위와 같은 방법으로 760 nm에서 흡광도를 측정하여 작성하였다.

이때 총 폴리페놀 화합물은 tannic acid를 이용하여 작성한 표준곡선으로부터 함량을 구하였다. Tannic acid를 이용한 표준곡선은 tannic acid 1 g을 50% 메탄올 용액 1 ml에 녹이고 최종 농도 가 0, 50, 100, 150, 200, 300 및 500 ug/ml 용액이 되도록 조제하여 이를 일정량 취하여 위와 같은 방법으로 760 nm에서 흡광도를 측정하여 작성하였다.
냉각 후 535 run에서 흡광도를 측정하였으며, 지질과 산화의 억제율은 대조구의 흡광도에 대한 저해율(%)로 비교하였다.

67% TBA 1 ml를 가하여 혼합하고 끓는 물속에서 30분간 가열하여 발색시켰다. 냉각 후 535 run에서 흡광도를 측정하였으며, 지질과 산화의 억제율은 대조구의 흡광도에 대한 저해율(%)로 비교하였다.
세절한 솔잎 100 g과 솔잎 중량의 10배의 증류수를 열수 추출기에 넣고 90°C에서 2시간씩 3회 반복 추출하였다.

세절한 솔잎 100 g과 솔잎 중량의 10배의 증류수를 열수 추출기에 넣고 90°C에서 2시간씩 3회 반복 추출하였다. 추출액을 모아 여과지(Whatman filter paper No.
식물성 성분 중에서 생리활성인자를 탐색할 목적으로 솔잎의 수용성 추출물에 의한 항산화 활성을 DPPH법, thiocy anate 법, TBA법 및 microsome 생체막지질 과 산화물 생성 정 도를 TBARS법으로 측정하고, 총 폴리페놀 함량을 측정하였다.

식물성 성분 중에서 생리활성인자를 탐색할 목적으로 솔잎의 수용성 추출물에 의한 항산화 활성을 DPPH법, thiocy anate 법, TBA법 및 microsome 생체막지질 과 산화물 생성 정 도를 TBARS법으로 측정하고, 총 폴리페놀 함량을 측정하였다. 솔잎 수용성 추출물의 총 폴리페놀 화합물 함량은 1.
이때 활성의 비교를 위하여 BHT를 0.05% 농도로 사용하여 BHT 첨가구로 하였다.

1 ml를 혼합한 후 정확히 3분 후에 500 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 활성의 비교를 위하여 BHT를 0.05% 농도로 사용하여 BHT 첨가구로 하였다.
이용 액 5 ml에 일정 농도(0.01%, 0.05%, 0.1%)의 시료용액 1 ml을 혼합하여 실온에서 30분간 반응시킨 후 528 nm에서 흡광도의 감소를 측정하였다 卩2].

2에 여과시켜 만들었다. 이용 액 5 ml에 일정 농도(0.01%, 0.05%, 0.1%)의 시료용액 1 ml을 혼합하여 실온에서 30분간 반응시킨 후 528 nm에서 흡광도의 감소를 측정하였다 卩2]. 이 때 대조구인 BHT는 0.
총 폴리페놀 화합물의 함량은 페놀성 물질이 phosphomo- lybdic acid와 반응하여 청색을 나타내는 것을 이용한 Folin- Denis법[24]을 약간 변형시켜 측정하였다.

총 폴리페놀 화합물의 함량은 페놀성 물질이 phosphomo- lybdic acid와 반응하여 청색을 나타내는 것을 이용한 Folin- Denis법[24]을 약간 변형시켜 측정하였다. 즉, 시료용액 0.
추출액을 모아 여과지(Whatman filter paper No.2)로 여과시킨 후 여과액을 rotatory vacuum evaporator로 감압농축하고, 농축된 액을 동결건조기로 동결건조시킨 분말 상태를 수용성 추출물로 하였으며, 이때 수율은 약 1% 정도였다.

세절한 솔잎 100 g과 솔잎 중량의 10배의 증류수를 열수 추출기에 넣고 90°C에서 2시간씩 3회 반복 추출하였다. 추출액을 모아 여과지(Whatman filter paper No.2)로 여과시킨 후 여과액을 rotatory vacuum evaporator로 감압농축하고, 농축된 액을 동결건조기로 동결건조시킨 분말 상태를 수용성 추출물로 하였으며, 이때 수율은 약 1% 정도였다.
측정 방법은 혼합용액에서 0.1 ml을 취하여 시험관에 넣고 70% ethanol 3 ml과 ammonium thiocyanate 용액 0.1 ml, ferrous chloride 용액 0.1 ml를 혼합한 후 정확히 3분 후에 500 nm에서 흡광도를 측정하였다.

2 ml를 가하여 40°C에서 incu bation 하면서 일정 간격으로 측정하였다. 측정 방법은 혼합용액에서 0.1 ml을 취하여 시험관에 넣고 70% ethanol 3 ml과 ammonium thiocyanate 용액 0.1 ml, ferrous chloride 용액 0.1 ml를 혼합한 후 정확히 3분 후에 500 nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때 활성의 비교를 위하여 BHT를 0.

대상 데이터

본 실험에서 사용한 솔잎은 2003년 10월경 경남 합천군 해인사 부근 인근 야산에서 자생하는 소나무(Pini/s denstifora) 에서 잎만을 채취하여 일반 수돗물로 세척하고 다시 증류수로 헹군 후 그늘에서 말린 후 2〜3 cm 길이로 세절하여 추출 재료로 사용하였다.

본 실험에서 사용한 솔잎은 2003년 10월경 경남 합천군 해인사 부근 인근 야산에서 자생하는 소나무(Pini/s denstifora) 에서 잎만을 채취하여 일반 수돗물로 세척하고 다시 증류수로 헹군 후 그늘에서 말린 후 2〜3 cm 길이로 세절하여 추출 재료로 사용하였다.

이론/모형

Antioxidative activity of pine needle extracts in the linoleic acid system that is measured by the TBA method.

4. Antioxidative activity of pine needle extracts in the linoleic acid system that is measured by the TBA method. BHT: butylated hydroxytoluene (0.
Antioxidative activity of pine needle extracts in the linoleic acid system that is measured by the thiocyanate method.

3. Antioxidative activity of pine needle extracts in the linoleic acid system that is measured by the thiocyanate method. BHT: butylated hydroxytoluene (0.
항산화 활성은 Wong 등의 방법[2기에 따라 50 mM Tris- HC1 buffer (pH 7.5) 1.5 ml에 시료용액 0.2 ml, 간micro- some 분획(1 ml중 1 mg의 단백질 함유) 0.1 ml, 0.1 mM as corbate 0.1 ml 및 5 mM FeSCQ 0.1 ml를 차례로 가하여 반응액을 잘 혼합한 후 37°C의 shaking water bath에서 1시간 in cubation 시켜 과산화를 유도시켰다.

항산화 활성은 Wong 등의 방법[2기에 따라 50 mM Tris- HC1 buffer (pH 7.5) 1.5 ml에 시료용액 0.2 ml, 간micro- some 분획(1 ml중 1 mg의 단백질 함유) 0.1 ml, 0.1 mM as corbate 0.1 ml 및 5 mM FeSCQ 0.1 ml를 차례로 가하여 반응액을 잘 혼합한 후 37°C의 shaking water bath에서 1시간 in cubation 시켜 과산화를 유도시켰다.이때 대조 구는 시료를 첨가시키지 않고 위에서와 동일한 방법으로 실시하였다.

성능/효과

Linoleic acid 산화 실험계를 이용한 thiocyanate법에서는 0.01%, 0.05%, 0.1%의 농도에서 모두 반응 7일째까지 대조구에 비해 매우 강한 항산화 활성을 보였으며, TBA법에서는 반응 6일째까지는 0.1%>0.05%>0.01%의 순으로 농도 증가에 따라 항산화 활성도 높게 나타났다.

2%) 순으로 농도에 비례하여 증가하였다. Linoleic acid 산화 실험계를 이용한 thiocyanate법에서는 0.01%, 0.05%, 0.1%의 농도에서 모두 반응 7일째까지 대조구에 비해 매우 강한 항산화 활성을 보였으며, TBA법에서는 반응 6일째까지는 0.1%>0.05%>0.01%의 순으로 농도 증가에 따라 항산화 활성도 높게 나타났다. 이상의 결과에서 솔잎 수용성 추출물 중에는 in vitro 항산화실험에서 항산화 활성을 나타내는 생리활성 성분이 존재하는 것으로 볼 수 있으므로 천연 항산화제로서의 가능성을 시사하였다.
간 microsome을 이용한 생체막지질 과산화 억제 정도는 솔잎 수용성 추출물의 0.1% (67.7%)>0.05% (63.1%)>0.01% (28.2%) 순으로 농도에 비례하여 증가하였다.

1% 농도에서 BHT와 비슷한 수준으로 항산화 활성이 높게 나타났다. 간 microsome을 이용한 생체막지질 과산화 억제 정도는 솔잎 수용성 추출물의 0.1% (67.7%)>0.05% (63.1%)>0.01% (28.2%) 순으로 농도에 비례하여 증가하였다. Linoleic acid 산화 실험계를 이용한 thiocyanate법에서는 0.
동물체내에서 생체막 지질의 과산화물 생성 정도를 나타내는 TBARS 함량은 각 조직세포의 microsome에 Fe^/ascorbate을 첨가하여 비효소적으로 유도하는데 [27], 솔잎의 수용성 추출물이 TBARS 함량에 미치는 영향은 0.01%, 0.05%, 0.1% 농도에서 각각 28.2%, 63.1%, 67.7%의 지질 과산화 억제 효과가 있었다 (Fig. 2).

이러한 지질 과산화 반응으로 형성된 지질 과산화물은 생체 내에서 퇴행 성 과정을 유발하고, 암, 노화, 생체막의 변화 및 파괴 등 생체기능에 좋지 못한 효과를 나타내므로[3, 23, 26]생체 내에서 지질 과산화물의 제어는 매우 중요하다. 동물체내에서 생체막 지질의 과산화물 생성 정도를 나타내는 TBARS 함량은 각 조직세포의 microsome에 Fe^/ascorbate을 첨가하여 비효소적으로 유도하는데 [27], 솔잎의 수용성 추출물이 TBARS 함량에 미치는 영향은 0.01%, 0.05%, 0.1% 농도에서 각각 28.2%, 63.1%, 67.7%의 지질 과산화 억제 효과가 있었다 (Fig. 2).이는 Jun 등[13]의 참 오동나무 열매의 수용성, methanol, eth anol 추출물의 0.
본 실험에서 사용한 솔잎 수용성 추출물의 총 폴리페놀 화합물 함량을 tannic acid를 표준 곡선으로 하여 측정한 결과 Table 1과 같이 1.61%가 함유되어 있었다.

폴리페놀 화합물은 식물계에 널리 분포되어 있는 2차 대사산물로서 일반적으로 항산화 작용이 강한 것으로 알려져 있다. 본 실험에서 사용한 솔잎 수용성 추출물의 총 폴리페놀 화합물 함량을 tannic acid를 표준 곡선으로 하여 측정한 결과 Table 1과 같이 1.61%가 함유되어 있었다. Kang 등[14] 은 솔 잎 생체 100 g당 총 폴리페놀 함량이 1.
솔잎 수용성 추출물의 농도에 따른 항산화 활성의 차이는 나타나지 않았으나, 0.01%, 0.05%, 0.1%의 농도에서 모두 반응 7일째까지 대조구에 비해 매우 강한 항산화 활성이 유지되었으며, 0.05% BHT와도 비슷한 수준의 높은 항산화 활성을 나타내었다.

3과 같다. 솔잎 수용성 추출물의 농도에 따른 항산화 활성의 차이는 나타나지 않았으나, 0.01%, 0.05%, 0.1%의 농도에서 모두 반응 7일째까지 대조구에 비해 매우 강한 항산화 활성이 유지되었으며, 0.05% BHT와도 비슷한 수준의 높은 항산화 활성을 나타내었다. 또한 TBA법을 이용하여 항산화 활성을 측정한 결과는 Fig.
솔잎 수용성 추출물의 총 폴리페놀 화합물 함량은 1.61%이었으며, DPPH 측정법에서는 짙은 자색의 탈색되는 정도로 나타내는 전자공여능이 솔잎 수용성 추출물의 0.1% 농도에서 BHT와 비슷한 수준으로 항산화 활성이 높게 나타났다.

식물성 성분 중에서 생리활성인자를 탐색할 목적으로 솔잎의 수용성 추출물에 의한 항산화 활성을 DPPH법, thiocy anate 법, TBA법 및 microsome 생체막지질 과 산화물 생성 정 도를 TBARS법으로 측정하고, 총 폴리페놀 함량을 측정하였다. 솔잎 수용성 추출물의 총 폴리페놀 화합물 함량은 1.61%이었으며, DPPH 측정법에서는 짙은 자색의 탈색되는 정도로 나타내는 전자공여능이 솔잎 수용성 추출물의 0.1% 농도에서 BHT와 비슷한 수준으로 항산화 활성이 높게 나타났다. 간 microsome을 이용한 생체막지질 과산화 억제 정도는 솔잎 수용성 추출물의 0.
솔잎 수용성 추출물의 항산화 효과를 DPPH radical 제거 정 도를 측정하여 전자공여능으로 나타낸 결과, 0.01%, 0.05%, 0.1% 농도에서 각각 18.2%, 64.3%, 70.0%로 나타나 농도 증가에 따라 항산화 활성도 증가됨을 알 수 있었다 (Fig. 1).

DPPH는 비교적 안정한 free radical로써, ascorbic acid, tocopherol, polyhydroxy 방향 족 화합물, 방향족 아민류에 의해 환원되어짙은 자색이탈색되는 원리를 이용하여 항산화 활성을 측정하는데, 이러한 DPPH법은 식물 추출물의 항산화 활성을 간단히 측정할 수 있는 동시에 실제 항산화 활성과도 연관성이 매우 높기 때문에 많이 이용되는 방법이다. 솔잎 수용성 추출물의 항산화 효과를 DPPH radical 제거 정 도를 측정하여 전자공여능으로 나타낸 결과, 0.01%, 0.05%, 0.1% 농도에서 각각 18.2%, 64.3%, 70.0%로 나타나 농도 증가에 따라 항산화 활성도 증가됨을 알 수 있었다 (Fig. 1).특 히 0.
이상의 결과에서 솔잎 수용성 추출물 중에는 in vitro 항산화실험에서 항산화 활성을 나타내는 생리활성 성분이 존재하는 것으로 볼 수 있으므로 천연 항산화제로서의 가능성을 시사하였다.

01%의 순으로 농도 증가에 따라 항산화 활성도 높게 나타났다. 이상의 결과에서 솔잎 수용성 추출물 중에는 in vitro 항산화실험에서 항산화 활성을 나타내는 생리활성 성분이 존재하는 것으로 볼 수 있으므로 천연 항산화제로서의 가능성을 시사하였다.

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