유전자수준의 염기서열에 근거를 둔 유전자 감식기법을 활용하여 개체간의 유전적 차이로 한우육과 젖소육 혹은 수입육의 구별방법을 개발하기 위한 연구가 많이 수행되었다. 그 중 real-time PCR 판별방법은 기존 PCR의 단점인 허위양성을 배제시켜 그 결과의 신뢰성이 높으며, PCR 산물들의 제한효소에 의한 절단 및 겔에서의 확인 등의 과정을 생략시킬 수 있어 짧은 시간 내에 다량의 시료를 분석할 수 있고 민감도가 높아 쇠고기가 포함된 가공식품의 분석도 가능하다는 장점이 있다. 본 연구는 시중에서 한우로 유통되는 쇠고기(생육 또는 양념육)의 DNA를 추출하여 real-time PCR을 통해서 모색유전자의 유전자 형(C-type, C/T-type or T-type)으로 한우육과 젖소육 및 수입육을 구분하였다. 한우육만을 판매한다는 시중 음식점 41개소에서 쇠고기(생육 또는 양념육)를 수거하여 분석한 결과, 분석된 41개의 시료 중 29개가 한우 유전자형으로, 12개의 시료가 젖소 또는 수입육 유전자형으로 판별되었다. 따라서 분석된 시료들의 한우육(T-type) 비율은 $70.1\%$, 그리고 젖소육 또는 수입육 비율은 $29.3\%$(C/T-type; $12.2\%$, C-type; $17.1\%$)이었다.
유전자수준의 염기서열에 근거를 둔 유전자 감식기법을 활용하여 개체간의 유전적 차이로 한우육과 젖소육 혹은 수입육의 구별방법을 개발하기 위한 연구가 많이 수행되었다. 그 중 real-time PCR 판별방법은 기존 PCR의 단점인 허위양성을 배제시켜 그 결과의 신뢰성이 높으며, PCR 산물들의 제한효소에 의한 절단 및 겔에서의 확인 등의 과정을 생략시킬 수 있어 짧은 시간 내에 다량의 시료를 분석할 수 있고 민감도가 높아 쇠고기가 포함된 가공식품의 분석도 가능하다는 장점이 있다. 본 연구는 시중에서 한우로 유통되는 쇠고기(생육 또는 양념육)의 DNA를 추출하여 real-time PCR을 통해서 모색유전자의 유전자 형(C-type, C/T-type or T-type)으로 한우육과 젖소육 및 수입육을 구분하였다. 한우육만을 판매한다는 시중 음식점 41개소에서 쇠고기(생육 또는 양념육)를 수거하여 분석한 결과, 분석된 41개의 시료 중 29개가 한우 유전자형으로, 12개의 시료가 젖소 또는 수입육 유전자형으로 판별되었다. 따라서 분석된 시료들의 한우육(T-type) 비율은 $70.1\%$, 그리고 젖소육 또는 수입육 비율은 $29.3\%$(C/T-type; $12.2\%$, C-type; $17.1\%$)이었다.
Real time-polymerase chain reaction (RT-PCR) is currently considered as the most sensitive method to detect low abundant DNAs in samples. Compared to conventional PCR, real-time PCR has a high reliability because of excluding false-positive results and can allow a simultaneous faster detection and q...
Real time-polymerase chain reaction (RT-PCR) is currently considered as the most sensitive method to detect low abundant DNAs in samples. Compared to conventional PCR, real-time PCR has a high reliability because of excluding false-positive results and can allow a simultaneous faster detection and quantification of target DNAs. This study was carried out to identify the Hanwoo (Korean native cattle) beef by genotyping after DNA extraction of commercial beef in 41 restaurants. Since Hanwoo, Holstein and imported cattle meat have different patterns in the MC1R gene associated with the coat colors of cattles (C-type, C/T-type or T-type), we could identify the genotype using real-time PCR The result of real-time PCR assay for beef samples in 41 restaurants which are asserted to sell Hanwoo beef only, showed that 29 of 41 samples were Hanwoo beef gene type (T-type) and 12 of 41 samples were Holstein or imported cattle gene type (C-type or C/T-type). Therefore, the proportion of Han-woo beef was $70.7\%$ and the proportion of Holstein or imported cattle meat was $29.3\%(C/T-type; 12.2\%,\;C-type; 17.1\%)$.
Real time-polymerase chain reaction (RT-PCR) is currently considered as the most sensitive method to detect low abundant DNAs in samples. Compared to conventional PCR, real-time PCR has a high reliability because of excluding false-positive results and can allow a simultaneous faster detection and quantification of target DNAs. This study was carried out to identify the Hanwoo (Korean native cattle) beef by genotyping after DNA extraction of commercial beef in 41 restaurants. Since Hanwoo, Holstein and imported cattle meat have different patterns in the MC1R gene associated with the coat colors of cattles (C-type, C/T-type or T-type), we could identify the genotype using real-time PCR The result of real-time PCR assay for beef samples in 41 restaurants which are asserted to sell Hanwoo beef only, showed that 29 of 41 samples were Hanwoo beef gene type (T-type) and 12 of 41 samples were Holstein or imported cattle gene type (C-type or C/T-type). Therefore, the proportion of Han-woo beef was $70.7\%$ and the proportion of Holstein or imported cattle meat was $29.3\%(C/T-type; 12.2\%,\;C-type; 17.1\%)$.
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문제 정의
따라서 본 연구는 시중 음식점에서 한우(생육 또는 양념육)로 유통되는 쇠고기의 DNA를 추출하여 real-time PCR을 통해서 모색 유전자의 유전자 형(T-Type 또는 C-type; C/T- type)을 분석하여 한우육과 젖소육 및 수입육을 구분하는 데 그 목적이 있다.
제안 방법
MC1R 유전자의 PCR 반응 조건은 GeneAmp PCR System 9600(Perkin-Elmer Cetus, USA)을 이용하여 다음과 같은 조건하에서 실시하였다. 즉, 분리 추출된 template DNA 10~lOOng, primer mixture 2"L, probe mixture 1 µL, X2 mastermixture 5"L를 첨가하여 PCR 반응액을 총 10µL로 조정하였다.
PCR cyclee 최초 50℃에서 2분간 예비가열 후 초기 변성을 95℃에서 10분간 수행하였다. 그리고 변성을 위해 92℃ 에서 15초간, 결합(annealing, 60℃에서 1분)의 cycle을 총 35회 반복한 후 DNA 증폭 과정을 종료하였다.
R)가 구별된다. 따라서 본 연구에서는 포유동물의, 모색 유전에 관여하는 MC1R 유전자의 99번째 아미노산을 코딩하는 코돈의 단일염기다 형성 (SNP; single nucleotide polymor- phism)부위 만을 real-time PCR을 이용한 택맨프로브(Taqmanprobe) 법을 수행하여 측정함으로써 한우육과 젖소육 및 수입육의 판별을 수행하였다. 그 결과 한우 유전자형(T-type)은 그래프상에서 좌측 상단에 나타나며, 젖소 또는 수입육 유전자형 중 C-typee 우측 하단부에서 나타나고 C/T-typee 중앙부에 나타난 다(Fig.
대상 데이터
본 실험의 공시재료로는 2004년 12월 중 시중 음식점 41개소에서 한우(생육 또는 양념육)로 판매되고 있는 쇠고기를 구입하여 이용하였다.
일차적으로 PCR 반응을 이용하여 한우 판별 방법에 따라 다음과 같이 표준시료와 젖소시료(ALI) 또는 젖소와 한우(ALI&D) 혼합시료, 한우(ALH) 시료를 각각 준비하였다.
성능/효과
분석된 41개의 시료 중 29개가 한우 유전자형(T-type)으로, 12개의 시료가 젖소 또는 수입육 유전자형 (C/T-type or C-type)으로 판별되었다. PCR 산물에 형광물질을 사용하여 형광 물질의 세기 및 형광물질의 차이에 따른 검출감도를 측청하는 Post PCR 결과에서 (Fig. 3), 적색을 나타내는 그래프는 한우 유전자형(T-type)이며, 청색과 적색이 함께 나타나는 그래프는 젖소 또는 수입육 유전자형 중 C/T-type이고 C-typee 청색으로 만 나타났다. 위 연구 결과를 토대로, 분석된 시료들의 한우육(T-type) 비율은 70.
따라서 본 연구에서는 포유동물의, 모색 유전에 관여하는 MC1R 유전자의 99번째 아미노산을 코딩하는 코돈의 단일염기다 형성 (SNP; single nucleotide polymor- phism)부위 만을 real-time PCR을 이용한 택맨프로브(Taqmanprobe) 법을 수행하여 측정함으로써 한우육과 젖소육 및 수입육의 판별을 수행하였다. 그 결과 한우 유전자형(T-type)은 그래프상에서 좌측 상단에 나타나며, 젖소 또는 수입육 유전자형 중 C-typee 우측 하단부에서 나타나고 C/T-typee 중앙부에 나타난 다(Fig. 2).
한우육만을 판매한다는 시중 음식점 41개소에서 2004년 12월 중 쇠고기(생육 또는 양념육)를 수거하여 분석한 결과는 Table 1에 나타내었다. 분석된 41개의 시료 중 29개가 한우 유전자형(T-type)으로, 12개의 시료가 젖소 또는 수입육 유전자형 (C/T-type or C-type)으로 판별되었다. PCR 산물에 형광물질을 사용하여 형광 물질의 세기 및 형광물질의 차이에 따른 검출감도를 측청하는 Post PCR 결과에서 (Fig.
3), 적색을 나타내는 그래프는 한우 유전자형(T-type)이며, 청색과 적색이 함께 나타나는 그래프는 젖소 또는 수입육 유전자형 중 C/T-type이고 C-typee 청색으로 만 나타났다. 위 연구 결과를 토대로, 분석된 시료들의 한우육(T-type) 비율은 70.7%, 그리고 젖소육 또는 수입육비율은 29.3%(C/T-type;12.2%, C-type; 17.1%)이었다.
한편 본 연구 결과에서는 전체 조사 대상 시중음식점(41개 소) 중 29개 업소(약 70%)는 '한우육, 을 정상적으로 판매한 것으로 검사되었다. 현재 육류의 복잡한 소비.
후속연구
현재 육류의 복잡한 소비.유통구조를 감안할 때 시중음식점에서도 육류의 지입시 중간 유통업체가 제공하는 서류검사에만 그칠 것이 아니라, 공급받고 있는 육류의 정기적인 유전자 검사 등보다 적극적이고 능동적인 방법을 통해 보다 안전하고 믿을 수 있는 '한우육'을 확보함은 물론 정부에서 적극 추진하는 '식육원산지 표시제'의 조기 정착과 아울러 우리나라 한우산업의 발전과 소비자의 알 권리 충족 및 안전한 식탁의 확보라는 중대한 목표를 달성하기 위해 다각적인 노력을 기울여야 할 것으로 사료된다.
증폭된 소의 MC1R 유전자도 품종에 따른 차이점을 그대로 간직하고 있으며, 유전자의 특정 부분을 인식해서 절단하는 제한효소를 이용해 복제된 MC1R 유전자를 절단하면 소의 품종에 따른 유전자 절단 양상이 독특하게 나타난다. 이후 유전자를 크기별로 배열하고 관찰할 수 있는 장치를 사용하여 유전자의 절단 여부를 확인하면 한우와 젖소 및 기타 소품종에 대한 분리가 가능하다. 그러나 PCR 혹은 PCR-RFLP을 이용한 기존의 방법은 PCR의 단점인 허위양성(false-positive)이 나타날 수 있고, PCR 산물의 제한 효소에의 한 절단과정 및 전기영동을 통한 겔에서의 확인 과정이 추가적으로 필요하게 되어 많은 시간이 소요되며 다량의 시료처리가 어려운 문제점이 있다.
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