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문제 정의
- 본 연구는 전보(10-12)에서 in Wfro와 in Wvo상에서 효능이 입증된 녹차, 메밀 및 포도잎 추출물을 이용하여 타블렛 형태의 식이보조제를 개발하고 이 식이보조제의 효능을 검증하기 위한 후속연구로써 진행되었다. 먼저 in vitro test(10,l 1)에서 다양한 천연물들의 혈액순환기능과 관련된 생리활성으로 HMGCoA reductase 저해활성과 ACE 저해활성을 검색하여 효능이 우수한 녹차, 메밀 포도잎 추출물을 선발하였다.
- 그 결과 녹차추출물 투여군에서는 대조군 에 비해 흰쥐 꼬리에서의 출혈시간을 증가시켜 항혈액응고효과가 다른 추출물에 비해 뛰어났으며 메밀과 포도잎 추출물은 흰쥐의 체내 지질과산화작용을 억제하는 능력이 탁월하였다. 이렇듯 각 추출물에 따라 나타내는 생리활성에 약간씩 차이가 있었기 때문에 이들을 단독으로 사용하기보다는 혼합하여 사 용하였을때 상승효과가 있을 것으로 예상하고 본 연구를 계획 하였다. 7주령의 FIB golden Syrian 햄스터를 동맥경화 유발식 이에 녹차추출물, 메밀추출물 및 포도잎 추출물을 함유한 타블 렛 제품을 각각 5%와 10%로 첨가한 사료로 7주간 사육하였 을 때 햄스터 체내의 지질성분과 대동맥 내에서의 지방의 축 적 정도에 미치는 영향을 조사하고자 하였다.
제안 방법
- 이렇듯 각 추출물에 따라 나타내는 생리활성에 약간씩 차이가 있었기 때문에 이들을 단독으로 사용하기보다는 혼합하여 사 용하였을때 상승효과가 있을 것으로 예상하고 본 연구를 계획 하였다. 7주령의 FIB golden Syrian 햄스터를 동맥경화 유발식 이에 녹차추출물, 메밀추출물 및 포도잎 추출물을 함유한 타블 렛 제품을 각각 5%와 10%로 첨가한 사료로 7주간 사육하였 을 때 햄스터 체내의 지질성분과 대동맥 내에서의 지방의 축 적 정도에 미치는 영향을 조사하고자 하였다.
- 7주령의 FIB golden Syrian 햄스터에게 동맥경화 유발식이에 녹차추출물, 메밀추출물 및 포도잎 추출물을 함유한 타블렛 제 품을 각각 5%와 10%로 첨가하여 7주간 사육하였을 때 햄스 터 체내의 지질성분과 대동맥 내에서의 지방의 축적 정도에 미치는 영향을 조사하였다. 실험 결과 녹차, 메밀, 포도잎 추출물 을 함유한 타블렛 제품은 동맥경화유발식이를 섭취하는 햄스 터의 혈중 중성지방과 총콜레스테롤치를 감소시켰고, 대동맥궁 내에서의 지방의 축적을 예방하였고, 간장내 중성지방과 총콜 레스테롤치를 감소시키는 것으로 나타났다.
- NC군은 정상대조군으로 실험기간동안 정상사료인 A1N-76A diet를 급여하여 동맥경화를 유발시키지 않은 군 이며 AC군은 동맥경화 유발 대조군으로 동맥경화유발 사료를 급여하여 동맥경화를 유발시켰다. S-5군과 S-10군은 동맥경화 유발 사료를 급여하여 동맥경화증을 유발시키면서 S-5군은 타 블렛 제품을 사료에 5% 첨가하고 S-10군은 타블렛 제품을 10% 첨가하여 식이로 섭취하도록 하였다. 타블렛 제품의 첨가량은 전보(12)에 기준하여 결정하였다.
- 혈장내 HDL-콜레스테롤의 함량은 효소법으로 검사하였으며 Direct HDL-cholesterol II reagent kit (Bayer, NY, USA)를 사용하여 Chemistry Autoanalyzer(ADVIA 1650, Bayer, Tokyo, Japan)으로 분석하였다. VLDL과 LDL-콜 레스테롤의 합(non-HDL-cholesterol)은 총콜레스테롤에서 HDL-콜레스테롤의 양을 뺀 값으로 계산하였다.
- , Missouri, USA))로 5 분동안 관류하였다. 관류 후에 대동맥은 stereo-microscope 하에서 적출하였다. 대동맥 주위의 결체조직을 제거하고 대동맥궁의 주요한 가지들을 잘라내었다.
- 녹차, 메밀, 포도잎 추출물을 함유한 타블렛 제품의 섭취가 동맥경화를 유발한 햄스터의 장기무게에 미치는 영향을 알아 보기 위해 간장, 심장, 신장 및 비장을 적출하여 무게를 측정 하였으며 그 결과는 Table 7에 나타내었다. 간장의 무게는 NC 군에 비해 AC군에서 유의적으로 높았으며 고지방/고콜레스테롤 식이로 인해 간장내 지질이 축적되어 간장이 상당히 비대 해진다는 것을 확인하였다.
- 녹차, 메밀, 포도잎 추출물을 함유한 타블렛 제품의 섭취로 인한 간손상 정도를 알아보기 위해 혈액내의 SGOT와 SGPT의 활성을 측정하였으며 그 결과는 Table 8에 나타내었다. SGOT 활성은 NC군과 S-10군이 AC군과 S-5군에 비해 높았고 SGPT 활성은 전군에서 유의한 차이를 보이지 않았다.
- 녹차, 메밀, 포도잎 추출물을 함유한 타블렛 제품이 동맥경 화를 유발시킨 햄스터의 대동맥에서의 지방 축적에 미치는 영향을 알아보기 위하여 햄스터의 대동맥궁 내벽을 Oil red O로 염색한 후 현미경으로 관찰하였으며 현미경 사진은 Fig. 2에나타내었다.
- 녹차, 메밀, 포도잎 추출물을 함유한 타블렛 제품이 동맥경 화를 유발시킨 햄스터의 혈중 지질성분에 미치는 영향을 알아 보기 위해 혈중 중성지방, 총콜레스테롤, HDL-콜레스테롤 및 non-HDL-콜레스테롤치를 분석하여 그 결과를 Table 4에 나타내었다. 혈중 지질성분을 전체적으로 살펴보면 채혈 전 절식을 시켰음에도 불구하고 표준편차가 매우 크게 나타나는 군들이 있는데 이는 Rein 등의 보고(9)에 의하면 햄스터들은 그들의 볼주머니에 음식을 저장할 수 있는 능력이 있는데 이 때문에 변이가 크다고 하였다.
- 관류 후에 대동맥은 stereo-microscope 하에서 적출하였다. 대동맥 주위의 결체조직을 제거하고 대동맥궁의 주요한 가지들을 잘라내었다. 심장에서부터 시작하여 inner curvature까지의 길이를 측정했을 때 약 7-9mm 정도의 긴 대 동맥궁 부위를 사용하며 이를 평평하게 열은 후에 10% neutral-buffered formalin 용액 (Sigma-Aldrich, Chemical Co.
- 간 기능 지표검사를 위한 혈청은 채혈한 혈액을 헤파린이 처리되 지 않은 tube에 담아 실온에 30분간 방치한 후에 원심분리하여 상등액을 취하여 분석전까지 -701 deep fEezei에 보관하였다. 대동맥은 Rein 등의 방법(9)에 따라 적출하기 전에 산화를 방지하기 위하여 좌심 실을 통해 20 mL phospohate-buffered saline( 10 mM/L, contained EDTA(2.5 mM/L) and Trolox(0.4 mM/L: Sigma-Aldrich, Chemical Co., Missouri, USA))로 5 분동안 관류하였다. 관류 후에 대동맥은 stereo-microscope 하에서 적출하였다.
- Adams 등(26)은 지용성인 bis-azo 염색약인 Oil red O는 수단 용액들 중의 하나로 조직 내에 축적된 지질의 현미경 관찰 에 널리 이용되어진다고 하였다. 또한 햄스터 대동맥내의 지질 축적에 관한 다른 연구들(8, 9, 14, 26)에 따르면 Oil red O에 의해 붉게 염색된 대동맥의 지질부분의 면적을 계산하여 도표화 하였으나 본 연구에서는 면적을 구하기에 어려움이 있어 현미 경상의 사진으로만 지질의 축적정도를 관찰하였다. Fig.
- 본 연구는 전보(10-12)에서 in Wfro와 in Wvo상에서 효능이 입증된 녹차, 메밀 및 포도잎 추출물을 이용하여 타블렛 형태의 식이보조제를 개발하고 이 식이보조제의 효능을 검증하기 위한 후속연구로써 진행되었다. 먼저 in vitro test(10,l 1)에서 다양한 천연물들의 혈액순환기능과 관련된 생리활성으로 HMGCoA reductase 저해활성과 ACE 저해활성을 검색하여 효능이 우수한 녹차, 메밀 포도잎 추출물을 선발하였다. 선발된 추출 물을 대상으로 생체내에서의 작용을 알아보기 위해서 in vivo test(12)를 실행하였다.
- 식이섭취량과 체중은 매주 1회 일정한 시각에 측정하였다. 사육기간 동안의 일일 평균 식이섭취량과 체중증가량을 측정 하였고 사육기간 중의 체중증가량을 같은 기간의 식이섭취량으로 나누어 각 실험군들의 식이효율(fbod efficiency ratio, F.E.R)을 계산하였다.
- 먼저 in vitro test(10,l 1)에서 다양한 천연물들의 혈액순환기능과 관련된 생리활성으로 HMGCoA reductase 저해활성과 ACE 저해활성을 검색하여 효능이 우수한 녹차, 메밀 포도잎 추출물을 선발하였다. 선발된 추출 물을 대상으로 생체내에서의 작용을 알아보기 위해서 in vivo test(12)를 실행하였다. 여기서는 SD계 수컷 흰쥐에게 콜레스테 롤이 1% 함유된 사료를 급여하여 고지혈증을 유발시키면서 녹 차, 메밀 및 포도잎 추출물을 500㎎/㎏ B.
-
체중측정, 식이섭취량 및 식이효율
식이섭취량과 체중은 매주 1회 일정한 시각에 측정하였다. 사육기간 동안의 일일 평균 식이섭취량과 체중증가량을 측정 하였고 사육기간 중의 체중증가량을 같은 기간의 식이섭취량으로 나누어 각 실험군들의 식이효율(fbod efficiency ratio, F.
- 적응기간 후 체중이 105 g 내외인 햄 스터들을 체중에 따른 난괴 법(randomized complete block design)에 의해 12마리씩 4군으로 분류하여 7주간 사육하였다. 실험에 사용된 식이는 AIN-76A purified diet(Dyets Inc., Pennsylvania, USA)를 대조사료로 사용하였고 Pitman 등의 연구(13) 를 참고로 하여 AIN-76A 식이에 10% coconut oil과 0.05% cholesterol을 첨가하여 동맥경화유발식이로 사용하였으며 Table 2에 나타내었다. NC군은 정상대조군으로 실험기간동안 정상사료인 A1N-76A diet를 급여하여 동맥경화를 유발시키지 않은 군 이며 AC군은 동맥경화 유발 대조군으로 동맥경화유발 사료를 급여하여 동맥경화를 유발시켰다.
- 선발된 추출 물을 대상으로 생체내에서의 작용을 알아보기 위해서 in vivo test(12)를 실행하였다. 여기서는 SD계 수컷 흰쥐에게 콜레스테 롤이 1% 함유된 사료를 급여하여 고지혈증을 유발시키면서 녹 차, 메밀 및 포도잎 추출물을 500㎎/㎏ B.W.의 양을 4주간 매일 경구투여하였다. 그 결과 녹차추출물 투여군에서는 대조군 에 비해 흰쥐 꼬리에서의 출혈시간을 증가시켜 항혈액응고효과가 다른 추출물에 비해 뛰어났으며 메밀과 포도잎 추출물은 흰쥐의 체내 지질과산화작용을 억제하는 능력이 탁월하였다.
- , Missouri, USA)로 20분간염색하였다. 염색 후 증류수에 세척하고 glycer이과 0.1 v이 sodium-phosohate buflfer(10mM/L, pH 7.4)를 mounting medium으로 사용하여 대동맥 내부표면이 위로 향하게 하여 현미경(OLYMPUS CKX41, Sanyo VCC-6574A color CCD Camera) 슬라이드 위에 올려놓고 관찰하였다.
- , Seoul, Korea)를 통해서 구입하여 실험시작 전 1주일간 고 형배합사료로 적응시켰다. 적응기간 후 체중이 105 g 내외인 햄 스터들을 체중에 따른 난괴 법(randomized complete block design)에 의해 12마리씩 4군으로 분류하여 7주간 사육하였다. 실험에 사용된 식이는 AIN-76A purified diet(Dyets Inc.
- 혈액을 채취한 후 ice bath 위에서 즉시 간, 심장, 신장, 비장 을 떼어 ice cold saline에 넣어 세척한 다음 여지로 물기를 제 거한 후 무게를 측정하고 간장은 세절하여 -7(TC deep freezer에 보관하여 지질성분 분석에 사용하였다.
대상 데이터
- , Seoul, Korea)에서 구입하여 사용하였다. 메밀은 봉평농협마트에서 통메밀의 형태로 된 것을 구입하였으며 메밀추출물은 통메밀을 24시간동안 shaking incubatot에서 5배의 물로 냉침추출하여 와트만 여과지 No. 2로 여과하고 여과액을 감압농축한 후, 동결건조하여 사용하였다. 위의 추출물들을 타블렛 형태의 제품으로 만들어 이를 실험시 료로 사용하였으며 타블렛 제품의 조성은 Table 1에 나타내었다.
- 본 실험에 사용된 녹차추출물(green tea extract powder: 103.533) 과 포도잎 추출물(grape vine leaf powder extract: 85.945)은 삼 정향료(Sam Jung Favor Co. LTD., Seoul, Korea)에서 구입하여 사용하였다. 메밀은 봉평농협마트에서 통메밀의 형태로 된 것을 구입하였으며 메밀추출물은 통메밀을 24시간동안 shaking incubatot에서 5배의 물로 냉침추출하여 와트만 여과지 No.
- 생후 6주된 golden Syrian종 수컷 햄스터 48마리 (Bio Breeders Inc., MA, USA)를 중앙실험동물(Jung Ang Lab Animal Inc., Seoul, Korea)를 통해서 구입하여 실험시작 전 1주일간 고 형배합사료로 적응시켰다. 적응기간 후 체중이 105 g 내외인 햄 스터들을 체중에 따른 난괴 법(randomized complete block design)에 의해 12마리씩 4군으로 분류하여 7주간 사육하였다.
- 타블렛 제품의 첨가량은 전보(12)에 기준하여 결정하였다. 실험동물은 네 마리를 한 cage 에서 사육하였으며 식이와 물은 자유롭게 먹도록 하였다.
데이터처리
- "Values with different alphabet within the column are significantly different at ct = 0.05 by Duncan's multiple range test. 3'Not significant.
- 3) Values with different alphabet within the column are significantly different at a = 0.05 by Duncan's multiple range test.
- 4)Values with different alphabet within the column are significantly difFerenl at a = 0.05 by Duncan's mtiple range test.
- "Values with different alphabet within the column are significantly different at ct = 0.05 by Duncan's multiple range test. 3'Not significant.
- 본 연구의 실험결과는 실험군당 평균과 표준편차를 계산하였고, 이]e-way ANOVA를 실시한 후 a = 0.05 수준에서 Duncan's multiple range test에 의하여 각 실험군 평균치간의 유의성을 검정하였다.
이론/모형
- 간기능 지표로 사용되는 SGOT 및 SGPT 활성은 IFCC법에 의한 AST reagents kit(Bayer, NY, USA)를 이용하여 ADVIA 1650(Bayer, Tokyo, Japan)으로 분석하였다.
- 4) 4mL을 넣어 glass h* omogenized 균질화하고 원심분리하여 상층액을 분리하여 분석에 사용하였다. 간장내 중성지방 농도는 GPO-PAP법을 이용한 kit(Young Dong Chemical Co., Seoul, Korea)로 측정하였고 콜레스테롤 농도는 효소법을 이용한 kit(Young Dong Chemical Co., Seoul, Korea)을 이용하여 측정하였다.
- 대동맥내벽의 지방의 축적 정도는 Rein 등의 방법(9)에 따라 대동맥 부위 를 oil red 0(3 g/L in 60% isopropanol and 40% water, Sigma-Aldrich, Chemical Co., Missouri, USA)로 20분간염색하였다. 염색 후 증류수에 세척하고 glycer이과 0.
- 혈장내 총 콜레스테롤의 함량은 효소법으로 검사하였으며 Cholesterol reagent kit (Bayer, NY, USA)를 사용하여 Chemistry Autoanalyzer(ADVIA 1650, Bayer, Tokyo, Japan)로 분석하였다. 혈장내 HDL-콜레스테롤의 함량은 효소법으로 검사하였으며 Direct HDL-cholesterol II reagent kit (Bayer, NY, USA)를 사용하여 Chemistry Autoanalyzer(ADVIA 1650, Bayer, Tokyo, Japan)으로 분석하였다. VLDL과 LDL-콜 레스테롤의 합(non-HDL-cholesterol)은 총콜레스테롤에서 HDL-콜레스테롤의 양을 뺀 값으로 계산하였다.
- 혈장의 중성지방농도는 GPO, Trinder w/o serum blank(비색 법)으로 검사하였으며 Triglyceride reagents kit(Bayer, NY, USA)를 사용하여 Chemistry Autoanalyze(ADVIA 1650, Bayer, Tokyo, Japan)로 분석하였다. 혈장내 총 콜레스테롤의 함량은 효소법으로 검사하였으며 Cholesterol reagent kit (Bayer, NY, USA)를 사용하여 Chemistry Autoanalyzer(ADVIA 1650, Bayer, Tokyo, Japan)로 분석하였다. 혈장내 HDL-콜레스테롤의 함량은 효소법으로 검사하였으며 Direct HDL-cholesterol II reagent kit (Bayer, NY, USA)를 사용하여 Chemistry Autoanalyzer(ADVIA 1650, Bayer, Tokyo, Japan)으로 분석하였다.
- 혈장의 중성지방농도는 GPO, Trinder w/o serum blank(비색 법)으로 검사하였으며 Triglyceride reagents kit(Bayer, NY, USA)를 사용하여 Chemistry Autoanalyze(ADVIA 1650, Bayer, Tokyo, Japan)로 분석하였다. 혈장내 총 콜레스테롤의 함량은 효소법으로 검사하였으며 Cholesterol reagent kit (Bayer, NY, USA)를 사용하여 Chemistry Autoanalyzer(ADVIA 1650, Bayer, Tokyo, Japan)로 분석하였다.
성능/효과
- 3)AIN-76A Vitamin Mix #300050 (use at 10 g/kg Diet, g/kg mixture): Thiamine 니Cl 0.6, riboflavin 0.6, pyridoxine HCl 0.7, niacin 3, calcium pantothenate 1.6, folic acid 0.2, biotin 0.02, vitamin B2 (0.1 %) 1, vitamin A palmitate (500000 IlJ/g) 0.8, vitamin D3 (400000 lU/g) 0.25, vitamin E acetate (500 KJ/g) 10, menadione sodium bisfate 0.08, sucrose 981.15.
- Non-HDL-콜레스테롤의 함량은 혈중 총콜레스테롤 함량에서 HDL-콜레스테롤 함량을 뺀 값으로 NC군이 가장 낮았으며 AC 군이 가장 높았고 S-5군과 S-10군은 AC군에 비해 감소하는 경향을 보였으며 특히 S-10군은 AC군에 비해 통계적으로 유의 하게 낮았다. Nistor 등의 보고(8)에 의하면 일반사료에 콜레스 테롤이 3%, 버터가 15% 첨가된 고지방식이를 섭취한 햄스터 를 12개월간 사육하여 동맥경화가 유발되는 과정을 설명하였다.
- 녹차, 메밀, 포도잎 추출물을 함유한 타블렛 제품의 섭취로 인한 간손상 정도를 알아보기 위해 혈액내의 SGOT와 SGPT의 활성을 측정하였으며 그 결과는 Table 8에 나타내었다. SGOT 활성은 NC군과 S-10군이 AC군과 S-5군에 비해 높았고 SGPT 활성은 전군에서 유의한 차이를 보이지 않았다. 일반적으로 볼 때 본 연구에서 사용한 햄스터의 경우에 GOT 활성은 약 35- 57 U/L의 범위에 있을 때 정상수준이며 GPT 활성은 47-67 U/ L 정도에 들면 정상수준이라고 힌-다.
- 녹차, 메밀, 포도잎 추출물을 함유한 타블렛 제품의 섭취가 동맥경화를 유발한 햄스터의 장기무게에 미치는 영향을 알아 보기 위해 간장, 심장, 신장 및 비장을 적출하여 무게를 측정 하였으며 그 결과는 Table 7에 나타내었다. 간장의 무게는 NC 군에 비해 AC군에서 유의적으로 높았으며 고지방/고콜레스테롤 식이로 인해 간장내 지질이 축적되어 간장이 상당히 비대 해진다는 것을 확인하였다. S-5군과 S-10군은 AC군에 비해 간 장의 무게가 감소했으며 이는 타블렛 제품의 섭취에 의해 간 장내의 지방 축적이 억제되었다고 추측할 수 있었으며 이는 앞 에서 간장내 중성지방과 총콜레스테롤 함량이 타블렛 제품을 섭취한 군에서 낮았던 결과와 일치하는 것이었다.
- 즉 chymase를 저해함으로써 동맥경화를 억제하는 효과를 볼 수 있다는 가정하에 Uehara의 연구(23)가 진행되었다. 고콜 레스테롤 식이를 햄스터에게 급여한 결과 혈중의 HDL 콜레스 테롤이 증가하였으며 SUM-C8257이라는 cymase 저해제를 처리 한 군에서는 HDL 콜레스테롤이 오히려 약간 감소하는 경향을 보였다. 이로써 SUN-C8257의 처리가 대동맥의 지질축적을 감 소시키는 역할을 하는데 있어서 HDL의 대사과정과 reverse cholesterol transport를 변화시키는 것으로 짐작할 수 있었다고 하였다.
- 메밀, 포도잎 추출물을 함유한 타블렛 제품의 섭취가 동맥경화를 유발한 햄스터의 간장내 지질성분에 미치는 영향을 알아보기 위해 간장내 중성지질과 총콜레스테롤 함량을 측정하여 Table 6에 나타내었다. 그 결과 NC군에 비하여 AC군 의 중성지질과 총콜레스테롤치가 상당히 높았으며 S-5군과 S- 10군에서는 AC군에 비해 통계적으로 유의하게 낮은 경향을 보였다. Liu 등(29)은 중성지방은 체내 총콜레스테롤치에 영향을 받으며 높은 체콜레스테롤은 간에서 지방산의 de novo 합성과 함께 중성지방의 합성을 증가시킨다고 보고하였다.
- 의 양을 4주간 매일 경구투여하였다. 그 결과 녹차추출물 투여군에서는 대조군 에 비해 흰쥐 꼬리에서의 출혈시간을 증가시켜 항혈액응고효과가 다른 추출물에 비해 뛰어났으며 메밀과 포도잎 추출물은 흰쥐의 체내 지질과산화작용을 억제하는 능력이 탁월하였다. 이렇듯 각 추출물에 따라 나타내는 생리활성에 약간씩 차이가 있었기 때문에 이들을 단독으로 사용하기보다는 혼합하여 사 용하였을때 상승효과가 있을 것으로 예상하고 본 연구를 계획 하였다.
- 단 고콜레스테롤 식이를 급여한 군에서 HDL-콜레스테롤 치는 약간 감소하고 LDL-콜레스테롤치는 약간 증가하였으나 전체적으로 고콜레스테롤혈증을 유발시키는데 있어서 민감성을 보이지 않았다. 그러나 본 연구에서 고지방/고콜레스테롤 식이를 섭취시킨 golden Syrian 햄스터에 있어서 동맥경화증이 잘 유발되어 SD-rat을 사용했을 때와 차이를 나타내었으며 이를 토대로 앞으로의 동맥경화실험의 동물모델로써 햄스터모델을 사용하는 것이 유용함을 확인할 수 있었다.
- 이로써 녹차, 메밀, 포도잎 추출물을 함유한 타블렛 제품의 섭취로 인해 동맥경화가 유발된 햄스터의 혈중 중성지방, 총콜 레스테롤, non-HDL-콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤치를 감소 시켜서 혈중의 지질조성이 개선됨을 확인하였다. 그리고 5%를 투여한 군에 비해 10%를 투여한 군에서 더 우수한 효과가 나타나서 농도의존적인 경향을 보임을 알 수 있었다. 전보(12)에서 SD-rat을 통해 고콜레스테롤혈증을 유발시킨 경우에 혈중 중성지질은 정상대조군과 차이를 보이지 않았고 총콜레스테롤 치는 정상대조군에 약간 증가하였으나 통계적인 유의차가 없었다.
- 특히 S-5군이 11% 감소한 것에 비해 S-10군에서 총콜레스테롤치는 약 22% 감소하여서 농도의존적인 경향을 보였다Pitman 등의 연구(13)에서는 atherogenic diet와 로바스타틴을 같이 섭취한 경우에 총콜레스테롤 함량이 정 상대조군과 같은 정도로 회복되는 것으로 나타났다. 그리고 동 맥경화유발 식이를 섭취한 군에 비해 로바스타틴을 같이 섭취 한 군에서 총 콜레스테롤 함량이 약 63.7% 감소하는 경향을 보였다. 본 연구의 감소폭보다 훨씬 컸으며 이는 Pitman의 연 구기간이 본 연구보다 더 긴 11주였던 점과 시료의 종류 및 투 여량의 차이에 따라 기인하는 것으로 생각할 수 있었다.
- 1에 나타내었다. 그림에서 보는 것처럼 실험 시작시에는 전군에서 체중이 약 105 g 내외로 동일하게 시작되었지만 동맥경화유발 사료를 섭취한 AC군의 체중은 정상대조군에 비해 실험이 진행되는 동안 점차로 증가하여 실험 마지막 주에는 다른 세군에 비해 유 의하게 높은 경향을 보였다. 반면에 S-5군과 S-10군은 실험시 작 4주째부터 AC군에 비해 체중이 증가하는 폭이 줄어들기 시 작해서 마지막인 7주에는 정상대조군과 유사한 경향을 보였다.
- 전보(12)에서 SD-rat을 통해 고콜레스테롤혈증을 유발시킨 경우에 혈중 중성지질은 정상대조군과 차이를 보이지 않았고 총콜레스테롤 치는 정상대조군에 약간 증가하였으나 통계적인 유의차가 없었다. 단 고콜레스테롤 식이를 급여한 군에서 HDL-콜레스테롤 치는 약간 감소하고 LDL-콜레스테롤치는 약간 증가하였으나 전체적으로 고콜레스테롤혈증을 유발시키는데 있어서 민감성을 보이지 않았다. 그러나 본 연구에서 고지방/고콜레스테롤 식이를 섭취시킨 golden Syrian 햄스터에 있어서 동맥경화증이 잘 유발되어 SD-rat을 사용했을 때와 차이를 나타내었으며 이를 토대로 앞으로의 동맥경화실험의 동물모델로써 햄스터모델을 사용하는 것이 유용함을 확인할 수 있었다.
- 0 이상의 수치를 나타낼 때 위험신호 로 인지된다(24). 동맥경화지수와 심장위험지수가 높을수록 동 맥경화나 심혈관계 질환에 걸릴 위험성이 높다고 할 수 있는 데, 본 실험에서는 NC군에 비해 AC군의 동맥경화지수와 심장 위험지수가 유의적으로 높았으며 S-5군과 S-10군의 지수는 낮은 경향을 보였다. Faia 등의 연구(25)에서는 햄스터에게 1% 콜레스테롤과 22% coconut oil을 함유한 식이를 12주, 24주, 49주간 급여한 결과 혈중 총콜레스테롤 함량이 급격하게 증가하여 심장위험지수가 정상대조군에 비해 약 10배 정도 높아졌다 고 보고하였다.
- 혈중 LDL-콜레스테롤은 섭취 4주째에 약 4배 정도 증가하였고 섭취한 지 약 10개월 후에는 대조군에 비해 약 13배 정도 증가하였다고 했다. 또한 이와 더불어 대동맥궁 내의 혈관벽을 관찰한 결과 2주째부터 mononuclear cell이 혈 관내벽에 붙기 시작하고 약 4주째 말기에는 특히 대동맥궁 내에 oil red O에 의해 붉게 염색되는 지질의 축적이 관찰되었다. 6개월정도 지난후에는 smooth muscle cell에 지질이 축적되기 시작하였고 10개월 후에는 사람의 atherosclerotic plaque와 유사한 거대한 콜레스테롤 덩어리와 칼슘축적 및 괴사가 일어나는 등의 병변이 생겼다.
- Faia 등의 연구(25)에서는 햄스터에게 1% 콜레스테롤과 22% coconut oil을 함유한 식이를 12주, 24주, 49주간 급여한 결과 혈중 총콜레스테롤 함량이 급격하게 증가하여 심장위험지수가 정상대조군에 비해 약 10배 정도 높아졌다 고 보고하였다. 본 연구에서는 Faia 등의 연구(25)에서 사용된 식이보다는 콜레스테롤과 coconut oil의 함유량이 적어 총 콜레 스테롤치가 증가하는 폭은 작았지만 그래도 정상대조군에 비해 동맥경화유발식이를 급여한 군의 심장위험지수는 높아지는 경향을 보였다. 특히 S-5군에 비해 S-10군의 지수가 더 낮아서 타블렛 제품의 섭취량이 증가할수록 동맥경화에 대한 위험성 을 감소시키는 효과가 크다고 할 수 있었다.
- 6개월정도 지난후에는 smooth muscle cell에 지질이 축적되기 시작하였고 10개월 후에는 사람의 atherosclerotic plaque와 유사한 거대한 콜레스테롤 덩어리와 칼슘축적 및 괴사가 일어나는 등의 병변이 생겼다. 본 연구에서도 콜레스테롤 0.05%와 coconut oil 10%를 함유한 사료를 급여한지 7주째에 혈액검사와 해부 학적 검사를 실시한 결과 정상대조군에 비해 동맥경화유발대 조군에서 총콜레 스테 롤과 LDL 콜레 스테 롤이 증가하였으며 대 동맥궁내에 지질이 축적되었음을 확인할 수 있었다. 단 본 연구에서는 Nistor 등의 연구(8)에 비해 콜레스테롤과 지방의 첨 가량이 적어서 그 영향으로 상대적으로 증가폭이 작았다.
- 7% 감소하는 경향을 보였다. 본 연구의 감소폭보다 훨씬 컸으며 이는 Pitman의 연 구기간이 본 연구보다 더 긴 11주였던 점과 시료의 종류 및 투 여량의 차이에 따라 기인하는 것으로 생각할 수 있었다. 햄스 터를 대상으로 한 많은 연구들(15-17)에서 포화지방과 콜레스테롤의 급여는 혈중의 LDL receptor의 활성을 down-regulation하고 간장에서의 LDL 생산을 증가 시킴으로써 혈장콜레스테롤 과 중성지질의 농도를 증가시킨다고 보고하였다.
- Table 3에서는 7주간의 식이섭취량과 식이효율을 나타내었다. 식이 섭취량은 NC군과 S-5군이 AC군과 S-10군에 비해 유의하 게 낮았으나 식이효율을 산출한 결과 전군에서 유의한 차이를 보이지 않았다.
- 7주령의 FIB golden Syrian 햄스터에게 동맥경화 유발식이에 녹차추출물, 메밀추출물 및 포도잎 추출물을 함유한 타블렛 제 품을 각각 5%와 10%로 첨가하여 7주간 사육하였을 때 햄스 터 체내의 지질성분과 대동맥 내에서의 지방의 축적 정도에 미치는 영향을 조사하였다. 실험 결과 녹차, 메밀, 포도잎 추출물 을 함유한 타블렛 제품은 동맥경화유발식이를 섭취하는 햄스 터의 혈중 중성지방과 총콜레스테롤치를 감소시켰고, 대동맥궁 내에서의 지방의 축적을 예방하였고, 간장내 중성지방과 총콜 레스테롤치를 감소시키는 것으로 나타났다. 특히 5%를 첨가한 군보다 10%를 첨가한 군에서 더 높은 효과를 나타내어 농도 의존적인 경향을 보였다.
- 이는 Pitman 등의 연 구(13)에서 햄스터에게 atherogenic diet를 섭취시킨 군의 경우 대조군에 비해 체중의 증가량이 유의하게 높았으며 혈중의 콜 레스테롤치를 낮추는 약물로 알려진 로바스타틴을 atherogenic diet와 함께 섭취시킨 결과 체중의 증가량이 정상대조군과 유 사했다는 결과와 일치하였다. 이러한 결과로 볼 때 AC군의 경우 동맥경화유발식이에 포함된 coconut oil과 cholesterol에 의해 체중이 증가한 것으로 보이며 S-5군과 S-10군은 타블렛 제품의 섭취로 인해 동맥경화유발 햄스터의 체중의 증가가 억제되 었다고 할 수 있었다.
- 특히 5%를 첨가한 군보다 10%를 첨가한 군에서 더 높은 효과를 나타내어 농도 의존적인 경향을 보였다. 이러한 결과를 통해 녹차, 메밀 및 포 도잎 추출물 분말을 이용하여 식이 보조제의 형태로 개발한 타 블렛 제품이 동맥경화를 예방하는 식품으로써 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
- 2-C와 ㅇ S-5군과 S-10군의 대동 맥궁 내부의 사진으로 S-5군은 약간씩 붉은 부분이 보이고 S- 10군은 거의 붉게 염색된 부분이 보이지 않아 NC군과 유사한 상태였다. 이로써 고지방/고콜레스테롤 식이의 섭취에도 불구하고 타블렛 제품에 의해 대동맥내의 지질의 축적이 억제되는 것을 확인할 수 있었다. 동맥경화유발 식이를 섭취한 햄스터의 foam cell 축적을 예방하는 것으로는 bile acid sequestrant, cho- lesterylamine 혹은 a-1 adrenergic inhibitor와 doxazosin 등(27, 28)이 있으며 lovastatin(13, 19)도 동일한 작용이 있음이 밝혀졌다.
- 이로써 녹차, 메밀, 포도잎 추출물을 함유한 타블렛 제품의 섭취로 인해 동맥경화가 유발된 햄스터의 혈중 중성지방, 총콜 레스테롤, non-HDL-콜레스테롤 및 HDL-콜레스테롤치를 감소 시켜서 혈중의 지질조성이 개선됨을 확인하였다. 그리고 5%를 투여한 군에 비해 10%를 투여한 군에서 더 우수한 효과가 나타나서 농도의존적인 경향을 보임을 알 수 있었다.
- 일반적으로 볼 때 본 연구에서 사용한 햄스터의 경우에 GOT 활성은 약 35- 57 U/L의 범위에 있을 때 정상수준이며 GPT 활성은 47-67 U/ L 정도에 들면 정상수준이라고 힌-다. 이에 따르면 S-10군을 제 외하고는 대체적으로 정상수준이라고 할 수 있었으며 녹차, 메 밀, 포도잎 추출물을 함유한 타블렛 제품을 식이에 5%와 10% 첨가한 식이가 햄스터의 간손상을 유발하지 않아서 타블렛 제품의 첨가량이 적정한 선이었음을 알 수 있었다. 혈중 포도당 농도는 전군에서 유의한 차이를 보이지 않았다.
- 실험 결과 녹차, 메밀, 포도잎 추출물 을 함유한 타블렛 제품은 동맥경화유발식이를 섭취하는 햄스 터의 혈중 중성지방과 총콜레스테롤치를 감소시켰고, 대동맥궁 내에서의 지방의 축적을 예방하였고, 간장내 중성지방과 총콜 레스테롤치를 감소시키는 것으로 나타났다. 특히 5%를 첨가한 군보다 10%를 첨가한 군에서 더 높은 효과를 나타내어 농도 의존적인 경향을 보였다. 이러한 결과를 통해 녹차, 메밀 및 포 도잎 추출물 분말을 이용하여 식이 보조제의 형태로 개발한 타 블렛 제품이 동맥경화를 예방하는 식품으로써 효과가 있음을 확인할 수 있었다.
- 본 연구에서는 Faia 등의 연구(25)에서 사용된 식이보다는 콜레스테롤과 coconut oil의 함유량이 적어 총 콜레 스테롤치가 증가하는 폭은 작았지만 그래도 정상대조군에 비해 동맥경화유발식이를 급여한 군의 심장위험지수는 높아지는 경향을 보였다. 특히 S-5군에 비해 S-10군의 지수가 더 낮아서 타블렛 제품의 섭취량이 증가할수록 동맥경화에 대한 위험성 을 감소시키는 효과가 크다고 할 수 있었다.
- 혈중 HDL 콜레스테롤치는 NC군에서 제일 낮았으며 동맥경 화유발식이를 섭취한 AC군에서 가장 높았다. 또한 S-5군과 S- 10군에서 AC군에 비해 조금 감소하는 경향을 보였다.
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