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제안 방법
- 실험 결과 각분획별 TLC 패턴을 알아보았다. 60% 메탄올 분획물에서 phenolics로 예상되는 물질과 alkaloids로 예상되는 물질이 관찰되었고 30% 메탄올 분획물에서는 phenolics로 예상되는 물질이 일부 확인되었고, 이를 바탕으로 DPPH free radical에 대한 scavenging activity와 LDL의 lipidperoxidation을 이용한 TEARS assay로 항산화 활성을 실험하였다. 그 결과 대부분의 H2O 분획물과 100% MeOH 분획물을 제외한 30% MeOH, 60% MeOH 분획물은 농도의존적으로 항산화 활성이 증가하였으며, 이 두 분획물은 Vitamin C와 비교해볼 때 강한 활성을 나타내었다.
- SOD 활성은 Marklund 등의 방법에 따라 각 분획을 (50 mM tris buffer + 10 mM EDTA, pH 8.5)의 3000, 2000, 1000, 500 및 250 ppm 5가지 농도로 조제한 용액 0.1 mL에 7.2 mM pyrogallol 0.1 mL와 50 mM tris buffer +10 mM EDTA, pH 8.5 1.3 mL를 가하였다. votex로 2 sec간 진탕한 후 37°C에서 10 min간 I항온배양 하였다.
- 각 시료의 지질과 산화 억제 효과를 비교 검토하기 위해서 CiP에 의해 유도되는 과산화지질의 생성을 50% 억제하는데 필요한 시료의 농도(ICG를 측정한다.
- 1 g을 달아 메탄올 1 mL 를 넣고 녹여 이 액들을 검액으로 한다. 검액을 각각 20 “L씩을 박층 크로마토그래프용 실리카겔을 써서 만든 박층판에 점적 하고 다음에 클로르포름 : 메탄올 : 물= 70 ： 30 ： 4를 전개용매로 하여 전개하였다. 각각 약 10 cm 전개한 다음 박층판을 바람에 말렸다.
- 여기에 10% 황산 시액을 고르게 뿌리고 105°C에서 잠시 가열하여 얻은 박층판 (Figure 1)과 vanillin-sulfuric acid 시액을 고르게 뿌린 다음 120笆에서 잠시 가열하여 박층판(Figure 2)을 바람에 말렸다. 그리고 dragendorf 시액을 고르게 뿌린 다음 105°C에서 잠시 가열하여 얻은 박층판(Figure 3)으로 확인 시험하였고, 마지막으로 Ethanolic-FeCh solution 시액 을 뿌린 다음 박층판(Figure 4)을 바람에 말려 확인시험 하였다. 다음 그림에서 좌측에서 순서대로 물분획물, 30 % MeOH, 60% MeOH, 100% MeOH, CHCI3의 순서임을 나타낸다.
- 를 얻었다. 수층을 Diaion HP-20를 통해 压0, 30%, 60%, 100% MeOH fraction으로 분획하였다(Nippon Rensui Co., Japan).
- 실험 결과 각분획별 TLC 패턴을 알아보았다. 60% 메탄올 분획물에서 phenolics로 예상되는 물질과 alkaloids로 예상되는 물질이 관찰되었고 30% 메탄올 분획물에서는 phenolics로 예상되는 물질이 일부 확인되었고, 이를 바탕으로 DPPH free radical에 대한 scavenging activity와 LDL의 lipidperoxidation을 이용한 TEARS assay로 항산화 활성을 실험하였다.
- 이후 spectrophotometer를 이용하여 420 nm에서 흡광도를 측정의 증가율을 2 min간 측정하여 안정할 때의 흡광도를 이용하였다. 양성대조약물로서는 L-ascorbic acid를 3000, 2000, 1000, 500, 250 ppm (50 mM tris buffer + 10 mM EDTA, pH 8.5)의 5가지 농도로 조제하여 측정하였다. 그리고 항온 배양 전후의 흡광도 비교를 위해 항온 배양하지 않은 한 군을 따로 위와 같은 과정을 거쳐 항온 배양 과정을 제외하여 실험을 이행하였다.
- 이런 분위기에 맞추어, 본 연구는 민간 약으로 주로 경구투여 하여 사용된 익모초를 피부 노화와 보습 및 염증과 관련하여 그 추출액이 피부에 적용 가능성이 있는지와 그와 관련하여 마사지, 반신욕, 족욕 등에서 어느 정도 노화를 막아주고 효과가 있는지, 익모초 추출액의 성분에 어떠한 효능 등이 더 있는지에 대하여, 익모초를 MeOH 을 이용 추출한 후 수지를 이용분획하고 각 분획에 대하여 항산화 작용 및 항염증 실험 등을 실시하였다.
대상 데이터
- Balance는 Sartorius AC211S (Sartorius Co., Germany) 의 것을 사용하였고, Centrifuge는 Centrikon T-1180 (Centrikon Co., Italy)와 Union 55R (Hanil science industrial Co., Korea)를 Shaking water bath는 Daihan~sci LSB045S (Daihan science Co., Korea)를 사용하였으며 Vortex mixer는 Thermolyne type 37600 mixer (Bioworld Co., U.S.A)의 제품을 사용하였고 UVMS spectrophotometer로서는 Human TU-1800PC (Insung Co., Korea), HP 8453 (Hewlett packard U.S.A)의 제품을 Plethysmometer는 model 7140 Ugo Basile (Italy)의 제품을 실험에 이용하였다.
- Chemical Reagent로서는 항산화 실험에 이용한 것으로서 L-Ascorbic acid (Sigma Chemical Co., U.S.A.), 1,1- diphenyl-2-picrylhydrazyl (Sigma Chemical Co., U.S.A.), Ethylenediaminetetraacetic acid-2Na (Sigma Chemical Co., U.S.A.), Human plasma LDL (Sigma Chemical Co.,U.S.A.), Potassium bromide (Sigma Chemical Co., U.S.A.), Sodium azide (Sigma Chemical Co., U.S.A.), 1,1,3,3-Tetraethoxypropane (Sigma Chemical Co., U.S.A.), Thiobarbituric acid (Fluka Chemika, Germany), Trichloroacetic acid (Sigma Chemical Co., U.S.A.)를 사용하였고, SOD 활성 실험으로서 Pyrogallol (Sigma Chemical Co, USA.)을 이용하였다.
- TLC 확인시험으로서 Adsorbent는 Kieselgel 60 F254 (Merck, Germany)> 구입하여 사용하였고, Solvent (v/v)는 CHCh : MeOH: HQ (70 : 30 : 4)와 EtOAc : EtOH: 压0 (8：2：1)의 조성을 이용하였으며 Detection으로는 EthanolicFeCh solution, 10%—H2SQ1 in EtOH와 Vanillin-sulfuric acid solution 그리고 Dragendorf solution을 이용하였고 이를 UV-lamp (254 nm)에서 측정하였다.
- 본 실험에 사용한 익모초는 2004년 경상북도 영천도동 근처에서 채취하여 중앙대학교 약품자원식물학실에서 정확이 식물학적 검정을 거친 후 사용하였다.
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