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문제 정의
- 통해 녹용 추출물이 眞。2를 처리한 임파구 세포의 DNA 손상을 감소시키는 효과가 있었다는 선행연구& 를 기초로 하여 녹용추출물을 당뇨환자 및 대조군에게 일정 기간 보충하였을 때 혈압, 혈당 및 인체 임파구의 DNA 손상정도가 어떻게 변화하는지를 알아보려는 목적으로 시도되 었다.
제안 방법
- 4) 에 10분씩 담가 세척하는 과정을 3회 반복하여 slide를 건조시켰다. 20 “g/ml의 ethi dium bromide로 핵을 형광 염색하고 cover glass로 덮은 뒤 형광현미경 (Leica, Germany) 상에서 관찰하였다. CCD camera (Nikon, Japan)를 통해 보내진 각각의 세포핵 im aged comet image analyzing system (Kinetic Imaging, UK) 이 설치된 컴퓨터 상에서 분석하였다.
- 20 “g/ml의 ethi dium bromide로 핵을 형광 염색하고 cover glass로 덮은 뒤 형광현미경 (Leica, Germany) 상에서 관찰하였다. CCD camera (Nikon, Japan)를 통해 보내진 각각의 세포핵 im aged comet image analyzing system (Kinetic Imaging, UK) 이 설치된 컴퓨터 상에서 분석하였다. 임파구의 DNA 손상 정도는 핵으로부터 이동한 DNA 파편의 거리 (tail length, TL), tail내 함유된 DNA in tail (%) 및 tail length에 DNA%를 곱해준 tail moment (TM) 값을 측정하여 나타내었으며 각 대상자 당 2개의 slide를 만들어 각각 50개씩 총 100개의 임파구에서 DNA 손상정도를 측정하였다.
- 대상자의 일반적인 사항은 설문지를 사용하여 조사하였으며, 나이, 성별, 흡연여부, 영양제 복용 여부 등을 조사하였다 신장과 체중은 신장계 (수동식신장계, 삼화 KOREA) 와 체중계 (디지털체중계, CAS 150A, KOREA)를 이용하여 소수점 첫째자리까지 측정하였으며 이로 부터 체질량지수(BMI, body mass index, 체중 ((kg) / 신장 (m?))를 산출하였다. 혈압계 (sphygmomanometer, HICO, JAPAN) 를 이용하여 대상자들의 혈압을 측정하였으며 줄자를 이용하여 허리와 엉덩이둘레를 측정한 후 허리와 엉덩이 둘레비 (WHR, Waist/ Hip circumference ratio) 를 산출하였다.
- 실시하였다. 면담은 사전에 훈련받은 조사원들에 의해 실시되었으며, 대상자들의 분량을 회상하는데 도움을 주기위해 food model 및 사진으로 보는 음식의 눈 대중량을眄 제시하여 섭취한 모든 음식의 종류와 섭취량이 가능한 정확하게 조사하도록 하였다. 조사 결과는 한국영양학회 부설 영양 정보센터에서 제작한 CAN program 2.
- 식이섭취 조사는 녹용 추출물 섭취를 시작하기 전과 3주간의 섭취 후에 24시간 회상법을 이용하여 1대 1 면담법으로 실시하였다. 면담은 사전에 훈련받은 조사원들에 의해 실시되었으며, 대상자들의 분량을 회상하는데 도움을 주기위해 food model 및 사진으로 보는 음식의 눈 대중량을眄 제시하여 섭취한 모든 음식의 종류와 섭취량이 가능한 정확하게 조사하도록 하였다.
- 5 M NaCl, 100 mM Na2EDTA, 10 mM Tris) 에 사용 직전 1% Triton X—100와 10% Dimethyl sulfoxide를 섞은 후 slide를 담가 저온, 암실에서 1시간 동안 침지 시켜 DNA의 double strand를 풀어주었다. 용해가 끝난 slide 를 electrophoresis tank에 배열하고 냉장 보관하였던 전기영동 buffer (300 mM NaOH, 1 mM Na2EDTA, pH >13) 를 채워 40분 동안 unwinding시켜 DNA의 알칼리에 취약한 부위가 드러나게 한 후 25 V/300 ± 3 mA의 전압을 걸어 20분간 전기영동을 실시하였다. 전기영동이 끝난 후 0.
- 3주일간 수행되었다. 이들에게는 반 재 분량에 해당되는 녹용 37.5 g에 당귀 25 g, 생강 10 g, 대추 65 g을 혼합하여 만든 녹용 추출물을 2002년 7월 9일부터 2002년 7월 29일까지 하루 200 m씨 20일 동안 매일 섭취하도록 하였다. 당뇨환자의 평균 당뇨병력은 4년이었으며, 이 중 다섯 명이 당뇨약을 약 4년 3개월 동안 섭취하고 있었다.
- 임파구의 DNA 손상 정도는 핵으로부터 이동한 DNA 파편의 거리 (tail length, TL), tail내 함유된 DNA in tail (%) 및 tail length에 DNA%를 곱해준 tail moment (TM) 값을 측정하여 나타내었으며 각 대상자 당 2개의 slide를 만들어 각각 50개씩 총 100개의 임파구에서 DNA 손상정도를 측정하였다. 이모든 실험과정 및 슬라이드 관찰과정은 blind로 진행되었으며, 어느 대상자로부터 온 슬라이드인지 실험자가 모르도록 별도의 번호를 붙이어 수행하였다.
- 임파구 DNA 손상 측정을 위한 comet assay는 Singh 의 방법 ©을 수정, 보완하여 실시하였다. 신선한 전혈 70 “1 을 900 G PBS에 섞은 후 100 pl Histopaque 1077를사용해 임파구만을 분리하였다.
- CCD camera (Nikon, Japan)를 통해 보내진 각각의 세포핵 im aged comet image analyzing system (Kinetic Imaging, UK) 이 설치된 컴퓨터 상에서 분석하였다. 임파구의 DNA 손상 정도는 핵으로부터 이동한 DNA 파편의 거리 (tail length, TL), tail내 함유된 DNA in tail (%) 및 tail length에 DNA%를 곱해준 tail moment (TM) 값을 측정하여 나타내었으며 각 대상자 당 2개의 slide를 만들어 각각 50개씩 총 100개의 임파구에서 DNA 손상정도를 측정하였다. 이모든 실험과정 및 슬라이드 관찰과정은 blind로 진행되었으며, 어느 대상자로부터 온 슬라이드인지 실험자가 모르도록 별도의 번호를 붙이어 수행하였다.
- 면담은 사전에 훈련받은 조사원들에 의해 실시되었으며, 대상자들의 분량을 회상하는데 도움을 주기위해 food model 및 사진으로 보는 음식의 눈 대중량을眄 제시하여 섭취한 모든 음식의 종류와 섭취량이 가능한 정확하게 조사하도록 하였다. 조사 결과는 한국영양학회 부설 영양 정보센터에서 제작한 CAN program 2.0 version을 이용하여 1일 영양소 섭취량으로 환산하였다.
- 산출하였다. 혈압계 (sphygmomanometer, HICO, JAPAN) 를 이용하여 대상자들의 혈압을 측정하였으며 줄자를 이용하여 허리와 엉덩이둘레를 측정한 후 허리와 엉덩이 둘레비 (WHR, Waist/ Hip circumference ratio) 를 산출하였다.
대상 데이터
- 당뇨환자의 평균 당뇨병력은 4년이었으며, 이 중 다섯 명이 당뇨약을 약 4년 3개월 동안 섭취하고 있었다. 개인적인 사정으로 2차 채혈에 응하지 못한 당뇨환자군 한 명을 제외한 10명이 끝까지 연구를 수행하였다.
- 본 연구는 대전시에 거주하는 제 2 형 당뇨환자 (NIDDM) 중 본 실험에 자발적으로 참여한 성인 남녀 11명을 대상으로 3주일간 수행되었다. 이들에게는 반 재 분량에 해당되는 녹용 37.
데이터처리
- 0) 를 사용하여 처리하였다. 녹용 추출물 섭취 결과에서는 각 항목에 따라 백분율과 평균치 士 평균오차 (SE) 를 구하였고 녹용 음료 전 후의 비교는 Paired t-test를 통해 그 유의성을 검증하였다.
이론/모형
- 혈당은 비색법 (hexokinase)을 이용하여 chemistry autoanalyzer (ADVIA 1650, Japan)로 측정하였다. 5) 임파구 DNA 손상을 위한 comet assay
성능/효과
- 그러나 녹용 추출물 섭취 후 당뇨환자의 DNA 손상정도에는 바람직한 결과를 얻었다. Comet assay로 본 DNA 손상정도를 살펴보면 당뇨환자의 TL은 녹용 추출물 섭취 전 보다 녹용 추출물 섭취 후 54% 감소하였고, DNA in tafl (宛)은 19% 감소하였으며, TM은 23% 감소하였다. 이와 같은 결과는 녹용 추출물이 산화 스트레스 영향으로 높아진 당뇨환자의 DNA 손상을 감소시키는데 좋은 효과를 나타낸다는 것을 시사한다.
- 되었는지 살펴본 결과는 Table 3과 같다. 녹용 추출물 섭취 전 당뇨환자의 baseline 혈당 수치는 156.6 ± 14.3 mg/이이었는데 녹용 추출물 섭취 후 148.9 ± 14.1 mg/dl로 다소 감소하는 경향은 보였으나 통계적으로 유의적인 차이는 아니었다.
- 나타났다 (Table 4). 당뇨환자군의 평균 TL 값은 녹용 추출물 섭취 전 91.3 ± 2.72 “m에서 녹용 추출물 섭취 후 42.1 ± 2.09 “이로 54% 감소하였고, 평균 DNA in tail (%)은 녹용 추출물 섭취 전 37.61 ± 1.18에서 섭취 후 30.58 ± 2.68로 19% 감소하였으며, 평균 TM 값은 녹용 추출물 섭취 전 35.98 ± 2.02에서 녹용 추출물 섭취 후 27.59 ± 2.11 로 23% 감소하였다. 녹용 추출물 섭취 후 세 가지 지표로 살펴본 DNA 손상의 변화를 평균값이 아닌 각 개인의 값으로 표현한 결과는 Figs.
- 당뇨환자의 평균 연령은 49.6 ± 3.6세, 신장 및 체중은 각각 159.7 ± 2.8 cm, 64.4 ± 3.4 kg이었으며 이로부터 계산한 BMI는 25.7 ± 1.3, 그리고 WHR은 0.89 ± 0.02로 모두 정상범위에 있었다.
- Table 2과 같다. 대상자에게 3주 동안의 실험 기간을 통하여 실험 시작 전의 일상적인 식이 패턴을 유지하게 지도한 결과, 녹용추출물 투여실험 기간 동안 당뇨환자의 영양소 섭취량 및 항산화 비타민 섭취량에 차이가 나타나지 않았다.
- 이와 같은 결과는 Filler 등如이 당뇨환자의 혈압이 정상인보다 높았다고 보고한 것과 일치하는 결과였다. 대상자에게 녹용 추출물을 섭취시키기 전 (0 week)과 후 (3 weeks)의 수축기와 확장기 혈압의 변화를 본 결과, 3주 동안의 녹용 추출물 섭취로 인한 혈압의 변화는 유의적으로 나타나지 않았다 (Table 2).
- 6서제 2 형 당뇨 환자 10명을 대상으로 영양중재 연구를 수행하였다. 대상자에게 매일 200 ml씩 20일 동안 녹용 추출물을 보충한 결과, 녹용 추출물 섭취로 인한 대상자의 수축기 및 이완기 혈압 감소효과는 볼 수 없었다. 또 녹용 추출물 섭취 후 대상자의 혈당 강하효과도 나타나지 않았다.
- 1-3과 같다. 먼저 DNA 손상정도를 TL 값으로 본 경우, 녹용 추출물 섭취 후 감소하는 것으로 나타났다 (Fig. 1). 그러나 DNA in tail (%) 값과 TM 값의 경우, 10명의 대상자 중에서 3명정도가 녹용 추출물 섭취 후에도 섭취 전의 값을 유지하는 경향을 보였다 (Figs.
- 있다. 본 실험 결과, 녹용 추출물 섭취 전 당뇨 대상자들의 수축기 및 이완기 혈압은 132.5 ± 4.8와 89.5 ± 4.3로써 수축기와 이완기 혈압이 모두 높은 편이었다 (Table 3). 이와 같은 결과는 Filler 등如이 당뇨환자의 혈압이 정상인보다 높았다고 보고한 것과 일치하는 결과였다.
- 반면에 제 2 형 당뇨 환자에게 비타민 E (900 mg/day) 를 장기간 투여한 선행연구에서 혈당의 감소효과가 나타났으며严 박과 윤36>은 Aloe vera Linne 정제를 복용한지 1주일만에 당뇨환자의 혈당 이유의 하게 저하되었다고 보고하였다. 본 실험 결과, 단순히 혈당수치만을 측정하였을 때 녹용추출물에는 제 2 형 당뇨병 환자의 혈당을 낮추는 효과가 없는 것으로 나타났다. 앞으로 녹용 추출물의 혈당 저하 효과에 대해서는 공복 혈당을 측정하는 것 외에 당화 헤모글로빈 (glycosylated Hb) 등 더 다양한 지표를 가지고 장기적인 연구를 해 보아야 하리라고 본다.
- 본 연구에서 녹용 추출물의 섭취 후에 당뇨환자의 DNA 손상도가 감소하였는데 이것은 녹용에 함유되어 있는 여러 가지 약리작용 물질의 작용에 의한 것으로 생각된다. 그러나 본 연구에서는 녹용의 추출물을 사용한 것이므로 녹용의 어떤 성분이 DNA 손상 감소효과를 보이는지는 알 수 없었다.
- 본 연구에서는 당뇨환자의 높아진 DNA 손상이 녹용의 섭취로 인해 감소될 수 있을 것이라는 가정을 가지고 3주간의 녹용 추출물 섭취 전후 당뇨환자의 임파구 DNA 손상 정도의 변화를 DNA 손상 지표인 DNA in tail, tail length (TL) 및 tail moment (TM) 로 살펴본 결과, 녹용 추출물 섭취 후 당뇨환자의 DNA 손상이 유의적으로 감소된 것으로 나타났다 (Table 4). 당뇨환자군의 평균 TL 값은 녹용 추출물 섭취 전 91.
- Comet assay로 본 DNA 손상정도를 살펴보면 당뇨환자의 TL은 녹용 추출물 섭취 전 보다 녹용 추출물 섭취 후 54% 감소하였고, DNA in tafl (宛)은 19% 감소하였으며, TM은 23% 감소하였다. 이와 같은 결과는 녹용 추출물이 산화 스트레스 영향으로 높아진 당뇨환자의 DNA 손상을 감소시키는데 좋은 효과를 나타낸다는 것을 시사한다. 앞으로 당뇨환자의 DNA 손상 억제효과의 기전 또는 녹용 추출물 중 어떤 물질이 이런 효과를 나타내는지에 대한 연구가 더 진행되어야 하리라고 본다.
후속연구
- 앞으로는 녹용의 여러 가지 성분을 분리하여 어떤 물질이 DNA 손상 감소효과를 보이는지에 대한 연구 및 그기전에 관한 연구가 더 수행되어야 하리라고 생각된다. 나아가서 현재 우리나라 한방에서 널리 이용되는 녹용의 각종 생리활성 효과에 대한 과학적인 기능성 규명 연구가 부족하므로 녹용의 각 성분별 생리활성효과를 규명하는 연구가 다각도로 이루어져야 하겠다. 이와 함께 본 연구의 제한점으로 당뇨환자 대상자의 숫자가 너무 적은 것을 들 수 있으며 이는 앞으로 계속 보완되어야 하리라고 본다.
- 앞으로 각 지표간의 민감성에 대한 더 깊은 연구가 이루어질 필요가 있을 것이다.
- 이와 함께 본 연구의 제한점으로 당뇨환자 대상자의 숫자가 너무 적은 것을 들 수 있으며 이는 앞으로 계속 보완되어야 하리라고 본다. 앞으로 녹용 추출물 및 분리 정제된 성분을 사용하여 충분한 수의 환자를 대상자로 하는 장기적이고 체계적인 연구가 이루어져야 할 것으로 사료된다.
- 본 실험 결과, 단순히 혈당수치만을 측정하였을 때 녹용추출물에는 제 2 형 당뇨병 환자의 혈당을 낮추는 효과가 없는 것으로 나타났다. 앞으로 녹용 추출물의 혈당 저하 효과에 대해서는 공복 혈당을 측정하는 것 외에 당화 헤모글로빈 (glycosylated Hb) 등 더 다양한 지표를 가지고 장기적인 연구를 해 보아야 하리라고 본다.
- 이와 같은 결과는 녹용 추출물이 산화 스트레스 영향으로 높아진 당뇨환자의 DNA 손상을 감소시키는데 좋은 효과를 나타낸다는 것을 시사한다. 앞으로 당뇨환자의 DNA 손상 억제효과의 기전 또는 녹용 추출물 중 어떤 물질이 이런 효과를 나타내는지에 대한 연구가 더 진행되어야 하리라고 본다.
- 그러나 본 연구에서는 녹용의 추출물을 사용한 것이므로 녹용의 어떤 성분이 DNA 손상 감소효과를 보이는지는 알 수 없었다. 앞으로는 녹용의 여러 가지 성분을 분리하여 어떤 물질이 DNA 손상 감소효과를 보이는지에 대한 연구 및 그기전에 관한 연구가 더 수행되어야 하리라고 생각된다. 나아가서 현재 우리나라 한방에서 널리 이용되는 녹용의 각종 생리활성 효과에 대한 과학적인 기능성 규명 연구가 부족하므로 녹용의 각 성분별 생리활성효과를 규명하는 연구가 다각도로 이루어져야 하겠다.
- 나아가서 현재 우리나라 한방에서 널리 이용되는 녹용의 각종 생리활성 효과에 대한 과학적인 기능성 규명 연구가 부족하므로 녹용의 각 성분별 생리활성효과를 규명하는 연구가 다각도로 이루어져야 하겠다. 이와 함께 본 연구의 제한점으로 당뇨환자 대상자의 숫자가 너무 적은 것을 들 수 있으며 이는 앞으로 계속 보완되어야 하리라고 본다. 앞으로 녹용 추출물 및 분리 정제된 성분을 사용하여 충분한 수의 환자를 대상자로 하는 장기적이고 체계적인 연구가 이루어져야 할 것으로 사료된다.
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