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문제 정의
- 또한 유방암의 관내 암종과 침윤성 관암종에서 C-erbB-2 단백질이 높은 발현율을 보인다고 보고되었다(Gusterson 등, 1988 ; Barnes 등, 1992). 따라서 본 연구에서는 유방 관암종의 조직학적 악성도를 평가하고, 면역조직화학 염색을 통하여 예후인자인 ER 및 PR의 양성률과 C-erbB-2 종양단백질의 발현율을 평가하여, 조직학적 악성도와의 상관관계를 알아보고, 예후인자들 상호간의 관련성을 비교해 보고자 하였다.
제안 방법
- 외과적 수술로 절제된 유방암 조직을 일반적인 조직표본 제작과정인 10% 포르말린 용액에 고정한 후, 파라핀 침투과정을 거쳐 포매하여 파라핀블록을 만들었다. 파라핀블록은 박절기(microtome, Microm)를 이용하여 3㎛ 두께로 박절하여 유리 슬라이드에 부착시키고, xylene용액으로 탈파라핀 과정을 거친 후 단계적 알코올로 함수과정을 실행한 다음, hematoxylin & eosin 염색액으로 핵과 세포질을 염색하였고, 알코올로 탈수과정을 거쳐, xylene으로 투명과정을 실시한 후, histomount액으로 봉입 하였다.
- 외과적 수술로 절제된 유방암 조직을 일반적인 조직표본 제작과정인 10% 포르말린 용액에 고정한 후, 파라핀 침투과정을 거쳐 포매하여 파라핀블록을 만들었다. 파라핀블록은 박절기(microtome, Microm)를 이용하여 3㎛ 두께로 박절하여 유리 슬라이드에 부착시키고, xylene용액으로 탈파라핀 과정을 거친 후 단계적 알코올로 함수과정을 실행한 다음, hematoxylin & eosin 염색액으로 핵과 세포질을 염색하였고, 알코올로 탈수과정을 거쳐, xylene으로 투명과정을 실시한 후, histomount액으로 봉입 하였다. 유방암의 조직학적 악성도 판정은 Elston과 Ellis(1991)의 반정량적 방법을 사용하여 병리의사에 의해 광학현미경으로 검경하여 판정하였다.
- ER과 PR은 면역조직화학적으로 염색하여 핵에 염색된 것을 양성으로 판정하여 양성(+)과 양성 백분율(%)로 표시하였고, C-erbB-2 단백질은 세포막을 따라 염색된 것을 양성으로 하여 종양조직에서 양성세포의 백분율이 0%인 경우 음성(-), 1-30%인 경우 1+, 31-60%인 경우 2+, 그리고 61% 이상인 경우 3+로 하였다.
- 유방암에서 병리조직학적 예후인자들인 ER, PR과 C-erbB-2 사이의 상관관계를 비교하여 보았다(Table 5). ER, PR과 C-erbB-2사이의 상관성을 카이제곱 검정한 결과 p값이 ER과 PR 모두에서 p<0.
- 유방암의 종양조직 총 84예를 H&E염색으로 조직학적 악성도 검사를 하였으며, 면역조직화학 염색을 하여 ER 및 PR과 C-erbB-2 종양단백질을 평가하여, 조직학적 악성도와 ER, PR과 C-erbB-2 종양단백질 사이에 상관관계를 비교 분석하여 다음과 같은 결론을 얻었다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용된 재료는 2003년 1월부터 2003년 12월 사이에 신촌 세브란스병원에서 유방암으로 진단을 받고 유방 절제수술을 시행한 환자의 종양조직을 사용하였으며, 유방관암종(breast ductal carcinoma)으로 병리조직학적 진단을 받은 84예로 하였다. 연령 분포는 28~76세로 평균 47.
데이터처리
- 통계 분석은 SAS프로그램을 이용하여 조직학적 악성도와 예후인자들인 ER, PR과 C-erbB-2 종양단백질 사이에 상관관계를 Chi-square검정과 Fisher의 정확 검정을 사용하여 검정하였고, 통계학적 유의성은 p<0.05인 경우로 하였다.
이론/모형
- 파라핀블록은 박절기(microtome, Microm)를 이용하여 3㎛ 두께로 박절하여 유리 슬라이드에 부착시키고, xylene용액으로 탈파라핀 과정을 거친 후 단계적 알코올로 함수과정을 실행한 다음, hematoxylin & eosin 염색액으로 핵과 세포질을 염색하였고, 알코올로 탈수과정을 거쳐, xylene으로 투명과정을 실시한 후, histomount액으로 봉입 하였다. 유방암의 조직학적 악성도 판정은 Elston과 Ellis(1991)의 반정량적 방법을 사용하여 병리의사에 의해 광학현미경으로 검경하여 판정하였다.
성능/효과
- 유방암의 조직학적 악성도는 H&E로 염색한 슬라이드를 광학 현미경으로 관찰하여 핵의 다형성 및 분열 수, 세관의 형성 등을 종합하여 판정하였으며, 총 84예 중 관내암종(in situ ca)이 10예(11.9)였고, grade Ⅰ이 I6예(19%), grade Ⅱ가 36예(42.9%), grade Ⅲ가 22예(26.2%)로 나타났다(Table 2).
- 1A, B). 유방 관암종에서 검체의 ER, PR 양성률(%)의 평균은 관내암종에서 63%, 46%였고, grade Ⅰ에서 80%, 60%였으며, grade Ⅱ에서 64%, 41%였고, grade Ⅲ에서 34%, 23%로 나타났다(Fig. 2). 또한 ER, PR의 양성검체 수는 관내암종에서 9예(10.
- 9%)였다(Table 3). 조직학적 악성도와 ER, PR사이의 상관관계는 카이제곱 검정한 결과 p<0.05를 나타내어 통계학적으로 유의성이 있는 것으로 나타났다.
- 유방암에서 병리조직학적 예후인자들인 ER, PR과 C-erbB-2 사이의 상관관계를 비교하여 보았다(Table 5). ER, PR과 C-erbB-2사이의 상관성을 카이제곱 검정한 결과 p값이 ER과 PR 모두에서 p<0.05로 나타나 통계학적으로 유의성이 있었다.
- Osborne 등(1980)은 ER과 PR의 양성률은 서로 상관관계가 있으므로 두가지 중 하나만 시행해도 된다고 주장하였고 Vollenweider-Zerargui 등(1986)은 ER이 PR보다 더욱 민감한 표지자 역할을 하며 ER+/PR+인 경우와 ER+/PR-인 경우가 서로 대등한 관계라고 하였다. 본 연구에서도 유방 관암종의 조직학적 악성도가 높아짐에 따라 ER과 PR의 양성률이 낮아지는 것으로 나타나 통계학적으로 유의성을 나타냈으며(p<0.05), ER의 발현율이 상승함에 따라서 PR의 발현율도 상승하여 유사한 경향을 나타내 통계학적으로 유의성을 보였으며, 이러한 경향으로 보아 조직학적 악성도와 ER, PR의 사이에 상관관계가 있다고 보여졌다. Khan 등(1994)과 Karayiannakis 등(1996)은 ER 및 PR은 양성종양보다 악성종양에서 발현율이 높고 ER과 PR의 발현율은 서로 연관성이 있다고 보고한 것과 본 연구 결과와 차이가 없었다.
- Khan 등(1994)과 Karayiannakis 등(1996)은 ER 및 PR은 양성종양보다 악성종양에서 발현율이 높고 ER과 PR의 발현율은 서로 연관성이 있다고 보고한 것과 본 연구 결과와 차이가 없었다. 그리고 ER 및 PR의 발현율과 C-erbB-2 종양단백질 발현율과의 사이에도 통계학적 유의성이 있었으나(Table 5), 조직학적 악성도와 C-erbB-2 사이에는 유의한 차이가 없었다(Table 4). 유선이나 자궁내막의 성장에 있어서 스테로이드 호르몬의 영향을 받는다는 것은 이미 알려진 사실이다.
- 특히 유방암에서 약 20%가 과발현되는 것으로 보고 되었다(Ali 등, 1988; Berger 등, 1988; Wright 등, 1989). 본 연구에서는 유방 관암종에서 약 32%가 발현되어 약간 높게 나타났으며, 조직학적 악성도와는 유의한 상관성이 없었다(Table 4). Wright 등(1989)은 C-erbB-2 종양단백질 발현과 림프절 전이와는 상관관계가 없다고 하였으나, Tandon 등(1989)은 상관관계가 있다고 하였다.
- Berger 등(1988)은 C-erbB-2 종양단백질과 조직학적 악성도와의 상관관계는 유의하다고 하였고, Tsuda 등(1992)은 상관관계가 없는 독립적인 예후인자라고 하였다. 본 연구에서는 조직학적 악성도와 C-erbB-2 종양단백질 사이에는 통계학적 유의성은 없었으나, 조직학적 악성도의 모든 등급에서 C-erbB-2가 총 32.1% 발현되어 유방암의 종양단백질이 증폭하여 존재하는 것으로 보여 지므로 C-erbB-2 종양단백질이 양성인 경우에는 C-erbB-2(HER-2/neu) 유전자의 검출을 시행해야 한다고 생각된다. 또한 유방 관암종에서 스테로이드 호르몬 수용체와 C-erbB-2 종양단백질 사이에는 유의한 상관관계가 있었다.
- 1% 발현되어 유방암의 종양단백질이 증폭하여 존재하는 것으로 보여 지므로 C-erbB-2 종양단백질이 양성인 경우에는 C-erbB-2(HER-2/neu) 유전자의 검출을 시행해야 한다고 생각된다. 또한 유방 관암종에서 스테로이드 호르몬 수용체와 C-erbB-2 종양단백질 사이에는 유의한 상관관계가 있었다. 그러므로 유방암에서 ER과 PR은 양호한 예후인자라고 판단되어지며, 이들 예후인자들은 유방암 환자의 예후 및 치료에 필요한 보다 정확한 정보를 제공할 수 있다고 생각된다.
- 1. 조직학적 악성도는 총 84예 중 관내암종이 10예 (11.9%)였고, grade Ⅰ이 16예(19%)였으며, grade Ⅱ가 36예(42.9%)였고, grade Ⅲ가 22예(26.2%)로 나타났다.
- 2. ER과 PR은 조직학적 악성도가 높아짐에 따라 반대로 양성률이 저하되는 것으로 나타났으며, ER의 발현이 증가하면 PR의 발현도 증가하였고, 통계학적으로 유의한 차이(p<0.05)를 나타내었다.
- 3. C-erbB-2 종양단백질 발현은 총 84예 중 음성(-)이 57예(67.86%), 1+가 9예(10.7%), 2+가 9예(10.7%), 3+가 9예(10.7%)로 나타났으며, 조직학적 악성도와 통계학적 유의성은 없었다.
- 4. ER 및 PR과 C-erbB-2 종양단백질과의 상관관계는 통계학적 유의성을 나타내어(p<0.05), 예후인자들간에 상호 연관성이 있는 것으로 나타났다.
후속연구
- 이상을 종합하면, ER과 PR의 발현은 유방암의 양호한 예후인자로 볼 수 있으며, C-erbB-2 종양단백질은 조직학적 악성도와 상관관계가 적으나 모든 등급에서 발현되므로 C-erbB-2(HER-2/neu) 유전자 검출방법인 FISH(fluorescent in situ hybridization)법 등을 이용하여 유전자 검출을 실행하여야 한다고 생각되며, 이러한 연구 결과는 유방암 환자의 예후 및 치료에 대한 많은 정보를 제공할 수 있어 병리조직검사에 있어서 반드시 필요하다고 생각된다.
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