[논문]돼지 난포란 유래 체외수정란 생산에 대한 제요인의 영향 IV. 체외발달 배양액의 종류와 배양액 교체가 체외발달에 미치는 영향

연성흠; 최선호; 조창연; 한만희; 손동수; 이규승

[국내논문] 돼지 난포란 유래 체외수정란 생산에 대한 제요인의 영향 IV. 체외발달 배양액의 종류와 배양액 교체가 체외발달에 미치는 영향
Effects of Some Factors on In Vitro Production of Embryos from Antral Follicle-Derived Porcine Oocytes IV. Effects of Development Media and Those Change on In Vitro Development 원문보기

韓國受精卵移植學會誌 = Korean journal of embryo transfer, v.19 no.3, 2004년, pp.275 - 282

연성흠 (농촌진흥청 축산연구소 가축유전자원시험장) , 최선호 (농촌진흥청 축산연구소 가축유전자원시험장) , 조창연 (농촌진흥청 축산연구소 가축유전자원시험장) , 한만희 (농촌진흥청 축산연구소 가축유전자원시험장) , 손동수 (농촌진흥청 축산연구소 가축유전자원시험장) , 이규승 (충남대학교 동물자원학부)

초록
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본 연구는 체외성숙/체외수정 유래의 돼지 난자를 이용하여 체외발달시 배양액의 종류나 교체에 따른 영향을 구명하고자 수행하였다. mNCSU-23에서 체외성숙시킨 다음 mTBM에서 체외수정시킨 난자를 목적에 따라 두 가지로 나누어 실험한 결과는 다음과 같다. 1. 체외성숙/체외수정란을 NCSU-23에서 배양액 교체없이 7일 동안 배양하거나 CZB에서 4일 배양한 다음 Pig-MEM으로 옮겨서 나머지 3일간 배양한 결과, 난분할율은 배양액간 차이를 보이지 않은 반면, 추정수정란대 배반포 발달을(P<0.05)과 분할란대 배반포 발달율은 NCSU-23에서 배양된 것이 유의적으로 높았다(P<0.01). 그러나 배 반포의 ICM 세포수, TE 세포수 및 총세포수에서는 모두 차이가 없었다. 2. 체외성숙/체외수정란를 NCSU-23에서 배양액 교체없이 7일 동안 배양하거나 체외배양 5일째에 신선한 동일 배양액이나 0.4％ BSA를 10％ FBS로 대체한 배양액(mNCSU-23F)으로 완전히 교체하여 배양한 결과, 난분할율, 배반포발달율, 배반포의 ICM 세포수, TE 세포수 및 총세포수 모두 처리간 유의적인 차이를 보이지 않았다. 결과적으로, NCSU-23이 CZB/Pig-MEM보다 체외성숙/체외수정 유래의 난자를 체외발달시키는데 적합한 것으로 사료되며, 체외발달배양 과정에 신선한 배양액이나 일부 변경된 배양액으로의 교체에 대해서는 더 많은 연구가 필요할 것으로 사료된다.

Abstract ▼ AI-Helper

This study was carried out to examine the effects of development media and those change on in vitro development (IVD) of porcine oocytes matured and fertilized in vitro. Putative embryos, which were matured in vitro in modified NCSU-23 (mNCSU-23) supplemented with 10％ porcine follicular fluid (pFF) and were fertilized in mTBM, were developed in vitro as the experimental scheme. The results are as follows. When porcine putative embryos were cultured in vitro in NCSU-23 or CZB/Pig-MEM, the percentage of oocytes cleaved was not different between two systems, but the percentage of blastocysts in NCSU-23 was significantly higher than in CZB/Pig-MEM (P<0.05). And when porcine putative embryos were cultured in vitro in NCSU-23 during 7 days with or without changing media at day 5, which was supplement with or without 10％ fetal bovine serum(FBS), the percentage of oocytes cleaved, blastocysts at day 6, and the cell number of ICM, TE and total of blastocysts at day 7 were not different among three treatments. As a result of this study, it is supposed that NCSU-23 be more favorable, to develop porcine embryos derived from IVM/IVF, than CZB/Pig-MEM, but that demonstration on the effects of changing medium with fresh one stand in need of the more experiments.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구는 돼지 수정란의 체외발달에 사용되고 있는 몇 가지 배양액 중에서 체외수정란 생산체계에 적합한 배양액을 선발하고, 선발된 배양액을 이용하여 체내의 환경변화를 모사하는 배양시스템을 개발하기 위하여 실시하였다.

제안 방법

체외수정이 완료된 추정수정 란은 체외 발달 배 양액으로 3회 세척한 다음 4-well dish(Nunc, Denmark)의 500 yl 체외발달 배양액에 well당 40개 내외씩 옮겨 넣은 다음, 39℃, 5% CO2 및 포화습도의 배양기 내에서 7일 동안 배양하여 체외발달시켰는데, 그 중 일부는 체외배양 개시 96시간(4일) 전후에 실험 목적에 따른 배양액으로 교체한 다음 배양을 계속하였다. 난할율은 체외배 양 개시 후 44시 간에, 배반포 발달 율은 체외배양 개시 후 144시간에 조사했다.
첫 번째 실험은 NCSU-23과 CZB/Pig-MEM이 체외수정란 생산에 미치는 영향을 구명하기 위해 체외성숙/체외수정시킨 난자를 NCSU-23에서 배양액 교체없이 7일 동안 배양하는 처리와 CZB에서 4일 동안 배 양한 다음 Pig-MEM으로 옮겨서 나머지 3일간 배양하는 처리를 두고 수행했다. 두 번째 실험은 체외배양 후반기에 FBS 첨가효과를 구명하기 위해 체외성숙/체외수정시킨 난자를 NCSU23에서 배양액 교체없이 7일 동안 배양하는 처리와 체외배양 5일째에 같은 배양액으로 교체하여 배양하는 처리 및 NCSU-23의 0.4% BSA를 10% FBS로 대체한 배양액(mNCSU-23F)으로 교체하여 배양하는 처리를 두고 수행했다.
또한 아미노산와 insulin을 첨가한 NCSU-23（mNCSU-23）에서 1 ~2세포기의 체내 수정란과 체외 수정란을 4일간 배양하고, 같은 배양액이나 여기에 다시 FCS를첨가한 NCSU-23 （mNCSU-23F）으로 교체 하여 4일간 추가 배양한 결과, 체내 수정란과 체외 수정란 모두 처리간 배반포 발달율에서 유의적인 차이가 없었다는 Koo 등（1997）의 보고와도 같은 결과였다. 여기서 비교한 두 보고는 배양후기 FBS의 첨가가 탈출 배반포의 증가를 가져왔다고 하였으나 본 실험에서는 수정종료 7일후에 확장배반포기의 수정란을 분별염색하여 세포수 조사에 활용했기 때문에 배반포의 투명대 탈출을 조사하지 않았지만, 염색을 생략한 일부 반복에서 탈출 배반포를 관찰할 수 있었는데 그것들은 모두 FBS를 첨가한 처리의 것이었다(자료는 제시하지 않음).
첫 번째 실험은 NCSU-23과 CZB/Pig-MEM이 체외수정란 생산에 미치는 영향을 구명하기 위해 체외성숙/체외수정시킨 난자를 NCSU-23에서 배양액 교체없이 7일 동안 배양하는 처리와 CZB에서 4일 동안 배 양한 다음 Pig-MEM으로 옮겨서 나머지 3일간 배양하는 처리를 두고 수행했다. 두 번째 실험은 체외배양 후반기에 FBS 첨가효과를 구명하기 위해 체외성숙/체외수정시킨 난자를 NCSU23에서 배양액 교체없이 7일 동안 배양하는 처리와 체외배양 5일째에 같은 배양액으로 교체하여 배양하는 처리 및 NCSU-23의 0.
4% BSA(Sigma, Fraction V)가 함유된 NCSU-23(Petters and Wells, 1993) 또는 CZB/PigMEM (Pollard 등, 1995)을 사용했다. 체외수정이 완료된 추정수정 란은 체외 발달 배 양액으로 3회 세척한 다음 4-well dish(Nunc, Denmark)의 500 yl 체외발달 배양액에 well당 40개 내외씩 옮겨 넣은 다음, 39℃, 5% CO2 및 포화습도의 배양기 내에서 7일 동안 배양하여 체외발달시켰는데, 그 중 일부는 체외배양 개시 96시간(4일) 전후에 실험 목적에 따른 배양액으로 교체한 다음 배양을 계속하였다. 난할율은 체외배 양 개시 후 44시 간에, 배반포 발달 율은 체외배양 개시 후 144시간에 조사했다.

대상 데이터

체외성숙/체외수정란의 발달배양에는 실험 목적에 따라 0.4% BSA(Sigma, Fraction V)가 함유된 NCSU-23(Petters and Wells, 1993) 또는 CZB/PigMEM (Pollard 등, 1995)을 사용했다. 체외수정이 완료된 추정수정 란은 체외 발달 배 양액으로 3회 세척한 다음 4-well dish(Nunc, Denmark)의 500 yl 체외발달 배양액에 well당 40개 내외씩 옮겨 넣은 다음, 39℃, 5% CO2 및 포화습도의 배양기 내에서 7일 동안 배양하여 체외발달시켰는데, 그 중 일부는 체외배양 개시 96시간(4일) 전후에 실험 목적에 따른 배양액으로 교체한 다음 배양을 계속하였다.

데이터처리

본 연구에서는 각 실험별로 처리당 4회 이상 반복 시험을 수행했으며, 조사된 성적은 실험계획에 따라 검정 또는 분산분석(ANOVA)을 실시한 다음, 유의성이 인정된 것에 대해서는 LSD에 의하여 처리간 차이를 구분했다.

성능/효과

2. 3.7, 4.8개로 동일 배 양액 교체 가 FBS 첨가액 교체보다 적은 경향을 보였으나 유의적인 차이는 아니 었고, TE 세포수는 28.2%（배 양액비교체）~33.1개 （FBS 첨가액 교체）, 총세포수는 32.3개（동일배양액 교체）~37.9개（FBS 첨가액 교체）로 모두 처리간 유의적인 차이를 나타내지 않았다.
4% BSA를 10% FBS로 대체한 배양액（FBS 첨가액 교체）으로 완전히 교체하여 배양한 결과는 Table 3 및 Table 4와 같다. 분할란대 배반포발달율은 17.5%（동일배양액 교체）~23.4%（FBS 첨가액 교체）, 추정수정란대 배반포 발달율은 각각 8.6%（동일배양액 교체）~11.2%（FBS 첨가액 교체）로 처리간에 유의적인 차이를 나타내지 않았다. 또 배반포의 ICM 세포수는 각각 4.

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연성흠, 최선호, 김종대, 손동수, 한만희, 이규승. 2004b. 돼지 난포란 유래 체외수정란 생산에 대한 제요인의 영향. Ⅰ. 체외성숙, 체외수정, 체외발달에 대한 체외성숙 배양액의 영향. 한국수정란이식학회지, 19:165-172

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표제어: PCR

동의어: Packet Collision Rate

용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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