[논문]생강추출물 투여에 의한 마우스 비장세포 및 대식세포 활성 효과

류혜숙; 김진; 박상철; 김현숙

[국내논문] 생강추출물 투여에 의한 마우스 비장세포 및 대식세포 활성 효과
Enhancing Effect of Zingiber Officinale Roscoe Extracts on Mouse Spleen and Macrophage Cells Activation 원문보기

韓國營養學會誌 = The Korean journal of nutrition．, v.37 no.9, 2004년, pp.780 - 785

류혜숙 (숙명여자대학교 생활과학대학 식품영양학과) , 김진 (숙명여자대학교 생활과학대학 식품영양학과) , 박상철 (서울대학교 체력과학노화연구소) , 김현숙 (숙명여자대학교 생활과학대학 식품영양학과)

Abstract ▼ AI-Helper

Recently many investigators have initiated searches for immunomodulating substances from natural food sources. Ginger (Zingiber officinale Roscoe) has been used as a raw material in many traditional preparations since the ancient time. This study was performed to investigate the immunomodulative effects of Zingiber officinale Roscoe in mice, using ex vivo experiments. In order to elucidate the immunomodulative effects of Ginger, water extracts of the plant were orally administrated into mice, and isolated splenocytes and macrophages were used as experimental model. In order to identify its ex vivo effect six to seven week old Balb/c mice were fed ad libitum on a chow diet and water extracts of ginger were orally administrated every other day for two weeks at two different concentrations (50 and 500 mg/kg b.w.). After preparing the single cell suspension, the proliferation of splenocytes was determined by MTT assay. The result of ex vivo study showed that the highest proliferation of splenocytes and macrophage activatation was seen in the mice orally administrated at the concentration of 500 mg/kg b. w. of ginger water extracts. In conclusion, this study suggests that ginger extracts nay enhance the immune function by regulating the splenocyte proliferation and cytokine prodution capacity by activated macrophages in mice.

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문제 정의

생강의 생리활성 성분이 항균작용" 항염작용" 혈청 콜레스테롤 저하효과, 항산화작용少을 나타내는 것으로 보고되고 있다. 생강의 면역과 관련된 연구로는 생강의 올레오레진 (oleoresirn), 진저롤 (gingerol), 쇼가■올 (shogaol) 분획이 자연살해세포 기능을 활성화시켜 면역능 증진에 효과가 있는 것으로 보고 하였다/ 따라서 본 연구에서는 면역증진 능을 갖는 천연 식물소재로서 생강의 면역 증강 효과검색을 다음과 같은 단계로 검증하였다.
통하여 규명한바 있다. 본 연구는 그에 대한 후속 연구로서 생강 열수 추출물을 실험동물에 직접 경구 투여함으로서 이들 시료가 마우스 면역능에 미치는 영향을 생체 외 (ex vivo) 연구를 통하여 규명하고자 한다. 따라서 생강 열수 추출물을 격일로 2주 동안 경구투여한 마우스의 비장 세포 증식능과 활성 복강대식세포에서 분비되는 cytokine (IL-顷, IL-6, TNF-a)생성량의 변화를 측정하여 생강 추출물이 마우스 면역능에 미치는 영향을 연구하여, 새로운 천연식품의 기능성 식품 개발의 가능성을 제시하고자 한다.
본 연구는 그에 대한 후속 연구로서 생강 열수 추출물을 실험동물에 직접 경구 투여함으로서 이들 시료가 마우스 면역능에 미치는 영향을 생체 외 (ex vivo) 연구를 통하여 규명하고자 한다. 따라서 생강 열수 추출물을 격일로 2주 동안 경구투여한 마우스의 비장 세포 증식능과 활성 복강대식세포에서 분비되는 cytokine (IL-顷, IL-6, TNF-a)생성량의 변화를 측정하여 생강 추출물이 마우스 면역능에 미치는 영향을 연구하여, 새로운 천연식품의 기능성 식품 개발의 가능성을 제시하고자 한다.
촉진되었음이 확인되었다.10 이러한 결과를 바탕으로 본 실험에서는 생체 외 (ex vivo} 모델을 이용호}-여 생강 열수 추출물의 경구투여가 마우스 비장세포 증식능, 복강 대식세포에서 분비하는 cytokine (IL-1/?, IL-6, TNF-a) 생성량에 어떠한 영향을 미치는지 관찰함으로써 생체내에서 생강 열수 추출물의 면역활성효과를 검증하고자 하였다.
는 주요기관이다 m 또한 T세포, B세포, 대식세포등의 여러 가지 림프구가 밀집되어 있는 비장의 크기 및 세포의 수는 면역반응에 밀접한 관련이 있으므로", 면역증진능을 관찰하기 위한 지표로 비장세포 증식능을 평가한다. 본 실험에서는 면역증진능을 관찰하기 위한 지표로 MTT assay 를 이용하여 비장세포 증식능을 측정하였다. MTT assay 는 세포증식능 측정 도구로서 가장 적합한 3H-thymidine uptake의 결과와 비교적 유사한 것으로 보고되고 있다.
본 연구는 천연식품으로부터 면역 증진능을 갖는 식품소재 연구의 일환으로서 생강의 면역증강 효과를 검색하고자 하였다. 선행 연구 발표된 생강의 물층 및 에탄올층에 대한 시험관 내 실험으로 비장세포 증식능을 검색한 결과를 바탕으로 실시된 생체 외 (ex vivo) 실험은 다음과 같다.

제안 방법

생강 추출물은 동결 건조된 시료를 증류수 80℃ 수욕 상에서 3시간씩 3회 반복 추출한 후 감압농축하여 열수 추출물을 얻었다. 본 연구에 사용된 동물은 7~8주령된 암컷 Balb/c mouse를 (주) 대한실험동물센타로부터 분양 받아 고형 사료와 물을 자유로이 공급하면서 7~8일 정도 실험동물 실에서 적응시킨 후 체중이 15 g 내외인 마우스를 실험에 사용하였다.
본 연구에 사용된 동물은 7~8주령된 암컷 Balb/c mouse를 (주) 대한실험동물센타로부터 분양 받아 고형 사료와 물을 자유로이 공급하면서 7~8일 정도 실험동물 실에서 적응시킨 후 체중이 15 g 내외인 마우스를 실험에 사용하였다. 실험 동물실 온도는 22 ± 2℃, 습도는 40~ 60%로 유지하였고, 명암주기 (Light and dark cycle) 는 12시간 단위로 조절하였다. 생강 열수 추출물은 각각 50 ㎎/㎏ b.
실험 동물실 온도는 22 ± 2℃, 습도는 40~ 60%로 유지하였고, 명암주기 (Light and dark cycle) 는 12시간 단위로 조절하였다. 생강 열수 추출물은 각각 50 ㎎/㎏ b.w.과 500 ㎎/㎏ b.w.의 농도가 되도록 멸균증류수로 희석하여 0.2 mL씩 2주간 격일로 투여하였고, 대조군은 생리식염수를 동량 투여하였다.
2) 와 증류수에 현탁시켜 5분간 처리하여 적혈구를 제거하고 RPMI 1640 용액으로 2회 원심 세척하였다. 모아진 비장세포를 10%의 불활성화된 FBS> 함유한 RPMI 1640 용액에 분산 시켜, trypan blue solution으로 염색한 후 hemocyto- meter를 이용하여 그 세포수를 측정하였다. 세포수를 5.
0 ± 106 cell/mL이 되도록 희석하여 96 well plate의 각 well에 90 “L씩 분주하였다. 또한 mi- togen으로 Con厶 (5 /zg/mL), LPS (15 "g/mL) 를 10 “L 씩 분주하고 대조군에는 배지를 동량으로 분주하였다. 준비된 plate를 37℃, 5% CO₂ incubator (Sanyo) 에서 44시간 배양하여 MTT assay를 실시하였다.
또한 mi- togen으로 Con厶 (5 /zg/mL), LPS (15 "g/mL) 를 10 “L 씩 분주하고 대조군에는 배지를 동량으로 분주하였다. 준비된 plate를 37℃, 5% CO₂ incubator (Sanyo) 에서 44시간 배양하여 MTT assay를 실시하였다. 즉 배양후 MTT 를 10 “L가하고, 알루미늄 호일로 밀폐하여 4시간 동안 다시 배양하여 formazan crystal 형성을 유도하였다.
생강 열수 추출물을 경구 투여한 마우스의 복강내 대식세포를 추출하여 배양시킨 다음 배양상층액으로부터 분비되는 cytokine (IL-18, IL-6, TNF-a)의 분비량을 각각 측정하였다. 즉 10%의 불활성화된 FBS를 함유한 RPMI 1640 용액을 1 X 10° cell/mL의 세포농도가 되도록 분산 시켜 24—well plate의 각 well에 1000 “L씩 분주하여 37℃, 5 % CO₂ incubator (Sanyo)에서 2시간 배양하다.
즉 10%의 불활성화된 FBS를 함유한 RPMI 1640 용액을 1 X 10° cell/mL의 세포농도가 되도록 분산 시켜 24—well plate의 각 well에 1000 “L씩 분주하여 37℃, 5 % CO₂ incubator (Sanyo)에서 2시간 배양하다. 배지 교환을 위해 상층액을 걷고 각 well에 10%의 불활성화된 FBS를 함유한 RPMI 1640 용액을 900 “L, 대식세포를 활성화시키는 mitogen인 LPS와 배지를 100 “L 가한 후 37℃, 5% CO₂ incubator (Sanyo) 에서 48시간 배양하였다. 배양 상층액을 분리흐k셔 IL-16, IL-6, TNF- a 의 분비량을 ELISA cytokine kit (R & D system, USA) 를 이용하여 측정하였다.
배지 교환을 위해 상층액을 걷고 각 well에 10%의 불활성화된 FBS를 함유한 RPMI 1640 용액을 900 “L, 대식세포를 활성화시키는 mitogen인 LPS와 배지를 100 “L 가한 후 37℃, 5% CO₂ incubator (Sanyo) 에서 48시간 배양하였다. 배양 상층액을 분리흐k셔 IL-16, IL-6, TNF- a 의 분비량을 ELISA cytokine kit (R & D system, USA) 를 이용하여 측정하였다.
관여흐). 는 주요기관이다 m 또한 T세포, B세포, 대식세포등의 여러 가지 림프구가 밀집되어 있는 비장의 크기 및 세포의 수는 면역반응에 밀접한 관련이 있으므로", 면역증진능을 관찰하기 위한 지표로 비장세포 증식능을 평가한다. 본 실험에서는 면역증진능을 관찰하기 위한 지표로 MTT assay 를 이용하여 비장세포 증식능을 측정하였다.
본 실험에서는 생강 열수 추출물을 50 ㎎/㎏ b.w.과 500 mg/蜘 b.w.의 농도로 경구투여한 마우스로부터 복강 대식세포를 분리해 낸 다음 활성화된 대식세포가 생성해 낸 Ⅱ.
" data-before="IL" data-ocr-fix="">Ⅱ.-1/9, IL-6, TNF-a의 분비량을 측정하였고 각 군별 양의 대조군으로는 LPS (15 mg/mL)로 자극한 대식세포로부터 분비된 cytokine을 측정함으로서 대식세포의 활성화에 대한 지표로 삼았다.
선행 연구 발표된 생강의 물층 및 에탄올층에 대한 시험관 내 실험으로 비장세포 증식능을 검색한 결과를 바탕으로 실시된 생체 외 (ex vivo) 실험은 다음과 같다. 생강 열수 추출물을 2주간 격일로 체중 kg당 50 mg과 500 mg의 두 농도로 각각 마우스에 경구 투여한 후 비장 세포 증식능과 활성 복강 대식세포에서 분비하는 사이토카인 분비능을 측정하였다. 그 결과 생강 추출물 투여군 50 ㎎/㎏ b.

대상 데이터

얻었다. 본 연구에 사용된 동물은 7~8주령된 암컷 Balb/c mouse를 (주) 대한실험동물센타로부터 분양 받아 고형 사료와 물을 자유로이 공급하면서 7~8일 정도 실험동물 실에서 적응시킨 후 체중이 15 g 내외인 마우스를 실험에 사용하였다. 실험 동물실 온도는 22 ± 2℃, 습도는 40~ 60%로 유지하였고, 명암주기 (Light and dark cycle) 는 12시간 단위로 조절하였다.
본 연구에 사용된 배지는 RPMI medium 1640의 GIBCO BRL (Grand Island, NY, USA) 의 제품을 사용하였고, fetal bovine serum (FBS), lipopolysaccharide (LPS), concanavalin A (ConA), thioglycollate, sodium bicarbonate, ammonium chloride, TRIZAM®base, TRIZAM® hydrochloride, trypan blue solution (0.4%), 3-(4, 5- dimethyl-thiazol-2-yl) -2, 5-diphenyl tetrazolium bromide (MTT), DMSO (dimethyl sulfide) 등의 시약은 Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA) 제품을 사용하였다.

데이터처리

모든 실험결과의 자료는 SAS (Statistic Analysis System) 통계 프로그램을 이용하여 평균 및 표준편차를 구하였다. 각 군간의 비교에 각각의 요인은 분산분석 (Analysis of Variance, AN0VA) 을 사용흐}였고, Duncan's multiple range test로 a = 0.
각 군간의 비교에 각각의 요인은 분산분석 (Analysis of Variance, AN0VA) 을 사용흐}였고, Duncan's multiple range test로 a = 0.05 수준에서 유의성을 검정하였다.

이론/모형

마우스 비장세포의 분리는 Mishell 등"의 방법에 의해 실행하였다. 경추탈골법으로 희생시킨 마우스의 비장을 무균적으로 적출하여 RPMI 1640 용액으로 씻은 다음 멸균유리봉으로 가볍게 분쇄하여 세포를 유리시켰다.

성능/효과

생강 열수 추출물을 2주동안 추출물 투여 결과 50 ㎎/㎏ b.w 과 500 ㎎/㎏ b.w. 투여군 모두 미토젠을 처리하지 않았을 때 2.42 ± 0.35-2.44 ± 0.35로 대조군 보다 유의적으로 높은 증식능을 보였으며, 500 ㎎/㎏ b.w. 투여군에서 50 ㎎/㎏ b.w. 보다 높은 증식능을 보였다. 미토젠에 대한 반응을 보면, 세포성 면역과 관련있는 T세포를 선택적으로 증식시키는 미토젠인 Con A 첨가시 투여한 경우 50 ㎎/㎏ b.
보다 높은 증식능을 보였다. 미토젠에 대한 반응을 보면, 세포성 면역과 관련있는 T세포를 선택적으로 증식시키는 미토젠인 Con A 첨가시 투여한 경우 50 ㎎/㎏ b.w.과 500 ㎎/㎏ b.w. 투여군에서 4.60 ± 0.29-5.69 ± 0.34로 대조군에 비해 높은 증식능을 보였으나 50 ㎎/㎏ b.w. 유의성은 없었고, 500 ㎎/㎏ b.w. 투여군에서 유의적으로 높은 증식능을 보였다. 체액성 면역과 관련이 있는 B 세포를 선택적으로 증식시키는 미토젠인 LPS 첨가시 2주 투여한 결과 500 ㎎/㎏ b.
투여군에서 유의적으로 높은 증식능을 보였다. 체액성 면역과 관련이 있는 B 세포를 선택적으로 증식시키는 미토젠인 LPS 첨가시 2주 투여한 결과 500 ㎎/㎏ b.w. 농도에서는 대조군 보다 유의적인 차이는 보이지 않았으나 높은 증식능을 보였다. 따라서 생강 열수 추출물의 경구투여가 비장세포 증식 능에 미치는 영향에 대한 검색 결과 대조군에 비해 비장 세포 증식을 촉진시키는 것으로 사료된다.
농도에서는 대조군 보다 유의적인 차이는 보이지 않았으나 높은 증식능을 보였다. 따라서 생강 열수 추출물의 경구투여가 비장세포 증식 능에 미치는 영향에 대한 검색 결과 대조군에 비해 비장 세포 증식을 촉진시키는 것으로 사료된다. Adachi 등'"의사람을 대상으로한 연구에서 2주 동안 1일 15 g의 생강 분말을 섭취한 실험군에서 혈청 내 thromboxane 의 생성이 감소되는 것으로 나타났다.
비장세포 증식능을 상승시킨 백작약, 어성초, 참취, 톳 등의 시료 투여의 다른 연구에서 B 림프구 분화에 의한 체 액성 면역 반응이 항진되는 것으로 보아.⑹ 미토젠으로 ConA를 처리한 2주 동안의 500 ㎎/㎏의 농도에서 유의적인 차이를 나타내 생강 열수 추출물은 T 세포에서 파생되는 면역 세포를 성숙 변화시켜 면역활성을 촉진시키고이로 인해 체액성 면역과 세포성 면역에 관여하여 면역기능을 향상시킬 수 있을 것으로 사료된다.
4에 나타내었다. 2주 투여군을 살펴보면 LPS로 처리하지 않은 경우 50 ㎎/㎏ b.w.과 500 ㎎/㎏ b.w. 농도에서 대조군과 유사한 분비을 보였고, LPS 첨가시에는 50 ㎎/㎏ b.w.와 500 ㎎/㎏ b.w.의 농도군 모두에서 1799.63 ± 14.26 pg/mL과 2420.56 ± 17.22 pg/mL으로 대조군 (1602.57 ± 12.33 pg/mL) 에비해 유의적으로 높은 TNF-a 분비량을 나타냈다.
이상의 결과로 생강 열수 추출물을 경구 투여한 마우스 복강 대식세포의 IL-1日, IL-6, TNF-a 생성이 LPS 자극에 의해 유의적으로 높게 나타나 세가지 사이토카인의상관관계/를 확인할 수 있었다. 이는 사이토카인이 생강 열수 추출물에 분비량에 영향을 받는것을 의미한다.
에서는 유의성은 보이지 않았다. 그러나 체중 kg당 500 mg의 생강 열수 추출물을 격일로 2주간 투여한 군에서 비장세포의 최대 증식 능을 보였다. 한편 활성 복강 대식세포에 의한 사이토카인 분비량을 측정한 결과 IL-16, IL-6, 그리고 TNF- a 모두 50 ㎎/㎏ b.
그러나 체중 kg당 500 mg의 생강 열수 추출물을 격일로 2주간 투여한 군에서 비장세포의 최대 증식 능을 보였다. 한편 활성 복강 대식세포에 의한 사이토카인 분비량을 측정한 결과 IL-16, IL-6, 그리고 TNF- a 모두 50 ㎎/㎏ b.w.과 500 ㎎/㎏ b.w. 농도에서 유의적으로 증가하는 경향을 보였다.
이상의 결과를 종합해 볼 때 추출물 경구 투여 후 마우스 비장세포 증식능과 사이토카인 분비능을 검색한 결과, 인체에서도 생강의 섭취를 통하여 면역세포, 특히 비장 세포의 증식과 대식세포의 활성화를 유도함으로써 체내 면역기능을 증강시킬 수 있는 가능성이 있음을 시사한다고 사료된다.

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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