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문제 정의
- 가해진 G-6-P 용액의 부피를 변화 시켜 반응액 내의 초기농도를 0 mM에서 67 mM까지 증가시켰을 때, 발현된 단백질의 양은 표준반응조건의 PEP 농도와 마찬가지로 33 mM에서 최적의 결과를 보였으나 이때 최종적으로 얻어진 단백질 (Chloramphenicol acetyltransferase, CAT)의 양은 PEP를 사용한 표준반응의 결과에 비하여 현저히 낮은 단백질 발현을 나 타내었다(data not shown). 두 경우에 있어서 에너지원을 제외한 모든 조건은 동등하였으므로 이러한 발현량의 차이가 반응액 내의 ATP 농도와 연관이 있는지를 조사하였다. PEP 및 G-6-P를 사용한 무세포 발현 반응 도중의 ATP 농도의 변화는 Fig.
- G-6-P를 에너지원으로 사용한 무세포 단백질 합성 반응은 발현되는 단백질의 생산성에 있어서 매우 낮은 재현성을 보였고, 경우에 따라, PEP를 사용한 경우에 비하여 오히려 낮은 단백질 합성 수율을 보이기도 하였다. 본 연구에서는 이처럼 해당 과정의 중간체를 에너지원으로 사용한 무세포 단백질 발현 반응에 영향을 미치는 주요 인자들을 탐색하고 이를 해결하여 고효율의 회분식 무세포 단백질 발현을 높은 재현성으로 수행할 수 있도록 하는 것을 목적으로 수행되었다.
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