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제안 방법
- 양파 열수 추출물의 항산화능 및 인공소화 전과후의 항돌연변이 효과를 BHT와 ascorbic acid와 비교하여 조사하였다. 총 페놀 및 플라보노이드의 함량은 노란색 양파 추출물이 흰색 양파 추출물보다 많았으며, 양파 추출물의 과산화수소 소거능은 농도가 증가함에 따라 비례적으로 증가하였다.
- 그러나 국내에서는 양파의 연구가 미흡하므로 흰색과 노란색 양파를 이용하여 열수 추출물에 함유되어 있는 총 flavonoid와 총 페놀의 함량을 조사하였고, a, a-diphenyl-P -picrylhydrazyl (DPPH)와 hydrogen peroxide (HQ2)소거효과, P-carotene-linoleate system을 이용한 항산화 효과와 금속이온을 환원시키는 환원력을 측정하여 항산화력과 자유라디칼 소거작용을 평가하고, 또한 양파 추출물을 인공적으로 제조한 위액과 소장액으로 각각 소화시킨 후 항돌연변이에 미치는 영향들을 조사하였다.
- 분쇄한 시료는 -20℃ 냉동고에 보관하면서 시료로 사용하였다. 양파(100g)에 증류수(500ml, 3회)를 가하여 6(TC에서 8시간 3회 추출한 후, 여과하였으며, 이것을 회전증발기에서 농축한 다음 농축물을 다시 동결건조한 후 포장하여 -20℃에 보관하면서 시료로 사용하였다. 이후의 분석결과는 각 시료 당 3회 반복 실시하여 그 평균값으로 나타내었다.
- 01 g에 증류수 60 ml를 가한 후 90℃에서 30분간 추출하였으며, 여과하여 100 ml로 정용하였다. 여과액을 일정량 취하여 시험관에 옮긴 후 90% diethylene glycol 10ml과 IN NaOH 0.75 ml를 혼합하여 420 nM에서 홉광도를 측정하였다, 이때 표준곡선은 quercetin (Sigma Co., USA)의 농도를 0-0.5 m흥범위가 되도록 제조하였으며, 검량 선으로부터 양파 추출물 중 플라보노이드 함량을 계산하였다.
- 4로 녹임) 600 ul를 혼합하였다. 이 반응물에 넣어 spectrophotometer (CE2021, CECIL, England)< 이용하여 230 nM에서 10분 간격으로 40분간 측정하였다.
- 여러가지 양파추출물의 항산화력을 p-carotene-linoleate model system으로 측정하였다[4]. Chloroform 10 M에 p -carotene 2mg용액 에 linoleic acid 0.
- 잔류 emulsion에 3차 증류수 750 ml를 첨가하여 강하게 진탕 한 다음 용기에 넣어둔다. 시험관에 emulsion용액 2.5 ml에 추출물 0.3 ml가하여 동일한 것을 두 개 만들어 하나는 그대로 측정하며, 다른 하나는 55C에서 105분 동안 암실에서 incubation시 킨 다음 492 nM 에서 spectrophotometer (CE2021, CECIL, England)를 사용하여 흡광도를 측정하였으며, 대조구는 양파 추출물 대신에 butylated hydroxytoluene (BHT)와 L-ascorbic acid를 사용하였다.
- 양파 추출물의 항돌연변이 시험은 S. typhimurium TA98과 TAI00을 이용하여 Ames test를 개량한 preincubation법으로 실시하였다[13] S9 mix 0.5 ml, 12시간 배양된 균주 0.1 ml, mutagen과 시료 각각 50 ml씩을 ice bath에 담긴 cap tube에 첨가하여 강하게 혼합하고 37℃ 30분간 전배양하였다. 4749 ℃의 top agar 2 ml씩을 각 tube에 넣고 3초간 혼합하여 minimal glucose agar plate에 도말하고, 37℃에서 48시간 배양한 후 revertant 숫자를 계수하였다.
- 5 ml를 cap tube에 넣고 잘 혼합한 후 37℃에서 30분 전배양하였다. 그리고 10% histidine/biotin이 첨가된 top agar를 2 rrd씩 가하여 잘 혼합한 후 minimal glucose agar plate상에 도말하여 37℃, 150 rpm에서 48시간 배양하여 생긴 복귀 돌연변이수를 측정하였다.
- 모든 실험은 triplicate로 시행되었고 그 일관성을 확인하였다. 각 실험에는 추출물을 포함하지 않은 positive control이 포함되었고 IQ와 MNNG를 함유하지 않은 spontaneous control을 동시에 수행해 revertant colony수를 보정하였다.
- 모든 실험은 triplicate로 시행되었고 그 일관성을 확인하였다. 각 실험에는 추출물을 포함하지 않은 positive control이 포함되었고 IQ와 MNNG를 함유하지 않은 spontaneous control을 동시에 수행해 revertant colony수를 보정하였다. revertant colony의 수는 세 개 시료의 평균값을 사용하였다.
대상 데이터
- 본 실험에 사용된 양파(Allium cepa L.)는 진주 중앙시장에서 구입하여 실험실로 운반한 후, 수세, 탈피 및 탈수과정을 거쳐 동결건조한 후 분쇄하였다. 분쇄한 시료는 -20℃ 냉동고에 보관하면서 시료로 사용하였다.
- 실험에 사용한 quercetin, myricetin, P-carotene, dimethyl sulfoxide (DMSO), caffeic acid, pencreatin, pepsin, a, a -diphenyl-p-picrylhydrazyl (DPPH), polyoxyethylene sorbitan monopalmitate (tween 40)potassium phosphate, potassium ferricyanide는 Sigma사 (USA), sodium phosphate, L-ascorobic acid 는 Sinyo (Japan) 사> N-m-ethyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), IQ (2-amino-3-methlimidazo [4z5-f] quinoline)는 Wako사(Japan), Salmonella typhimurium TA98과 TA100은 한국생명 공학연구원 생물자원센터 (KCTC) 로부터 구입하였으며, 용매 및 기타 시약은 특급 또는 1급을 사용하였다.
- 5로 맞춘 후 증류수로 1,000 ml로 정용하였다. 인공위액과 인공 소 장액에 사용된 pepsine hog stomach (Fluka 77163), pancreatin은 porcine pancrease (Sigma P-1500)를 사용하였다.
데이터처리
- 양파(100g)에 증류수(500ml, 3회)를 가하여 6(TC에서 8시간 3회 추출한 후, 여과하였으며, 이것을 회전증발기에서 농축한 다음 농축물을 다시 동결건조한 후 포장하여 -20℃에 보관하면서 시료로 사용하였다. 이후의 분석결과는 각 시료 당 3회 반복 실시하여 그 평균값으로 나타내었다.
- 각 실험에는 추출물을 포함하지 않은 positive control이 포함되었고 IQ와 MNNG를 함유하지 않은 spontaneous control을 동시에 수행해 revertant colony수를 보정하였다. revertant colony의 수는 세 개 시료의 평균값을 사용하였다.
이론/모형
- 총 페놀의 함량 분석은 Folin-Denis방법[6]에 따라 시험관에 양파 추출물 0.01 g에 Folin-Denis 시약 5 ml를 넣어 혼합한 후, 증류수로 100 ml 정용한 다음 실온에서 30분 방치하여 760 nM에서 홉광도를 측정하였다. 이때 표준곡선은 caffeic acid를 이용하여 작성하였으며, caffeic acid의 농도는 1~5 mg/100 ml였다.
- Davis 변법[8]을 이용하여 각각 저장중인 양파 추출물 0.01 g에 증류수 60 ml를 가한 후 90℃에서 30분간 추출하였으며, 여과하여 100 ml로 정용하였다. 여과액을 일정량 취하여 시험관에 옮긴 후 90% diethylene glycol 10ml과 IN NaOH 0.
- 과산화수소 소거작용의 측정은 Ruch 등[21]의 방법을 이용하였다. 0.
- 양파 추출물의 환원력의 측정은 Oyaizu [15]의 방법에 따랐다. 시험관에 다양한 농도의 양파 추출물에 02 M sodium phosphate buffer (pH 6.
- 인공위액은 United States Phamacopeia [25]에서 제안한 방법에 따라 NaCl 2.0 g과 pepsin 3.2 g을 증류수 500 ml에 녹인 후, 7.0 ml의 HCl (30%)을 가한 다음 증류수로서 1000ml로 만들어 IN HCl 로 pH를 1.2로 조절하였다. 인공소 장액은 증류수 250 ml에 KH2PO4 6.
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