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문제 정의
- 토양 오염원 정량화를 위해 토양 에탄올 추출물을 발광 균주에 첨가하는 방법을 사용하였으므로, 에탄올 추출물에 포함된 토양 함유물들이 발광활성에 미치는 영향을 조사하였다. 오염되지 않은 토양의 에탄올 추출물에 함유된 물질들이 발광활성에 미치는 영향을 순수 에탄올 용액과 다양한 m-toluate 농도 (10〜150 mg/L) 조건에서 비교하였다.
- 에탄올 추출물을 발광균주에 첨가하여 토양 오염원 농도를 추정할 경우, 추출물에 함유되어 있는 유도제이외의 오염원들이 균주 발광활성에 미칠 수 있는 영향 가능성에 대해 조사하였다. 먼저 기초 실험으로 오염되지 않은 토양을 추출한 에탄올과 순수 에탄올 용액의 m-toluate 농도를 1 0-150 mg/L 되도록 조정 후, 발광 활성을 관찰하였다.
- 오염원의 (반)정량화를 위하여 발광 표준 검량선 이용 가능성 여부를 조사하였다. 균주의 발광 활성은 동일한 균주농도 (OD 기준) 에서도 상태에 따라 일부 상이한 발광 활성이 관찰되었으므로, 발광에 근거한 토양오염원 농도 조사는 매번 동일 활성의 균주를 표준 검량선 및 토양 추출물 노출에 사용하였다.
가설 설정
- 또한 현장에서 직접 이용이 가능하며, 환경 친화적인 기술이므로 특정 화합물에 오염된 생태계의 관리 및 감시에 적절하게 이용할 수 있을 것이며, 발광 유전자 재조합 균주를 이용하여 현장 적용을 위한 연구들이 이루어지고 있다. 8)발광박테리아는 빠른 반응, 적은 비용, 신속한 재생산으로 인해 biosensor로서 각광받고 있다?)Gu and Chang (2001)은 lac::lux 유전자 재조합 균주을 이용하여 poly cyclic 방향족 탄화수소의 biosensoi.로 이용하였다」"
제안 방법
- 본 연구에서는 유전자 재조합 발광 균주를 이용하여 특정 화합물로 오염된 토양을 신속히 관리할 수 있는 방법을 임의 오염된 토양에 적용하였다. 재조합된 Pseudomonas putida mt-2 KG1206 (이하 KG1206) 발광균주는 TOL- plasmid 의 lower operon promoter 인 Pm 과 /za-gene°] 재조합된 Pm-/wc reporter 플라즈미드와 TOL-plasmid를 보유하고 있으며, 톨루엔 계열 화합물 (parent compounds) 뿐 만 아니라, 이러한 화합물의 분해산물인 w-toluate 혹은 ben zoate 등에 노출시 발광을 생성하는 특성을 보유하고 있다 주요 연구 내용으로는 (1) 발광 균주 특성, 토양 함유물이 미치는 영향 등의 기초 조사와 함께, 토양에 임의오염된 m-toluate를 발광균주로 신속히 추정할 수 방법 (protocol)을 정립하였고, 오염 토양 중 %-toluate를 발광에 근거하여 추정하고, 추정치를 실제값 (기기분석)과 비교하였다.
- 오염된 토양에 적용하였다. 재조합된 Pseudomonas putida mt-2 KG1206 (이하 KG1206) 발광균주는 TOL- plasmid 의 lower operon promoter 인 Pm 과 /za-gene°] 재조합된 Pm-/wc reporter 플라즈미드와 TOL-plasmid를 보유하고 있으며, 톨루엔 계열 화합물 (parent compounds) 뿐 만 아니라, 이러한 화합물의 분해산물인 w-toluate 혹은 ben zoate 등에 노출시 발광을 생성하는 특성을 보유하고 있다 주요 연구 내용으로는 (1) 발광 균주 특성, 토양 함유물이 미치는 영향 등의 기초 조사와 함께, 토양에 임의오염된 m-toluate를 발광균주로 신속히 추정할 수 방법 (protocol)을 정립하였고, 오염 토양 중 %-toluate를 발광에 근거하여 추정하고, 추정치를 실제값 (기기분석)과 비교하였다.
- KG1206은 kanamycin 저항유전자(Kmr)를 보유하고 있으므로 LB배지에 kanamy- cin을 50 mg/L 첨가하였다. 또한 균주 특성 조사를 위해 다양한 중금속 (10 m®y)과 염소페놀계열 화합물 (10 mg/L) 들을 임의로 첨가하여 발광 활성에 미치는 영향을 조사하였다. 조사대상 화합물은 다음과 같다: Pb, Cd, Cu, Zn, 페놀, 2-CP (chlorophenol), 3-CP, 2, 4-DCP (di-CP), 3, 5-DCP, pentachlorophenol.
- 오염되지 않은 토양의 에탄올 추출물에 함유된 물질들이 발광활성에 미치는 영향을 순수 에탄올 용액과 다양한 m-toluate 농도 (10〜150 mg/L) 조건에서 비교하였다. 또한 국내 환경청 토양 측정망 시료 중에서 기준 항목에 대해 높은 농도로 오염된 시료군과 낮은 시료군 (각 5개 지역) 토양을 에탄올로 추출한 후, 추출물에 포함된 다양한 오염원들이 균주 발광활성에 미칠 수 있는 영향을 비교하였다.
- 오염되지 않은 토양의 에탄올 추출물에 함유된 물질들이 발광활성에 미치는 영향을 순수 에탄올 용액과 다양한 m-toluate 농도 (10〜150 mg/L) 조건에서 비교하였다. 또한 국내 환경청 토양 측정망 시료 중에서 기준 항목에 대해 높은 농도로 오염된 시료군과 낮은 시료군 (각 5개 지역) 토양을 에탄올로 추출한 후, 추출물에 포함된 다양한 오염원들이 균주 발광활성에 미칠 수 있는 영향을 비교하였다.
- 다양한 임의 농도의 巾-toluate에 오염된 토양 2 g을 4 mL 의 에탄올 용매로 추출한 후, 농도를 HPLC (액체크로마토그래피; Model SCL-10AV Shimadzu Co. Japan) 로 분석하였다. 확인된 추출액의 농도를 기준으로 하여 다양한 농도의 巾-toluate을 균주에 노출시킨 후 발광 활성 검량선을 작성하였다.
- Japan) 로 분석하였다. 확인된 추출액의 농도를 기준으로 하여 다양한 농도의 巾-toluate을 균주에 노출시킨 후 발광 활성 검량선을 작성하였다. 동일한 발광 균주에 토양 오염 추출액 (1% v/v ; 총용량 10 mL)을 첨가한 훅 발광활성을 측정하였으며, 토양 오염 추출물에 용해되어 있는 w-toluate 농도는 발광 표준 검량선에 기준하여 추정 후 실제값 (HPLC분석값)과 비교하였다.
- 확인된 추출액의 농도를 기준으로 하여 다양한 농도의 巾-toluate을 균주에 노출시킨 후 발광 활성 검량선을 작성하였다. 동일한 발광 균주에 토양 오염 추출액 (1% v/v ; 총용량 10 mL)을 첨가한 훅 발광활성을 측정하였으며, 토양 오염 추출물에 용해되어 있는 w-toluate 농도는 발광 표준 검량선에 기준하여 추정 후 실제값 (HPLC분석값)과 비교하였다. HPLC의 분석 조건은 다음과 같다: 254 nm UV- detector, RP-18 column, 이동상 methanol 100%, 이동상 유속 1 mL/min.
- HPLC의 분석 조건은 다음과 같다: 254 nm UV- detector, RP-18 column, 이동상 methanol 100%, 이동상 유속 1 mL/min. 발광은 시료 400 pL< 채취한 흑, Luminometer (Turner Design Model 20/20, USA)를 이용하여 측정하였다.
- 토양을 m-toluate로 임의 오염시킨 후, 토양 2 g을 매번 채취하여 15 mL 혈청병에 넣고 오염원올 에탄올로 추출하여 KG1206 균주 9.9 mL에 0.1 mL 추출액을 주입한 후발광 활성을 30분 간격으로 조사하였다. 발광 검량선 작성을 위해, 검량선의 적절한 농도 범위는 초기에 넓은 범위의 검량선을 이용하여 대략적 농도를 추정한 후 좁은 범위의 발광 검량선을 이용하여 오염원 농도를 측정하였다.
- 1 mL 추출액을 주입한 후발광 활성을 30분 간격으로 조사하였다. 발광 검량선 작성을 위해, 검량선의 적절한 농도 범위는 초기에 넓은 범위의 검량선을 이용하여 대략적 농도를 추정한 후 좁은 범위의 발광 검량선을 이용하여 오염원 농도를 측정하였다. 발광 검량선을 이용하여 추정한 오염원 농도와 실제 농도를 비교하기 위해 추출물을 HPLC로 기기 분석하였다.
- 발광 검량선 작성을 위해, 검량선의 적절한 농도 범위는 초기에 넓은 범위의 검량선을 이용하여 대략적 농도를 추정한 후 좁은 범위의 발광 검량선을 이용하여 오염원 농도를 측정하였다. 발광 검량선을 이용하여 추정한 오염원 농도와 실제 농도를 비교하기 위해 추출물을 HPLC로 기기 분석하였다. 실험은 3회 반복 수행하였으며, 실험 수행 모식도를 Fig.
- 균주 발광특성을 xylene의 중간 분해산물인 m-toluate의 다양한 농도에 대해 조사하였다 (Table 1). 耻의 직접 유도제인 m-toluate 1.
- 2, 4-DCP, 3, 5-DCP, PCP), .이 균주의 발광 활성에 미치는 영향을 조사하였다 (Fig. 2). 중금속류의 경우 발광 활성은 대조군과 비교하여 Pb은 60%, Cd 69%, Cu 95%, Zn 100%를 나타내었다.
- 조사하였다. 먼저 기초 실험으로 오염되지 않은 토양을 추출한 에탄올과 순수 에탄올 용액의 m-toluate 농도를 1 0-150 mg/L 되도록 조정 후, 발광 활성을 관찰하였다. 토양 추출 에탄올에 용해된 w-toluate 첨가군의 발광 활성은 순수 에탄올 첨가군에 대해 102±7% 발광 활성을 나타내었다.
- 발광 유도물질 외의 토양 오염원들이 발광 활성에 미치는 영향을 관찰하기 위해서, 지방 환경청에서 채취한 토양측정망 시료 중에서 기준 항목의 오염정도가 높은 시료와 낮은 시료 각 5개 지역 토양을 에탄올로 추출한 후, 균주의 발광 활성에 미치는 영향을 비교하였다 (Table 2). 토양오염기준 항목중에서 페놀, BTEX, TPH, Cr6+ 등은 무시할 정도의 미량 혹은 검출되지 않았으며, 주로 중금속 항목들이 주된 오염원으로 관찰되었다 (Table 2).
- 여부를 조사하였다. 균주의 발광 활성은 동일한 균주농도 (OD 기준) 에서도 상태에 따라 일부 상이한 발광 활성이 관찰되었으므로, 발광에 근거한 토양오염원 농도 조사는 매번 동일 활성의 균주를 표준 검량선 및 토양 추출물 노출에 사용하였다.
- 발광에 근거한 검량선 이용 여부를 파악하기 위해, 먼저 토양 추출물의 w-toluate 농도를 HPLC로 분석하였다. 분석 농도를 기준으로 하여, 다양한 m-toluate 농도 범위의 에탄올 용액을 발광 균주에 노출 후, 발광활성에 근거한검량선을 작성하였다.
- 분석 농도를 기준으로 하여, 다양한 m-toluate 농도 범위의 에탄올 용액을 발광 균주에 노출 후, 발광활성에 근거한검량선을 작성하였다. m-toluate 함유 토양 추출물을 동일한 활성의 발광 균주에 노출 후, 생성되는 발광을 이미 작성된 검량선에 기준해서 m-toluate 농도를 추정하고, HPLC 분석치와 비교하였다.
- 분석 농도를 기준으로 하여, 다양한 m-toluate 농도 범위의 에탄올 용액을 발광 균주에 노출 후, 발광활성에 근거한검량선을 작성하였다. m-toluate 함유 토양 추출물을 동일한 활성의 발광 균주에 노출 후, 생성되는 발광을 이미 작성된 검량선에 기준해서 m-toluate 농도를 추정하고, HPLC 분석치와 비교하였다. 농도 별 대표적 발광 검량선을 Fig.
- 채취하여 사용하였다. 채취 토양 시료의 m-toluate 농도를 에탄올 추출액 발광 활성에 근거한 검량선을 이용하여 추정하고, 또한 발광 추정값을 HPLC 분석값과 비교하여, 추정치에 대한 실제값의 비 (%)를 나타내었다 (Fig. 4). 토양오염원 농도 추정을 위해서 두 번의 검량선을 작성하였다.
- 4). 토양오염원 농도 추정을 위해서 두 번의 검량선을 작성하였다. 초기에는 넓은 농도 범위의 표준농도로 작성된 발광 검량선을 이용하여 토양 추출물의 대략적인 농도를 추정하였다.
- 초기에는 넓은 농도 범위의 표준농도로 작성된 발광 검량선을 이용하여 토양 추출물의 대략적인 농도를 추정하였다. 연이어서 추정 농도에 근접한 범위의 다양한 농도 m-toluate로 검량 선을 다시 작성하여 농도를 정밀하게 추정하였다.
- 6이 될 때까지 배양하였다. 실험을 위해서 균주를 MSM (minimal salt medium; MgSCh . 71七0 0.2 g, CaCh 0.1 g, FeSCU . 가£0 0.05 mg, NaMoQi . 2HzO 0.25 mg, K2HPO4 0.43 g, KH2PO4 0.23 g per 초순수 1 L) 을 이용하여 OD«» = 0.3으로 조정하였다. KG1206은 kanamycin 저항유전자(Kmr)를 보유하고 있으므로 LB배지에 kanamy- cin을 50 mg/L 첨가하였다.
대상 데이터
- 또한 균주 특성 조사를 위해 다양한 중금속 (10 m®y)과 염소페놀계열 화합물 (10 mg/L) 들을 임의로 첨가하여 발광 활성에 미치는 영향을 조사하였다. 조사대상 화합물은 다음과 같다: Pb, Cd, Cu, Zn, 페놀, 2-CP (chlorophenol), 3-CP, 2, 4-DCP (di-CP), 3, 5-DCP, pentachlorophenol.
- 임의 농도의 m-toluate에 오염된 토양으로부터 간헐적으로 시료를 채취하여 사용하였다. 채취 토양 시료의 m-toluate 농도를 에탄올 추출액 발광 활성에 근거한 검량선을 이용하여 추정하고, 또한 발광 추정값을 HPLC 분석값과 비교하여, 추정치에 대한 실제값의 비 (%)를 나타내었다 (Fig.
데이터처리
- 시료가 해당되었다. 발광추정 실험 결과의 유의성을 살펴보기 위하여 HPLC 분석값과 발광 추정농도에 대한 통계 비교를 실시하였다. 실험결과의 유의성은 평균비교 분석에 의해 평가되어졌다.
- 발광추정 실험 결과의 유의성을 살펴보기 위하여 HPLC 분석값과 발광 추정농도에 대한 통계 비교를 실시하였다. 실험결과의 유의성은 평균비교 분석에 의해 평가되어졌다. 두 분석 방법 (HPLC 와 발광 추정농도)에 의해 측정된 값의 평균이 동일하다는 가정 하에, 분산이 동일한 경우와 그렇지 않은 경우를 가정하여 Student's t검정을 실시하였다.
- 실험결과의 유의성은 평균비교 분석에 의해 평가되어졌다. 두 분석 방법 (HPLC 와 발광 추정농도)에 의해 측정된 값의 평균이 동일하다는 가정 하에, 분산이 동일한 경우와 그렇지 않은 경우를 가정하여 Student's t검정을 실시하였다. 검정 결과 관측된 t값이 모두 기각 값보다 작으며, 또한 유의확률이 모두 0.
성능/효과
- ")균주 발광 활성은 유도제로 작용하는 오염 화합물이 xyl-gene 하부 분해경로 Pm promoter# 조절하는 XylS protein을 양성적으로 활성화 시켜 Pm-/ux 조합유전자에 작용하여 나타나는 것으로 알려져 있다.") 재조합된 균주 KG1206은 톨루엔 계열 모 화합물 (parent compounds; toluene, o-, m-, p-xylene, m- MBA)들에 대해서만 발광 활성을 나타내는 균주 RB1401n) 와는 달리, 모 화합물 뿐 만 아니라 주요 중간부산물인 m- toluate, benzoate 등에 대해서도 발광을 생산하는 특성을 보유하고 있다.
- 5 hrs 정도까지 지속되었다. 발광 활성을 억제하지 않으며 최대한계치를 넘는 발광활성이 400 mg/L 정도의 농도에서 관찰되었다. 발광 활성이 초기에 약간 억제되었으나, 곧 회복되는 刀-toluate 농도의 범위는 700-1, 100 mg/L로 조사되었으며, 이 농도 범위에서는 배양 6시간까지 높은 발광활성이 관찰되었다.
- 발광 활성을 억제하지 않으며 최대한계치를 넘는 발광활성이 400 mg/L 정도의 농도에서 관찰되었다. 발광 활성이 초기에 약간 억제되었으나, 곧 회복되는 刀-toluate 농도의 범위는 700-1, 100 mg/L로 조사되었으며, 이 농도 범위에서는 배양 6시간까지 높은 발광활성이 관찰되었다. 조사한 최대농도 1, 400 mg/L에서는 발광 활성이 완전히 억제되었다.
- 발광 활성이 초기에 약간 억제되었으나, 곧 회복되는 刀-toluate 농도의 범위는 700-1, 100 mg/L로 조사되었으며, 이 농도 범위에서는 배양 6시간까지 높은 발광활성이 관찰되었다. 조사한 최대농도 1, 400 mg/L에서는 발광 활성이 완전히 억제되었다. 또한 발광 활성이 억제되지 않는 농도인 70 mg/L에서 발광 활성이 완전히 소멸된 후 (배양 20 hr) 에 m-toluate 70 mg/L를 첨가했을 때, 초기 최대 발광활성의 약 70% 활성이 되었다.
- TOL plasmid의 두 개 operon에 대해서 간접 유도제들인 톨루엔 및 xylene 이성질체 등은 알려진 바와 같이 TOL plasmid xylR 유전자로부터 생성된 xylR 단백질을 활성화하며, 활성화된 단백질은 Ps와 Pu의 전사 (transcription) 와함께 Pm의 전사를 유도하기 때문에 발광활성을 관찰할 수 있었다.16)따라서 발광균주 KG1206은 간접 유도제와 직접 유도제 (간접 유도제의 중간 분해산물) 화합물로 오염된 지역의 감시 및 복원에 유용하게 사용할 수 있을 것이다.
- 토양 추출 에탄올에 용해된 w-toluate 첨가군의 발광 활성은 순수 에탄올 첨가군에 대해 102±7% 발광 활성을 나타내었다. 따라서 비오염 토양 함유물이 균주 발광 활성에 미치는 영향은 무시할 정도임을 확인하였다,
- 토양오염기준 항목중에서 페놀, BTEX, TPH, Cr6+ 등은 무시할 정도의 미량 혹은 검출되지 않았으며, 주로 중금속 항목들이 주된 오염원으로 관찰되었다 (Table 2). 약염산법으로추출된 중금속 중에서 아연이 다른 중금속에 비해 많이 (13.
- 토양오염기준 항목중에서 페놀, BTEX, TPH, Cr6+ 등은 무시할 정도의 미량 혹은 검출되지 않았으며, 주로 중금속 항목들이 주된 오염원으로 관찰되었다 (Table 2). 약염산법으로추출된 중금속 중에서 아연이 다른 중금속에 비해 많이 (13.11-607.1 mg/L) 검출되었고, 비소는 매우 소량 (<0.076 mg/L)의 농도가 검출되었다. 오염 정도가 상이한 두 그룹의 평균 발광 활성은 각각 1485±181 RLU와 1455±288 RLU 로 거의 동일한 발광 활성이 관찰되었다.
- 076 mg/L)의 농도가 검출되었다. 오염 정도가 상이한 두 그룹의 평균 발광 활성은 각각 1485±181 RLU와 1455±288 RLU 로 거의 동일한 발광 활성이 관찰되었다. 따라서 토양 오염원의 종류 및 오염 정도에 따라 영향을 줄 수 있는 가능성도 간과할 수 없으나, 오염원 탐지를 위해 균주 전체 부피에 비해 에탄올 추출물이 소량 (1% v/v) 첨가되기 때문에 희석효과에 의해 발광 유도제 이외의 오염원이 발광 활성에 미치는 영향은 미미할 것으로 사료된다.
- 오염 정도가 상이한 두 그룹의 평균 발광 활성은 각각 1485±181 RLU와 1455±288 RLU 로 거의 동일한 발광 활성이 관찰되었다. 따라서 토양 오염원의 종류 및 오염 정도에 따라 영향을 줄 수 있는 가능성도 간과할 수 없으나, 오염원 탐지를 위해 균주 전체 부피에 비해 에탄올 추출물이 소량 (1% v/v) 첨가되기 때문에 희석효과에 의해 발광 유도제 이외의 오염원이 발광 활성에 미치는 영향은 미미할 것으로 사료된다.
- 3에 나타내었다. 발광 검량선의 상관관계 (if)는 0.97 이상으로 조사되어, 발광활성과 오염원 농도간에 높은 상관관계가 관찰되었다. Fig.
- 2, 76 및 127 mg/L로, 실제 기기분석치의 90〜141%의 범위로 조사되었다. 따라서 발광균주의 활성에 기준한 검량선을 이용에 대한 가능성을 확인할 수 있었다.
- 총 30개의 시료 중 m-toluate 추정값은 HPLC 기기 분석치에 비교하여 최저 75%, 최대 158%로 농도가 추정되었으며, 이중 ±10, 20 및 25%의 범위 내에는 각 10, 15과 19 개의 시료가 해당되었다. 발광추정 실험 결과의 유의성을 살펴보기 위하여 HPLC 분석값과 발광 추정농도에 대한 통계 비교를 실시하였다.
- 두 분석 방법 (HPLC 와 발광 추정농도)에 의해 측정된 값의 평균이 동일하다는 가정 하에, 분산이 동일한 경우와 그렇지 않은 경우를 가정하여 Student's t검정을 실시하였다. 검정 결과 관측된 t값이 모두 기각 값보다 작으며, 또한 유의확률이 모두 0.05보다 큰 값을 보여줌을 알 수 있었다 (Table 3). 이는 두 집단사이의 평균이 차가 있다는 것은 유효하지 않다는 것을 의미한다.
- 1) Xyl-gene의 하부 promoter (Pm)와 lux-gene을 재조합한플라즈미드 보유 균주 KG1206은 톨루엔 계열 화합물뿐 만 아니라, 증간 분해산물들인 m-toluate에 대해서도 높은 발광을 나타내었다.
- 2) 발광 균주를 다양한 중금속및 페놀 계열 유기물 오염원 10 mg/L의 농도로 조절하였을 경우, 대조군에 비해 약 55-100% 발광활성을 나타내었다. 그러나 토양오염원 정량화를 위해 다양한 오염원을 함유한 에탄올 추출물을 균주에 1% (v/v) 으로 노출하였을 경우에는 영향이 미미함을 알 수 있었다.
- 발광활성을 나타내었다. 그러나 토양오염원 정량화를 위해 다양한 오염원을 함유한 에탄올 추출물을 균주에 1% (v/v) 으로 노출하였을 경우에는 영향이 미미함을 알 수 있었다.
- 3) m-toluate 반정량화를 위해 균주 발광에 근거한 검량선 이용 가능성을 확인하였다.
- 4) 발광에 근거하여 m-toluate 농도를 추정하기 위해 임의로 30개의 시료를 채취한 결과, HPLC 기기 분석값의 75 〜158% 범위로 농도가 조사되었으며, 통계적으로 유의한 것으로 나타났다.
후속연구
- 특히 2, 4-, 3, 5-DCP 및 3-CP는 높은 발광 저해를 유발하였다. 따라서 발광 유도제 오염원들의 검출을 위해서는, 환경 시료에 존재하는 다양한 오염원들이 발광 활성에 미칠 수 있는 영향을 고려해야 할 것이다.
- 이는 두 집단사이의 평균이 차가 있다는 것은 유효하지 않다는 것을 의미한다. 따라서 본 조사에서의 발광에 근거한 추정 농도값은 오염된 토양의 농도를 측정할 수 있는 (반)정량적 자료로 사용 가능함을 보여주는 결과라 할 수 있을 것이다.
- 실내 실험에서는 높은 적용 가능성을 확인할 수 있었으나, 환경 적용을 위해서는 복잡한 환경 오염의 특성에 대한 계속적인 연구가 있어야 한다. 예를 들면 다양한 발광 유도 오염원들의 존재에 대한 문제 및 또한 다양한 토양함유물들에 대한 연구가 향후 진행되어야 할 것이다.
- 계속적인 연구가 있어야 한다. 예를 들면 다양한 발광 유도 오염원들의 존재에 대한 문제 및 또한 다양한 토양함유물들에 대한 연구가 향후 진행되어야 할 것이다.
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