선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 본 연구의 MIT assay결과에서 나타나듯이 HQ?에서는 40%의 세포 생존률을 보이던 것이 DF-100 첨가농도에 따라 세포 생존률이 높아진 것은 naringin의 역할인 것으로 보여진다. HQ2는 여러 가지 세포형태에서 적극적으로 apoptosis를 유도하는 것으로 보고 되었는데 '디 본 논문은 apoptosis를 DNA staining을 한 핵 형태의 변화에 의해 조사하였다. 또한 산화된 DNA 손상은 Commet assay를 통하여 측정하였는데 이는 DNA 에 나타나는 꼬리 (Tail)에 따라 환산한다.
가설 설정
- The cells were stained with 5pM H33342. A: Nuclear morphological change in lOOji M HQHnduced apoptosis detected by fluorescene microscopy. x400.
제안 방법
- Clone 주에 DF-100을 농도별로 동시처리 후 24시간 뒤에 Tsuda et al., "이에 의해 개발된comet assay 를 통하여 DNA 이동 거리를 수치로 환산하였다.
- Clone 주에 H2O2를 농도별로 처리한 후 DF -100을 첨가하여 24시간 뒤에 comet assay 방법을 통하여 DNA 이동거리를 환산하였다. 즉 꼬리로 표시되는 DNA 양은 다음과 같다.
- 관찰하였다. Clone주를 25cm2 Flask에 배양하여 DF-100의 주성분인 nvrmgg을 농도별로 처리한 후 세포를 수확하여 냉장 보관된 70% 에탄을로 고정하여 2gg/成 의 Hoechst 33342 용액으로 형광 염색하여 형광현미경 400배에서 관찰하여 apoptosis의 형태학적 특징을 나타낸 세포를 촬영하였다.
- Hoe아ist 33342(Sigma, USA)로 형광 염색하여 세포의 형태학적 변화를 형광현미경으로 관찰하였다. Clone주를 25cm2 Flask에 배양하여 DF-100의 주성분인 nvrmgg을 농도별로 처리한 후 세포를 수확하여 냉장 보관된 70% 에탄을로 고정하여 2gg/成 의 Hoechst 33342 용액으로 형광 염색하여 형광현미경 400배에서 관찰하여 apoptosis의 형태학적 특징을 나타낸 세포를 촬영하였다.
- 결막세포를 96-well microtiter plate에 세포 농도 5x106 cells/诫로 조절하여 100以씩 well에 넣은 다음 H2O2 및 DF-100을 농도별로 동시처리 한 다음 24시간 배양하였다. LDH 활성은 기질 pyruvate가 lactate로 감소되는 정도를 조사하여 측정하였다. 이 감소는 reduced NAD 티가 산화되고, 340nm 에서 최대 흡광도를 나타낸다.
- 억제 효과를 관찰하였다. ROS의 양은 형광 probe인 DDF-DA을 사용하여 측정하였다. 배양액에 DCF-DA(2, 7-dichlorofulorescein diacetate) 를 well 당 25㎛로 처리하여 15분간 배양한 후 DF-100과 HK》를 처리하였다.
- 광학 현미경적 관찰을 위하여 Clone주를 96w이1 plate에 분주하여 24시간 배양 후 g 및 DF -100을 농도별로 동시 처리한 후 24시간 동안 배양한 다음 도립위상차 현미경(Nickon, 일본)으로 관찰하여 세포 형태를 사진촬영하였다.
- Clone 주에 HQ? 및 DF-100을 농도별로 동시처리 후 30분후에 형광 측정 방법을 통하여 세포 내 산소활성종 억제 효과를 관찰하였다. ROS의 양은 형광 probe인 DDF-DA을 사용하여 측정하였다.
- 배양액에 DCF-DA(2, 7-dichlorofulorescein diacetate) 를 well 당 25㎛로 처리하여 15분간 배양한 후 DF-100과 HK》를 처리하였다. 반웅 후 형성된 세포 내 과산화물은 excitation 파장 485nm, emission 파장 530nm 에서 fluorescence를 측정하였다.
- ROS의 양은 형광 probe인 DDF-DA을 사용하여 측정하였다. 배양액에 DCF-DA(2, 7-dichlorofulorescein diacetate) 를 well 당 25㎛로 처리하여 15분간 배양한 후 DF-100과 HK》를 처리하였다. 반웅 후 형성된 세포 내 과산화물은 excitation 파장 485nm, emission 파장 530nm 에서 fluorescence를 측정하였다.
- Clone l-5c-4 세포를 5xl(k cells/세포 수로 계수 한 다음 96~well plate에 100〃씩 well에 넣은 다음 DF-100을 농도별로 처리한 후 24시간 배양하였다. 배양액을 교환한 후 MTT labeling reagent에 electron coupling reagent를 첨가하여 준비한 MTT labeling mixture 를 각 well 당 10成씩(최종농도 0.5mg/m£) 4시간 처리한 후 550nm 파장에서 흡광도를 이용하여 DF-100 자체의 세포독성을 조사하였다.
- )을 이용하여 사용 방법에 따라 처리한 후 570nm에서 홉광도를 측정하였다. 세포막 손상에 의해 배지로 유출된 LDH량을 측정하여 세포독성을 확인하였다. 결막세포를 96-well microtiter plate에 세포 농도 5x106 cells/诫로 조절하여 100以씩 well에 넣은 다음 H2O2 및 DF-100을 농도별로 동시처리 한 다음 24시간 배양하였다.
- 세포질 내의 효소인 lactate dehydrogenase가 세포막의 손상에 의해 배양액으로 유출되는 정도로 세포 독성을 비교하였다. Clone 주에 H2O2 및 DF-100 을 농도별로 동시 처리 후 24시간 뒤 LDH assay를 한 결과 H2O2는 대조군보다 3.
대상 데이터
- U-5C-4 세포를 사용하였다. Clone l-5c-4 세포는 한국 세포주 은행으로부터 분양받아 사용하였다. RPM1640(GIBCO, USA) 배양액에 10%의 fetal bovine serum(FBS;CAMBREX, Co.
- 백금판은 3개를 사용하였으며 각 백금판으로 4회씩 H2O2를 중화하여 4개의 시료액으로 만들어 3 회 반복 실험하였다
- 본 연구에 사용된 세포는 사람의 결막세포인 clone U-5C-4 세포를 사용하였다. Clone l-5c-4 세포는 한국 세포주 은행으로부터 분양받아 사용하였다.
- 친연보존제는 자몽 씨 추출물 100% 원액을 10-3, 3x10’ , 5妇0그 로 희석하여 사용하였다. 자몽 씨 추출물의 주성분은 나린진(Naringin)으로서 자몽 종자 추출물의 항미생물 효과를 가지는 성분으로 비타민 P라고 알려진 후라보노이드라는 성분이다.
이론/모형
- LD니는 Sinensky 등이 의 방법에 따라 LDH kit(INWHA Pharm. Co.)을 이용하여 사용 방법에 따라 처리한 후 570nm에서 홉광도를 측정하였다. 세포막 손상에 의해 배지로 유출된 LDH량을 측정하여 세포독성을 확인하였다.
성능/효과
- Clone 주에 버2。2 및 DF-100을 농도별로 동시처리 후 30분 후에 형광 측정 방법을 통하여 관찰한 결과 세포 내 산소 활성 종 억제 효과가 나타났다(Fig.3).
- H2O2를 이용한 소독은 중화를 시작한 직후에만 일어나기 때문에 acanthamoebal cyst 에 대한 소독 효과가 낮다고 제시하였는데이 6시간 동안 중화를 시키는 것은 HQ2의 농도를 낮추기 위함인데 상대적으로 소독 효과가 감소한다고 하였다. 본 연구는 중화한 任。2를 DFJ00과 비교하여 세포독성과 Apoptosis를 평가하였는데, HQz에 의해 유도된 독성과 apoptosis는 mouse leukemia P388 세포에서도 자몽씨 추출물의 주성분인 naringin이 이를 억제시키는 것으로 발표하였다예. 본 연구의 MIT assay결과에서 나타나듯이 HQ?에서는 40%의 세포 생존률을 보이던 것이 DF-100 첨가농도에 따라 세포 생존률이 높아진 것은 naringin의 역할인 것으로 보여진다.
- 독성을 비교하였다. Clone 주에 H2O2 및 DF-100 을 농도별로 동시 처리 후 24시간 뒤 LDH assay를 한 결과 H2O2는 대조군보다 3.98배 정도의 유출량이 나타났으며, HQz에 DF-100을 농도별 넣은 후 유줄량이 감소되었으며 특히 5xl0_2는 대조군보다 1.8 배 유출정도로 나타났다(Fig.2).
- Clone 주에 Hz Ozz 및 DF-100을 농도별로 동시 처리하여 24시간 뒤 비교한 결과 더 202는 40%의 세포생존률을 나타내었고, HQ에 DF-100, 5x10.2 처리 후 세포 생존률이 90% 이상 증가되는 양상으로 나타났다 (Fig.1).
- naringine 자몽씨 추출물 내 bioflavonoids의 주요 성분으로써 음식물로서도 간단히 취할 수 있다. 결론적으로 합성보존제에 의한 부작용 즉 각 결막의 변화, 결막의 부종, 분비물의 증가, 그리고 각막의 부종. 미란 등을 최소화 시킬 수 있는 천연보존제인 자몽 씨 추출물을 contact lens의 새로운 보존제로서 제시하는 바이며 천연 보존제의개발은 미래의 보존제로 대체되어 가까운 시일 내에 개발을 하여야 할 것으로 사료된다.
- 기준량의 각종 합성보존제는 충혈, 이물감 자극감 을 동반하여 결막충혈 통중을 유발하지만 각막에는 영향이 없는 것으로 여러 보고서에 나타나 있다. 그러나 본연구 결과로 미루어볼 때 장기간 사용 시 각막 내피 손상에도 많은 영향을 주리라 사료된다. 이에 천연성분을 첨가한 보존제를 오랜 기간 임상에 사용한 결과와 합성보존제의 결과를 연구 비교 검토하여 할 필요성이 있으며 또한 미래 보존제로는 반드시 천연보존제로 대체하여야 할 것으로 사료된다.
- 배양된 ckme 주에 자몽씨추출물의 주성분인 naringin 을 농도별로 처리한 후 24시간 후에 Hoechst 33342로 형광 염색하여 Apoptosis에서 특징적으로 보여지는 세포핵의 분 절화 현상을 x400 배로 관찰한 결과 세포사멸이 일어나 둥근모양으로 쪼개어져서 배양액에 떠 있는 서포들을 관찰할 수 있있다 .
- '기 . 본 논문은 합성보존제로 널리 사용되는 3%의 H26와천연보존제인 자몽씨 추출물을 이용하여 비교 분석하였으며 또한 많은 부작용을 초래하는 합성보존제 대체용으로 미래에는 인체에 무독한 천연 보존제의개발이 시급한 것으로 나타났다.
- 최근 naringin 은 superoxide dismutase(SOD)와 catalase activity 증가에 의해 antioxidative capacity-3- 조절하는 중요한 역할을 맡고 있는 것으로 보고되고 있다네. 본 연구에서도 naringine HQa에 의해 유도되는 apoptosis 나 세포독성 그리고 DNA 손상을 현저하게 방지해주는 것으로 조사되었다. naringine 자몽씨 추출물 내 bioflavonoids의 주요 성분으로써 음식물로서도 간단히 취할 수 있다.
- 또한 세포 형태에 있어서도 H2O2는 적극적으로 apoptosis를유도하였는데 DF-100을 첨가 시 또한 세포가 원상태로 회복되는 양상을 나타내었다. 이는 DF-100의 주성분인 naringine 세포독성뿐만 아니라 DNA 손상을 현저하게 방지해주는 것으로 본연구 결과 나타났다. 기준량의 각종 합성보존제는 충혈, 이물감 자극감 을 동반하여 결막충혈 통중을 유발하지만 각막에는 영향이 없는 것으로 여러 보고서에 나타나 있다.
- 이처럼 많이 사용하는 할세척액이 갖추어야 할 기본 요건으로서 Remington's Pharmaceutical Sciences'비에서는 다음과 같은 조건들을 들고 있다. 첫째 광범위 영역의 항균작용 둘째 착용의 신속성과 지속성, 셋째 알러지 반응이나 자극 및 독성이 없고 넷째 포함된 다른 화합물 상호 간의 화합적으로 안정된 상태를 유지하며, 다섯째 화합물이 잘 용해되어야 한다.
후속연구
- 결론적으로 합성보존제에 의한 부작용 즉 각 결막의 변화, 결막의 부종, 분비물의 증가, 그리고 각막의 부종. 미란 등을 최소화 시킬 수 있는 천연보존제인 자몽 씨 추출물을 contact lens의 새로운 보존제로서 제시하는 바이며 천연 보존제의개발은 미래의 보존제로 대체되어 가까운 시일 내에 개발을 하여야 할 것으로 사료된다.
- 그러나 본연구 결과로 미루어볼 때 장기간 사용 시 각막 내피 손상에도 많은 영향을 주리라 사료된다. 이에 천연성분을 첨가한 보존제를 오랜 기간 임상에 사용한 결과와 합성보존제의 결과를 연구 비교 검토하여 할 필요성이 있으며 또한 미래 보존제로는 반드시 천연보존제로 대체하여야 할 것으로 사료된다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.