[논문]Cytochrome B 유전자의 PCR-RFLP Marker에 의한 식육자원의 축종 판별

신성철; 최은주; 허연범; 백명기; 권수연; 김보현; 정구용; 정의룡

문제 정의

본 연구는 cytochrome B 유전자의 PCR-RFLP 분석기법을 이용하여 다양한 식육자원 및 각종 가공 육제품의 원료육에 대한 정확하고 재현성 높은 축종 및 육종 감별기술을 개발하기 위하여 수행되었다. 국내에서 유통되고 았는 7종류 축종(닭, 양, 돼지, 소, 사슴, 말, 염소)의 육류로부터 cytochrome B 유전자의 특정 염기서열을 포함하는 prim아를 설계 제작하여 PCR-RFLP 분석을 실시하였다.
Cytochrome B 유전자는 척추동물에게만 있는 미토콘드리아 DNA의 일종으로 각 축종별로 고유한 염기서열을 지니고 있는 것으로 알려져 있어 동물의 계통발생학적 연구에 널리 이용되어져 왔고 최근에는 동물의 축종감별에 유용한 후보유전자로 주목되고 있다(1). 본 연구의 목적은 cytochrome B 유전자의 PCR-RFLP 분석기법을 이용하여 다양한 식육자원 및 각종 가공 육제품의 원료육에 대한 정확하고 재현성 높은 축종 및 육종 감별기술을 개발하는데 있다.

제안 방법

lyM, dNTP 각 250㎛, 10 X PCR buffer 2㎕, 그리고 Taq DNA polymerase 1 unit을 첨가하여 최종 부피를 20㎕로 조정하였다. PCR cyclee 최초 94℃에서 1분간 예비가열 한 후, 94P에서 20초, 55℃에서 10초, 그리고 72℃에서 40초간의 cycle을 총 30회 반복한 다음 마지막으로 72℃에서 2분간 가열하고 PCR 반응을 종료하였다. PCR 종료 후 각 축종별 PCR 증폭산물을 Haem 또는 Hinf I 제한효소로 각각 절단한 다음 4% agarose gel 전기영동으로 DNA band를 검출하고, 각 축종별 RFLP 양상을 비교 분석하였다.
7종류의 축종닭, 양, 돼지, 소, 사슴, 말, 염소)에 대한 cytochrome B 유전자의 PCR-RFLP 분석을 위한 primer 및 제한효소는 Table 1과 같다. PCR 반응액 조성은 genomic DNA 50ng, sense primer 및 anti-sense primer 각 O.lyM, dNTP 각 250㎛, 10 X PCR buffer 2㎕, 그리고 Taq DNA polymerase 1 unit을 첨가하여 최종 부피를 20㎕로 조정하였다. PCR cyclee 최초 94℃에서 1분간 예비가열 한 후, 94P에서 20초, 55℃에서 10초, 그리고 72℃에서 40초간의 cycle을 총 30회 반복한 다음 마지막으로 72℃에서 2분간 가열하고 PCR 반응을 종료하였다.
PCR cyclee 최초 94℃에서 1분간 예비가열 한 후, 94P에서 20초, 55℃에서 10초, 그리고 72℃에서 40초간의 cycle을 총 30회 반복한 다음 마지막으로 72℃에서 2분간 가열하고 PCR 반응을 종료하였다. PCR 종료 후 각 축종별 PCR 증폭산물을 Haem 또는 Hinf I 제한효소로 각각 절단한 다음 4% agarose gel 전기영동으로 DNA band를 검출하고, 각 축종별 RFLP 양상을 비교 분석하였다.
국내에서 유통되고 았는 7종류 축종(닭, 양, 돼지, 소, 사슴, 말, 염소)의 육류로부터 cytochrome B 유전자의 특정 염기서열을 포함하는 prim아를 설계 제작하여 PCR-RFLP 분석을 실시하였다. 각 축종의 근육조직으로부터 genomic DNA를 추출하고 PCR 증폭 반융을 수행한 후 얻어진 PCR 증폭산물(359 bp)을 두 종류의 제한효소(Hae ffl 및 Hinf I )로 각각 절단한 결과 축종 간 그리고 제한효소 간에 명확한 차이를 보이는 종 특이적인 PCR-RFLP marker를 검출하였다. 따라서, 본 연구에서 개발한 cytochrome B 유전자의 종 특이적 PCR-RFLP marker는 각종 식육 및 가공 육제품의 육종 및 축종 판별에 매우 유용한 DNA marker로 이용될 수 있을 것이다.
본 연구는 cytochrome B 유전자의 PCR-RFLP 분석기법을 이용하여 다양한 식육자원 및 각종 가공 육제품의 원료육에 대한 정확하고 재현성 높은 축종 및 육종 감별기술을 개발하기 위하여 수행되었다. 국내에서 유통되고 았는 7종류 축종(닭, 양, 돼지, 소, 사슴, 말, 염소)의 육류로부터 cytochrome B 유전자의 특정 염기서열을 포함하는 prim아를 설계 제작하여 PCR-RFLP 분석을 실시하였다. 각 축종의 근육조직으로부터 genomic DNA를 추출하고 PCR 증폭 반융을 수행한 후 얻어진 PCR 증폭산물(359 bp)을 두 종류의 제한효소(Hae ffl 및 Hinf I )로 각각 절단한 결과 축종 간 그리고 제한효소 간에 명확한 차이를 보이는 종 특이적인 PCR-RFLP marker를 검출하였다.
국내에서 유통되고 있는 수입산 및 국내산 식육자원 7종(닭, 양, 돼지, 소, 사슴, 말 및 염 소)의 육류를 대상으로 축종 특이적인 PCR-RFLP marker 분석을 위해 cytochrome B 유전자의 특정 염기서열을 포함하는 primer를 이용하여 증폭한 후, PCR 증폭산물의 전기영동상은 Figure 1에 제시된 바와 같다. 본 연구에서 공시한 7종류 축종의 육류시료 모두에서 기대했던 359 bp 크기의 DNA 단편이 검출되어 cytochrome B 유전자의 PCR 증폭이 성공적으로 이루어 졌음을 알 수 있었다.
본 연구에서 공시한 7종류 축종의 육류시료 모두에서 기대했던 359 bp 크기의 DNA 단편이 검출되어 cytochrome B 유전자의 PCR 증폭이 성공적으로 이루어 졌음을 알 수 있었다. 그리고 각 PCR 증폭산물을 제한효소(HaelD 또는 Hinf I)로 각각 절단하고 4% agarose gel을 이용하여 전기영동한 후 각 제한효소 인지부위의 수 및 절단 위치에 따라 검출된 PCR-RFLP 전기영동상은 Figure 2와 같고, 축종별 그리고 제한효소별로 확인된 DNA 단편들의 크기 및 수는 Table 2에 제시하였다.

대상 데이터

Figure 2. DNA profiles of PCR products of cytochrome B gene digested with HaelU 죠nd Hinf I enzymes in seven animal species, respectively, chicken(lanes 1 and 8), sheepOanes 2 and 9), pig(lanes 3 and 10), cattle(lanes 4 and 11), deer(lanes 5 and 12), horse(lanes 6 and 13), goat(lanes 7 and 14). M : size marker(100 bp DNA ladder)
본 연구에 사용한 공시재료 중에서 면양육은 뉴질랜드산 양고기 수입회사로부터 냉동육 상태로 구입하여 사용하였고, 마육은 한국 마사회로부터 시료를 제공받아 이용하였으며 우육, 돈육, 염소육, 사슴육 및 닭고기는 시중에 유통되고 있는 냉동 또는 냉장육을 구입하여 사용하였다. 각 공시축의 근육조직(약 10g)으로부터 genomic DNA를 추출하고, TE buffer(10mM Tris-HCl pH 0.4, ImM EDTA)에 용해하여 template DNA 시료로 사용하였다.
본 연구에 사용한 공시재료 중에서 면양육은 뉴질랜드산 양고기 수입회사로부터 냉동육 상태로 구입하여 사용하였고, 마육은 한국 마사회로부터 시료를 제공받아 이용하였으며 우육, 돈육, 염소육, 사슴육 및 닭고기는 시중에 유통되고 있는 냉동 또는 냉장육을 구입하여 사용하였다. 각 공시축의 근육조직(약 10g)으로부터 genomic DNA를 추출하고, TE buffer(10mM Tris-HCl pH 0.

성능/효과

식육자원 7종류의 축종(닭, 양, 돼지, 소, 사슴, 말, 염소)을 대상으로 cytochrome B 유전자의 특정 염기서열 영역을 PCR로 증폭하고 특정 제한효소(HaelU 및 Hinf I)로 절단한 결과 Figure 2 및 Table 1에서 보는 바와 같이 각 축종 간의 DNA banding pattem에 명확한 차이를 보이는 종 특이적인 PCR-RFLP marker가 확인되었다. 따라서, cytochrome B 유전자의 종간 염기서열 보존성이 높은 DNA 영역을 PCR로 증폭한 다음 Hae Ⅲ 또는 Hinf I 제한효소를 이용하여 검출되는 RFLP markere 각종 식육 및 가공육제품 원료육의 축종 및 육종 감별에 이용 가능한 결과를 얻었다.
국내에서 유통되고 있는 수입산 및 국내산 식육자원 7종(닭, 양, 돼지, 소, 사슴, 말 및 염 소)의 육류를 대상으로 축종 특이적인 PCR-RFLP marker 분석을 위해 cytochrome B 유전자의 특정 염기서열을 포함하는 primer를 이용하여 증폭한 후, PCR 증폭산물의 전기영동상은 Figure 1에 제시된 바와 같다. 본 연구에서 공시한 7종류 축종의 육류시료 모두에서 기대했던 359 bp 크기의 DNA 단편이 검출되어 cytochrome B 유전자의 PCR 증폭이 성공적으로 이루어 졌음을 알 수 있었다. 그리고 각 PCR 증폭산물을 제한효소(HaelD 또는 Hinf I)로 각각 절단하고 4% agarose gel을 이용하여 전기영동한 후 각 제한효소 인지부위의 수 및 절단 위치에 따라 검출된 PCR-RFLP 전기영동상은 Figure 2와 같고, 축종별 그리고 제한효소별로 확인된 DNA 단편들의 크기 및 수는 Table 2에 제시하였다.
식육자원 7종류의 축종(닭, 양, 돼지, 소, 사슴, 말, 염소)을 대상으로 cytochrome B 유전자의 특정 염기서열 영역을 PCR로 증폭하고 특정 제한효소(HaelU 및 Hinf I)로 절단한 결과 Figure 2 및 Table 1에서 보는 바와 같이 각 축종 간의 DNA banding pattem에 명확한 차이를 보이는 종 특이적인 PCR-RFLP marker가 확인되었다. 따라서, cytochrome B 유전자의 종간 염기서열 보존성이 높은 DNA 영역을 PCR로 증폭한 다음 Hae Ⅲ 또는 Hinf I 제한효소를 이용하여 검출되는 RFLP markere 각종 식육 및 가공육제품 원료육의 축종 및 육종 감별에 이용 가능한 결과를 얻었다.

후속연구

각 축종의 근육조직으로부터 genomic DNA를 추출하고 PCR 증폭 반융을 수행한 후 얻어진 PCR 증폭산물(359 bp)을 두 종류의 제한효소(Hae ffl 및 Hinf I )로 각각 절단한 결과 축종 간 그리고 제한효소 간에 명확한 차이를 보이는 종 특이적인 PCR-RFLP marker를 검출하였다. 따라서, 본 연구에서 개발한 cytochrome B 유전자의 종 특이적 PCR-RFLP marker는 각종 식육 및 가공 육제품의 육종 및 축종 판별에 매우 유용한 DNA marker로 이용될 수 있을 것이다.
이상의 연구결과로부터 cytochrome B 유전자의 축종 간 염기서열 변이를 이용하는 PCR-RFLP marker 분석 기법은 생리적 및 생물학적 기능이 잘 알려진 특정 주 유전자를 대상으로 제한효소 인지부위 차이에 따른 축종감별 기술로서 random primer를 이용하는 RAPD 또는 SCAR 방법에 비하여 보다 정확하고 안정적이며 재현성이 보장된 분석 결과를 얻을 수 있어 DNA marker를 이용한 새로운 식육자원의 육종 및 축종감별 기술로 실용화가 가능할 것으로 기대된다.

내보내기 구분	파일저장 인쇄 메일전송
구성항목	기본정보 상세정보 관리번호, 논문명, 저널/프로시딩명, 저자 , 발행년, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, 발행기관 관리번호, 논문명, 대등논문명, 저자 , 저널/프로시딩명, 발행기관, 발행년, 발행언어, 권, 호, 시작페이지, 끝페이지, ISBN, ISSN, 주제분야, 키워드, 초록(한글), 초록(영문), 저자(소속기관)
저장형식	Text(ASCII format) Excel format RefWorks Direct Export RIS format (for Reference Manager, ProCite, EndNote), Scholar's Aids, Mendeley
메일정보	받는사람 (필수) @ 보내는사람 (선택) @ 제목 내용 KISTI 검색결과 이메일 서비스
안내	총 건의 자료가 검색되었습니다. 다운받으실 자료의 인덱스를 입력하세요. (1-10,000) 검색결과의 순서대로 최대 10,000건 까지 다운로드가 가능합니다. 데이타가 많을 경우 속도가 느려질 수 있습니다.(최대 2~3분 소요) 다운로드 파일은 UTF-8 형태로 저장됩니다. 파일의 내용이 제대로 보이지 않을실 때는 웹브라우저 상단의 보기 -> 인코딩 -> 자동선택 여부를 확인하십시오. ~ Text(ASCII format) Excel format

연합인증

Cytochrome B 유전자의 PCR-RFLP Marker에 의한 식육자원의 축종 판별 원문보기

초록
AI-Helper

AI 본문요약
AI-Helper

문제 정의

제안 방법

대상 데이터

성능/효과

후속연구

이 논문을 인용한 문헌

관련 콘텐츠

원문 보기

이 논문과 함께 이용한 콘텐츠

AI-Helper ※ AI-Helper는 오픈소스 모델을 사용합니다.

선택된 텍스트

연합인증

Cytochrome B 유전자의 PCR-RFLP Marker에 의한 식육자원의 축종 판별 원문보기

초록 용어보기논문에서 용어와 풀이말을 자동 추출한 결과로, 시범 서비스 중입니다. AI-Helper

AI 본문요약 엑셀 다운로드 AI-Helper

문제 정의

제안 방법

대상 데이터

성능/효과

후속연구

이 논문을 인용한 문헌

관련 콘텐츠

원문 보기

이 논문과 함께 이용한 콘텐츠

AI-Helper ※ AI-Helper는 오픈소스 모델을 사용합니다.

선택된 텍스트

초록
AI-Helper

AI 본문요약
AI-Helper