선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 백출을 세절하고, methanol로 추출 후 실리카겔 칼럼크로마토그라피를 실시하여 멜라닌 생성 억제 물질들을 분리하였으며, 각종 spectral data를 바탕으로 구조를 동정하여 이를 보고하고자 한다.
제안 방법
- - 0.2% DMSO를 음성대조군으로, 270 μg/ ml arbutin을 양성대조군으로 사용하였으며, selina-4( 14), 7(11)- dien-8-one의 농도는 270(ig/g arbutin과 유사한 정도의 멜라닌 생성 억제 효과를 보이는 농도인 5 μg/ml과 10pg/ml 및 15 μg/ml의 농도로 각각 조제하였다.
- -60 mm petridish에 dish당 3x 1S개의 세포를 깔아준 후, 각 시험물질을 처리하고, 시료처리 3일 후 0.25% Trypsin-EDTA용액을 처리하여 세포를 수확하고, 원심 분리하여 cell pellet을 얻고, cell pellet의 색깔은 육안으로 판정하였다. 또한, cell pellet-^ phosphate buffered saline 용액에 현탁 하여 세포수를 coulter counter(ZM, Coulter Co.
- COSY와 HMQC spectrum에서 2종류의 partial structure(-CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH-)를 알아 내고 DEPT spectra에서 quaternary 5개(ketone 1개, 이중결합 3개등), tertiary 1개, secondary 6개, primary 3개의 존재를 알아 내 었다. 위의 partial structure와 HMBC spectrum의 2J(C, H) 또는 3J(C, H) couplings value를 조합하여 구조를 결정하였는데 다음과 같다.
- 3에서 강한 활성을 확인하였다. (IC50=20ug/ml) Fr.3을 실리카겔 칼럼크로마토그라피(*hexane:EtOAc=40/l--l:l) 를 반복하여 활성 성분인 compound I을 분리하였으며 (scheme I), spectral dataC'H and 13C NMR, MS)를 바탕으로 구조를 확인하였다 (Table I).
- 따라서 상기의 데이터를 기존 문헌 데이터89와 비교 검토하여 compound I이 selina-4(14), 7(ll)-dien-8-one 임을 동정하였다 (Fig. 1).
- 25% Trypsin-EDTA용액을 처리하여 세포를 수확하고, 원심 분리하여 cell pellet을 얻고, cell pellet의 색깔은 육안으로 판정하였다. 또한, cell pellet-^ phosphate buffered saline 용액에 현탁 하여 세포수를 coulter counter(ZM, Coulter Co.)로 측정하여 2 X 105 세포수당 1 N NaOH용액 1 ml을 넣고 세포를 녹인 다음, 490 nm에서 흡광도(A49/IO6 cells)를 측정하여, 시험물질을 처리하지 않은 세포의 멜라닌양과 비교하여 각 시험물질이 멜라닌 생성에 미치는 영향을 알아보았다."
- 위의 partial structure와 HMBC spectrum의 2J(C, H) 또는 3J(C, H) couplings value를 조합하여 구조를 결정하였는데 다음과 같다. (1) 0.
대상 데이터
- - 본 실험에서 사용된 백출은 중국 절강에서 입수하였다.
- HPLC columne YMC pack-sil column을, mass spectra는 AutoSpec mass spectrometer (Micromass, Manchester, UK) 를, NMR spectrafe Bruker DMX-400을 사용하였다. 세포배양을 위해 DMEM (Dulbecco, s modified Eagle, s medium), FBS (fetal bovine serum), antibiotics와 Tryptsin (2.5%)을 Gibco에서 구입하였으며, 그외 각종 시약은 특급 시약을 사용하였다.
성능/효과
- 위의 partial structure와 HMBC spectrum의 2J(C, H) 또는 3J(C, H) couplings value를 조합하여 구조를 결정하였는데 다음과 같다. (1) 0.77 ppm의 methyl proton(H-13)은 47.1 ppm(C-4), 38.2 ppm(C-5), 57.6 ppm(C-6), 41.2ppm(C-10)의 carbon과 correlation0] 보이고 (2) H-12(4.85 ppm, 4.61 ppm)는 C- 4(47.1 ppm), C-7(149.1 ppm), C-8(36.8 ppm)과 (3) H- 14(1.81 ppm) 또는 H-15(1.98ppm)는 C-2(131.6ppm), C- 11(142.5 ppm)과 HMBC cross peak이 각각 보여졌다.
- - 백출 2 Kg을 세절하고 methanols 60℃ 에서 3시간 2회 추출 후 감압 농축하여 수득한 추출물(350 g) 을 정제수 5 L에 현탁한 다음 n-hexane, EtOAc 그리고 n- butanol으로 순차적으로 분획하여 얻은 각각의 분획들에 대해 멜라닌 생성저해 효과를 실험한 결과 n-hexane 분획 (35 g) 이 멜라닌 생성 저해 효과가 있음을 확인하였다(IC50=100 ug/ ml). 따라서, M-hexane분획을 실리카겔 칼럼크로마토그라피 (R-hexane:EtOAc=80:1-2:1)하여 5개의 분획(Fr.
- 또한, 육안판정 의 .결과를 보다 명확히 하고자 2xl05 ceUs 당 멜라닌양을 측정한 결과, 1 mM arbutin이 52%의 멜라닌생성을 감소 시 켰으나, compound I는 5 gg/ml, 10gg/ml 및 15 gg/ml 의 농도에서 각각 33%, 62%, 73%의 멜라닌 생성을 억제하였음을 알 수 있었다(Fig. 2).
- 기미 , 주근깨 등의 색소침착의 치료제를 개발하고자 한방에서 피부미용에 사용한 것으로 알려진 약재들을 대상으로 B16 melanoma assay를 한 결과, 백출 추출물이 멜라닌생성억제 효과가 우수함을 알 수 있었으며, 이로부터 seUna- 4(14), 7(U)-dien-8-one가 멜라닌 생성 억제 효능을 나타냄을 확인하였다.
- 따라서, M-hexane분획을 실리카겔 칼럼크로마토그라피 (R-hexane:EtOAc=80:1-2:1)하여 5개의 분획(Fr.1-5)으로 나누어 멜라닌 생성 억제 효과를 검색한 결과, Fr.3에서 강한 활성을 확인하였다. (IC50=20ug/ml) Fr.
- 본 연구에서는 피부의 과색소침착에 의한 기미, 주근깨 등의 치료제를 개발하고자 멜라노마 세포 시험법 (B16 mouse melanoma assay)을 이용하여 50여 종의 생약을 대상으로 멜라닌 생성 억제 효능을 검색한 결과, 백출의 정유 추출물이 우수한 활성을 나타냄을 알 수 있었다. 백출은 삽주 Atractylodes japonica Koidzumi(국화과 Compositae) 주피를 제거한 뿌리줄기로, 혈당 강하, 위궤양 예방 및 담즙 분비 촉진 등의 효과가 있음이 보고되어 있다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.