선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- caupo의 난할형식 이 4세포기의 할구배열상태를 근거로 나선형 난할(spiral cleavage)인 것으로. 보고된 바(Gould-Somer。, 1975; Newby, 1986) 있으나 본 연구에서는 U. umcifscius 수정란에서 관찰되는 일련의 나선형 난할과정과 단계를 유사분열 기구의 행위와 연관하여 서슽하는 한편, 적어도 16세포기까지는 등할, 전할한다는 사실을 밝히므로서, 이 동물의 난할형식이 나선형 난할의 전형에서 벗어난다는것을 보고하고자 하였다.
가설 설정
- 6, 7: The 1st meridional cleavage was equal and holoblastic, began at animal pole foiming the intermediated heart-shape of egg from one to two cell stages. P: Polar body.
제안 방법
- 때로 유사분열 장치를 관찰하기 위한 재료는 항체의 반응 효율을 위해서 2〜5°C, 2%TritonX-100에서 12시간 처리하여 수정막을 제거한 후 PBS로 세척하였다(Bestor, 1981). 제1차 항체는 monoclonal anti- mouse-a-; -0-tubulin IgGl isotype(Sigma)을 사용하였고 PBS와 1 : 200으로 회석하여 37P에서 1시간 처리하였다 일차 항체를 goat anti-mouse IgG-HTC로 37。( 습기상자에서 1시간 처리하여 유사분열 장치를 형광 염색하였다. 시료는 glycergd(Dako)에 포매한 후 레이저 공초점 현미경(MPC-1024, Bio-Rad) 으로 Kr-Ar dual laser을 사용하여 관찰하였다.
- 8)으로 제조한 2% 파라포름알뎨히드(parformaldehyde)와 0.5% 글루타르알뎨히드 흔합액 에 고정 한 후, 미세 조작기를 이용하여 제1차 난할 중인 난자를 선별하였고, 동일 고정 액으로 4, C에서 12시간 동안 전고정한 후 같은 완충 용액으로 수회 세척하였다 동일 인산완충용액에 회석된 1% 0$。4에서 2시간 동안 후고정을 하였다 시료를 세척한 후 알코올 능도순으로 각각 15분간 탈수하였으며, propyleneoxide와 Epon 812(1 : 1) 혼합믈에 12시간 치환하고 포매하였다. 박절편(1 ㎛)은 toludine blue로 염색하였고, 초박절편(70〜80 nm)은 uranyl acetate와 lead citrate에 염색하여 JEOL 1010B 전자현미경으로 80kV에서 관찰하였다.
- 난할구(cleavage furrow)를 전자현미경으로 관찰하기 위해서는 다옴과 같은 방법을 사용하였다 수정란 을 0.1 M 인산완충용액(0.1 M, pH 6.8)으로 제조한 2% 파라포름알뎨히드(parformaldehyde)와 0.5% 글루타르알뎨히드 흔합액 에 고정 한 후, 미세 조작기를 이용하여 제1차 난할 중인 난자를 선별하였고, 동일 고정 액으로 4, C에서 12시간 동안 전고정한 후 같은 완충 용액으로 수회 세척하였다 동일 인산완충용액에 회석된 1% 0$。4에서 2시간 동안 후고정을 하였다 시료를 세척한 후 알코올 능도순으로 각각 15분간 탈수하였으며, propyleneoxide와 Epon 812(1 : 1) 혼합믈에 12시간 치환하고 포매하였다. 박절편(1 ㎛)은 toludine blue로 염색하였고, 초박절편(70〜80 nm)은 uranyl acetate와 lead citrate에 염색하여 JEOL 1010B 전자현미경으로 80kV에서 관찰하였다.
- 인공수정 후 수정란에서 최초의 변화는 수정구의 출현이었으므로 이를 광학현미경으로 확인한 후 과잉 정자를 제거하였다. 미수정란 을 대조군으로 사용하였으며, 실험 군은 수정 지후부터 초기에는 5분 간격으로, 그 후에는 임의의 시간에 재료를 -20°C 메타노옱(methanol)에 고정하여 면역 형광 현미경 관찰에 사용하였고 전자현미경 관찰을 위한 재료는 아래와 같이 별도로 고정하였다
- 5% 글루타르알뎨히드 흔합액 에 고정 한 후, 미세 조작기를 이용하여 제1차 난할 중인 난자를 선별하였고, 동일 고정 액으로 4, C에서 12시간 동안 전고정한 후 같은 완충 용액으로 수회 세척하였다 동일 인산완충용액에 회석된 1% 0$。4에서 2시간 동안 후고정을 하였다 시료를 세척한 후 알코올 능도순으로 각각 15분간 탈수하였으며, propyleneoxide와 Epon 812(1 : 1) 혼합믈에 12시간 치환하고 포매하였다. 박절편(1 ㎛)은 toludine blue로 염색하였고, 초박절편(70〜80 nm)은 uranyl acetate와 lead citrate에 염색하여 JEOL 1010B 전자현미경으로 80kV에서 관찰하였다.
- 제1차 항체는 monoclonal anti- mouse-a-; -0-tubulin IgGl isotype(Sigma)을 사용하였고 PBS와 1 : 200으로 회석하여 37P에서 1시간 처리하였다 일차 항체를 goat anti-mouse IgG-HTC로 37。( 습기상자에서 1시간 처리하여 유사분열 장치를 형광 염색하였다. 시료는 glycergd(Dako)에 포매한 후 레이저 공초점 현미경(MPC-1024, Bio-Rad) 으로 Kr-Ar dual laser을 사용하여 관찰하였다.
- 자연해수(염분도 20%。, pH 8.1)는 millipore(0.45 ㎛)로 여과하였으며 발생 기간동안 해수의 온도는 16 〜 18°C로 유지하였다 성숙 난자는 나일론 망(nylon mesh; 지경 100 ㎛)로 여과하여 선별하였고 인공수정은 난자 : 해수 = 1 :100으로 회석하고, 해수 : 정자 = 400: 1로 회석되도록 조절하였다. 인공수정 후 수정란에서 최초의 변화는 수정구의 출현이었으므로 이를 광학현미경으로 확인한 후 과잉 정자를 제거하였다.
- 때로 유사분열 장치를 관찰하기 위한 재료는 항체의 반응 효율을 위해서 2〜5°C, 2%TritonX-100에서 12시간 처리하여 수정막을 제거한 후 PBS로 세척하였다(Bestor, 1981). 제1차 항체는 monoclonal anti- mouse-a-; -0-tubulin IgGl isotype(Sigma)을 사용하였고 PBS와 1 : 200으로 회석하여 37P에서 1시간 처리하였다 일차 항체를 goat anti-mouse IgG-HTC로 37。( 습기상자에서 1시간 처리하여 유사분열 장치를 형광 염색하였다. 시료는 glycergd(Dako)에 포매한 후 레이저 공초점 현미경(MPC-1024, Bio-Rad) 으로 Kr-Ar dual laser을 사용하여 관찰하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용한 개불(U. umcincSus)^ 생식 주기에 서해안 일대의 개펄에서 채집하였다, 채취한 정자와 난자들이 실험에 사용하기 전까지는 각각 정소와 난소에 보관되었고, 인공수정의 여러 과정은 난자와 정자의 성숙도에 크게 의존하므로 수정과정에는 원칙적으로 각 암수한 개체에서 분리한 정자와 난자만 을 사용하였다
성능/효과
- U. I"疝如渤s의 난자는 등황란이 드로 동믈극, 식물극을 구별하는 것이 어려을 수도 있으나 약하지만 핵의 편재성이 있고 심장형 수정란(heart-shaped egg) 의난할구(cleavage furrow)는 동물극에 생성된다는 것과, 제 1차 난할의 경우 유사분열 기구는 동물극-식물극면에 지각으로 발생한다는 것이 일반적인 경우이며(Okazaki; 1975; Von Ledebut-Viliger; 1975), 극체가 돌춭하는 반구가 난할구 생성 반구에 대옹하는 극이었다는 사실 등으로 동물극, 식물극올을 구별하는 것 이가 농하였다 U、切疝선Es 의 제1차 난할과정에서 극피 동물에서 보고된 수축환(contractile ring; Asnes, 1979; Schroeder, 1987)과 유사한 구조가 관찰되었으나, 본연구에서는 이를 확인하는 것이 가능하지 않았다 전자현미경으로 관찰한 U. umcmctus 초기 수정란의 난할구는 세포질 속으로 침루해 있었으며 미세 막 성구 조들의 연속 융합으로 할구 사이를 경계짓는 것으로 관찰되었다
- 4세포기의 유사분열 기구의 배열은 생성시와 실제난할시의 배열이 상이한 것으로 관찰되었고, 이는 위의 4할구 배열과 관련되는 것으로 볼 수 있었다, 4세포기의 유사분열 기구가 출현 할 때는 동-식물극 축에 대하여 지각으로, 그리고 각 대응 할구에서는 서로 평행하게 출현하였으나(Fig. 23), 난할시에는 유사분열 기구들이 동-식물극 축에 대하여 사선 배 열하는 것 을 볼 수 있었다(Fig. 24). 이 유사분열 기구의 선회 정도를 본 연구에서는 확인 할 수 없었으나 8세포기의 할구배열로 보아서 45° 내외인 것으로 추측할 수 있었다 이 유사분열 기구의 최종 배열로서 제3차 난할은수평할이 가능할 것으로 보았으며, 이때 유사분열 기구의 한쪽 극이 식물극을 향하는 방향이 좌측이었으므로 미래의 할구 배열은 좌선성 임을 볼 수 있었다
- 8세포기의 난할, 즉 4차 난할 결과로서 유사한 크기의 할구들이 생산되는 것으로 보아서 등할인 것을 관찰할 수는 있었으나(Fig. 14), 경할 혹은 수평할의 여부는 관찰이 어려웠다, 16세포기 이후 포배(blastula) 단계의 할구는 크기에서 다소 차이가 있는 것으로 보이나, 이는 난할시기의 차이로 인한 것이며 할구들이 부 등 할 한 결과로는 볼 수 없었으며, 부등할에서 볼 수 있는 대할구, 중할구, 소할구 동을 관찰할 수는 없었다(Fig. 15). 이후의 배(embryo)는 섬모 포배기(ciliated blastula; Fig.
- 6). Cleavage streak 이 식물극을 향하여 신장됨에 따라, 난할구(cleavage furrow)가 형성되는 것을 볼 수 있었다. 동물극에서 난할구의 함입이 시작하는 시기에 식물극은 약하게 돌춭하였으며, 돌출부는 극체근접부인 것을 물 수 있었고 이로서 위와 같은 심장형 수정란이 형성되는 것을 물 수 있었다.
- 제2극체 생성될 때, 제1 극체도 감수분열하는 증거가 있으므로 극체의 총수는 3개인 것으로 보였다. GVBD이후에는 동물극과 식물극 을 구별되지 않았으나 곧 1극체가 출현하였고 이에대옹하는 반구(hemisphere)코부터 난할구가 발생하였으므로, 난할구 발생이 시작되 는 반구가 동물극, 그리고 극체가 돌춭하는 식물극인 것으로 구별할 수 있었다(Figs. 6, 7).
- U, unicinctus의 체액 에서 분리한 난자의 형 태는 구형(130〜 150 ㎛ in diam.)이 었으나 난소에서 분리한 난자는 난악의 함입(indentation)과 핵악 함입 부(invagi nation) 을 갖는 것이 다수였다(Fig. 1). 난소에서 분리한 난자는 그러나 해수와 접촉하거나 수정되면 구형 을 회복하였고, 이후 체액에서 분리한 난자와 구별할 수 없었다.
- i"疝선无渤s의 경우는 제3차 난할이 등할이므로 연체동물의 난할형식과는 차이가 있는 것으로 볼 수 있었다 제3차 난할이 부등할인 것은 식물극 반구와 동물극 반구에 포함된 난황물질의 축적 정도와 이로 인한 유사분열 기구의 생성 장소 및 행위에 의해 결정되며, 등황란, 단황란 등 난자의 종류에 따라 상이하나 부등할이 지속되면 결과에서 대할구, 중할구, 소할구 등이 생산될 수 있다(Schroeder, 1973; Del-Pino, 1989). U. umcinctus와 같이 제 3六丫 난할이 수평할이며 동시에 등할, 전할인 예는 지금까지 알려진 spiralian에서는 찾기 어려웠고 방사대칭 난할과 좌우대칭 난할인 극피동물과 강장동물에서 볼 수 있는 륵징으로 알려져 있다 16세포기 이후의 난할 단계에서 할구 크기에 다소의 차이를 볼 수 있는 경우는 있었으나, 이는 각 할구의 난할 시점의 차이인 것으로 볼 수 있었다 이와 같이 U.umcinctus의 난할에서 룩이 한 사실은 등할, 전할이라는 점에서는 극피동물이나 강장동물과 유사하였고, 나선형 난할이라는 점에서는 환형동물 및 일부 연체동물 등 sgim과 유사하다는 것이었으며, 일종의 변형된 나선형 난할형식을 갖고 있는 것으로 생각되었다 한편, 이는 이 동물의 체제적 룩성과 연계될 수 있을 것으로 사료되었다.
- 와 같이 일부 할구들이 다른 할구에 비교하여 융기한 것으로 관찰된 바 있었으며, 또한 할구의 좌선성 훅은 우선성 사선 배열이 2세포기에도 있는 것으로 관찰되 었다. U. 球Z仍没必의 난할기 할구배열에 좌, 우선성 사선배 열한다는 것은 룩히 8세포기 할구 배열에서 볼 수 있었으며, 이로서 난할 형식이나 선형이라는 것을 알 수 있었다. 따라서, U"以必의종에 따른 난할형식에는 차이가 없는 것으로 추측되었다.
- Urechis umcmctus의 등황란을 인공수정 시킨 결과 4세포기, 륵히 8세포기에서 동, 식물극 할구의 사선 배열이 관찰되었으므로 난할형식(cleavage pattern)은 나선형 난할(spiral cleavage)이었고 초기 3단계의 난할이경할(經割) — 경할(經割) — 수평할(水平割) 이었으며, 이후 경할-수평할이 반복되는 것으로 볼 수 있었다 할구의 사선배열은 유사분열 기구의 선회성에 의존하는 것으로 볼 수 있었으며 나선형 난할임에도 난할 초기부터 유생기(trocophore larvae) 까지 전할(holo- blastic cleavage) 이고 등할(equal cleavage) 인 것이 륵징이라고 할 수 있었다.
- 이MT U. um-。仍没必의 수정시기와 감수분열에 관한 여러 가지 현상들이 환형동물뿐만 아니라 극피동물과도 같지 않다는 것을 의미한다고 생각할 수 있었다.
- 21). 각 할구의 방추사는 넓 이가 7.5 ㎛인 것이 보통이었고 높은 활성을 갖는 것으로 보였으나 때로 2.5 ㎛인경우도 관찰되었다(Figs. 21, 22). 활성 방추사는 때로 동-식물극 면에 평행 배열하지 않고 형성 초기와는 달리 좌, 우회전에 의해 일정한 각도를 형성하는 것으코 볼 수 있었다.
- 광학현미경 결과에서 심장형 난할구가 관찰된 바 있었고 Fig. 8과 같이 제1차 난할에서 세포질 분열 이실질에서 종료 단계에 있음에도 난세포막의 분열이 완성되지 않은 중간 단계가 관찰되었으므로 수축 환이 존재할 수 있을 것으로 보였다 이를 전자현미경으로 관찰한 결과 불연속적인 막성 소포구조들이 할구 사이를 경계짓고 있음을 물 수 있었다(Figs. 25, 26). Fig.
- 3). 그 구조에 있어서 수정막은 무형이 아니었으며 방사형 섬유 구조를 포함하는 것으로 관찰되었고 외곽에 수많은 과잉 정자들이 부착하는 것을 물 수 있었다. 수정 40분에 제 1극체가 출현하였고(Fig.
- ; 1989; Hamagauicli; 2001;Uetake et aL, 2002)은 위에서와 같이 일부 연체동물, 환형동물, 편형동물 등에서 볼 수 있다(Verdonk & Biggerlaar, 1983). 나선형 난할에서 할구의 우선성 또는 좌선성은 할구 배열의 대칭을 유지할 수 있도록 교대로 진행된다는 사실에서 볼 때, U 球Z仍没必에서제3차 난할(4세포—8세포)이 좌선성(sinistral)이라는것으로> 2차난할(2 —4세포)와 4차 난할(8세포—16) 이 우선성이라는 것을 추측할 수 있었다.
- 1). 난소에서 분리한 난자는 그러나 해수와 접촉하거나 수정되면 구형 을 회복하였고, 이후 체액에서 분리한 난자와 구별할 수 없었다. 성숙란은 등황란이나, germinal vesicle(2n: 50㎛)은 약한 편재성을 가지므로 동물극과 식물극 을 구별하는 것이 가능하였다(Fig.
- umcmc- 々s 수정란에서 나선형 난할의 륵징은, 식물극 할구들과 동물극 할구의 배열이 사선방향으로 배열한 8세포기에서 볼 수 있었다. 난할기의 유사분열 기구를 항- a-, -0-류율린으로 처리하고, 이를 항-류붙린-me 로 표지한 결과에서는 유사분열 기구의 선회성이 관찰되었으므로, 위 난할의 흑성 이 유사분열 기구의 행위에 원인이 있을 것으로 추측할 수 있었다. Ursehis 의 다론 종인 U.
- 사선방향으로 약 45。를 이를 때 종료되는 것으로 보였다 제3차 난할은 따라서 유사분열 장치의 축에 대하여 수직인 수평할이었으나, 선회각은 45° 이므로 난할 결과 할구의 배열이 식물극과 동물극 사이에 45。차이의 사선 배열이 가농한 것으로 생각되었다 이와 같이 유사분열 기구의 기올림 또는 사선배 열에 의 한 할구의 사선배 열 혹은 즉 나선형 배 열(Harriset al.; 1980; Sluder et al.
- 활성 방추사는 때로 동-식물극 면에 평행 배열하지 않고 형성 초기와는 달리 좌, 우회전에 의해 일정한 각도를 형성하는 것으코 볼 수 있었다. 본 연구에서 2 — 4세포기에 보이는 유사분열 기구의 좌선성 혹은 우선성 여부는 확실하지 않았으나, 동일한 현상을 4 — 8세포기를 관찰하면 좌선성이라는 것을 물 수 있어서, 2 — 4세포기의 선회 성은 우선성으로 볼 수 있었다
- 24). 이 유사분열 기구의 선회 정도를 본 연구에서는 확인 할 수 없었으나 8세포기의 할구배열로 보아서 45° 내외인 것으로 추측할 수 있었다 이 유사분열 기구의 최종 배열로서 제3차 난할은수평할이 가능할 것으로 보았으며, 이때 유사분열 기구의 한쪽 극이 식물극을 향하는 방향이 좌측이었으므로 미래의 할구 배열은 좌선성 임을 볼 수 있었다
- ; 1988). 이러한 U. umcinctus 생식세포 형성과정의 룩성은 수정, 감수분열 및 난할 등 일련의 발생과정과 연관되고 영향을 미칠 수 있을 것으로 추측할 수 있었다. 이 흑성 중에서 난모세 포기인 germinal vesicle(2n) 시기에 이루어지는 수정과 핵 개방(germinal vesicle breakdown; GVBD) 및 그 후 감수분열 기구의 행위에 관한 것은 보고된 바 있으나(Kwon etaL, 2003), 난할과정에 관한 것은 아지 찾아 볼 수 없었다.
- 2). 인공수정 후의 여러 현상은 사용하는 온도에 영향 받는 것으로 보였으며, 본 연구에서 적용한 여러 가지 조건에서는 수정 2〜3분경에 수정구가 출현하였고 수정 15분에 핵 개방(germinal vesicle breakdown; GVBD)이 시작되었으며, 이때 수정막이 최고로 발달하는 것(14〜16 ㎛)것을 물 수 있었다(Fig. 3). 그 구조에 있어서 수정막은 무형이 아니었으며 방사형 섬유 구조를 포함하는 것으로 관찰되었고 외곽에 수많은 과잉 정자들이 부착하는 것을 물 수 있었다.
- cleavage) 이 었으며 전할(holoblastic cleavage) 이었다. 제1차 난할의 중간단계에서 심장형 수정란(heart -shaped egg)이 형성되었으며(Fig. 7), 심장형 수정란 형성 초기에 미래의 난할구 부위인 동물극에 cleavage streak이 생기는 것을 광학현미경으로 관찰할 수 있었다(Fig. 6). Cleavage streak 이 식물극을 향하여 신장됨에 따라, 난할구(cleavage furrow)가 형성되는 것을 볼 수 있었다.
- 10). 제2 차 난할 결과에서 동일한 크기의 4개 할구(지경 75 ㎛)를 생산하므로서(Figs, 10-12), 등할, 전할인 것 을 볼 수 있었으며, 4세포기에 이르면 난할 지후의 할구배열(Fig. 11)과 시간이 다소 경과한 후의 할구배열(Fig. 12)이 상이한 것을 물 수 있었다 이 할구의 배열 을 동물극에서 보면 4개의 할구가 한 평면에 있지 않고 일부 할구들이 다른 할구보다 위쪽으로 융기한 것과 같이 보였다(Figs. 12, 23). 이로서 제2차 난할 후 시간이 경과하면, 난할 지후의 할구 배열에서 약간의 좌측 훅은 우축 기올림 이 있는 것으로 보였다 4세포기에서 8세포기에 이르는 시간은 인공수정에서 조절했던 해수의 온도에 따라 다소 차이는 있을 수 있으나 약 20 분이 소요되었다
- 제3차 난할은 4세포기의 유사분열 기구의 배열로 보아서 수평할(equatorial cleavage), 그리고 크기가 유사한 8개 할구(60 ㎛ in diam.)가 생산되었으므로 등할, 전할이 반복되는 것으로 볼 수 있었다 8세 포기 의할 구배 열은 식물극에 4개, 그리고 동물극에 4개 할구가 배열하고 있으나, 식 물극-동물극의 대응 반구의 할구들이 서로 사선 방향으로 배열하는 것을 물 수 있었다(Fig. 13).
- 항-a-, -0-튜블린 표지와 형광현미경 관찰 결과에서는 GVBD 지전 핵막과 난세포막 사이에 항-a-, - 6 f듀*린에 반옹하는 성상체 미세소관(astral micro- tubules)이 핵과 난피질을 연결하는 것으로 보였으나(Fig. 19), 이후에는 극체가 출현하는 식물극 난막 부위에서 보다 강한 성상체 미세소관의 반옹성이 관찰되었다(Fig. 20). 방추사는 동물극-식물극 축에 대하여 지각으로 배열한 것을 물 수 있었다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.