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문제 정의
- 특히 이러한 어류에서의 여러가지 연구 가운데 내분비계장애물질이 어류 초기단계에서의 발생 및 생장, 생식기관에 어떠한 영향을 나타내는지에 대한 연구는 매우 중요한 부분이라고 할 수 있다. 따라서 본 연구는 대표적인 내분비계장애물질로 알려진 BPA를 시험물질로 하여 환경오염물질에 매우 감수성이 높은 시기인 어류의 생장 초기단계(embryo-larvae)에서의 영향을 필수종말점(core end-points)을 중심으로 조사하였으며, 그 결과 수서생물의 초기 단계에서 내분비계장애영향을 스크리닝 하기 위한 민감하고 적정한 종말점을 선정하고자 하였다.
가설 설정
- Vitellogenin gene expression in medaka whole body after bisphenol A exposure at different concentrations. A: vitellogenin protein levels measured from the whole body. B: vitellogenin mRNA expression levels measured from the whole body(Reverse transcription-PCR was performed for 30 cycles) M: size markers, 1: control, 2: 2μg/L of bisphenol A, 3: 20 gg/L, 4: 200 μg/L, 5: female medaka VTG(positive control).
제안 방법
- 2, 용존산소 7~ 8mg/L 및 광주기 16시간/8시간(명/암)의 조건으로 계대 사육한 일본산 개량송사리(Oryzias latipes, Orange-red type)를 시험에 사용하였다. 먹이는 알테미아를 1일 1회 충분히 공급하였으며 부화 후 5개월 이상된 성숙한 개체중 외형상 기형이 없고, 건강한 것만을 골라 암 : 수, 2 : 1 비율로 수조에 넣은 후 교배ㆍ산란을 유도하여 수정란을 확보하였다.
- 시험물질은 bisphenol A(Sigma chemical Corp., USA)를 증류수에 용해시켜 lOOmg/L의 stock solution을 만든 후 재차 희석수에 일정비율로 희석하여 시험에 적합한 농도로 제조하였다. 희석수는 본 연구실의 사육수로 사용하고 있는 탈염소한 수돗물을 사용하였으며, 이 경우 사육수의 pH는 7.
- 급성독성시험에는 부화 후 3일 경과된 송사리 larvae를 사용하였으며, 시험물질의 처리는 bisphenol A(BPA) stock soluton을 0.8, 1.6, 3.2, 6.4, 9.6 및 12.8mg/L의 농도로 희석하여 대조군을 포함해 총 7개 농도의 시험군을 설정하여 노출하였다. 각 수조 내에는 400mL의 시험용액이 일정하게 유지되도록 하였으며, 수온은 사육온도와 같은 25±1℃를 유지하였고, 조명시간도 사육조건과 동일하게 유지하였다.
- 각 수조 내에는 400mL의 시험용액이 일정하게 유지되도록 하였으며, 수온은 사육온도와 같은 25±1℃를 유지하였고, 조명시간도 사육조건과 동일하게 유지하였다. 시험군당 16마리의 송사리를 처리하여 96시간동안 시험을 실시하였으며, 시험기간 동안 치사율과 행동반응을 관찰하였다. 시험도중 치사어는 발견 즉시 제거하였으며, 아가미 호흡이 멈춘 상태를 사망으로 간주하였다.
- 시험물질의 처리는 BPA stock soluton을 2, 20, 200ug/L의 농도로 희석하여 대조군을 포함해 총 4개 농도의 시험군을 설정하여 노출하였다. 시험물질 처리를 위해 친어로부터 산란된 알 가운데 2~4세포기 발생단계의 수정란을 채취하여 시험군별로 30개의 수정란을 유리 비이커에 넣어 200mL의 시험용액을 첨가하여 노출시켰다.
- 시험물질의 처리는 BPA stock soluton을 2, 20, 200ug/L의 농도로 희석하여 대조군을 포함해 총 4개 농도의 시험군을 설정하여 노출하였다. 시험물질 처리를 위해 친어로부터 산란된 알 가운데 2~4세포기 발생단계의 수정란을 채취하여 시험군별로 30개의 수정란을 유리 비이커에 넣어 200mL의 시험용액을 첨가하여 노출시켰다. 노출기간은 대조군의 부화가 50% 완료된 시점에서 2주간의 노출을 더 시행하였다.
- 노출기간은 대조군의 부화가 50% 완료된 시점에서 2주간의 노출을 더 시행하였다. 먹이는 부화 후 이틀이 지나는 시점부터 1일 1회 알테미아를 일정량 공급하였다. 반지수식방법을 적용하여 2일에 1회 시험액을 교환하였으며, 시험액을 교환할 경우 먹이는 시험용액 교환 4시간 전에 공급하였다.
- 먹이는 부화 후 이틀이 지나는 시점부터 1일 1회 알테미아를 일정량 공급하였다. 반지수식방법을 적용하여 2일에 1회 시험액을 교환하였으며, 시험액을 교환할 경우 먹이는 시험용액 교환 4시간 전에 공급하였다.
- 초기 배발생(embryo-larvae) 과정에서 BPA의 영향을 알아보기 위해 대조군과 처리군에서의 생장과정을 실체현미경(Karl Zeiss Corp.)을 이용하여 24시간 마다 관찰하였으며, 관찰 사항으로는 생장과정에서 나타난 사망여부, 부화율, 장애영향, 기형 등을 조사하였다.
- 대조군 및 처리군의 생식소 조직을 관찰하기 위해 부화 후 2주일이 경과한 개체들 가운데 시험군 당 10마리 개체씩을 BouiiTs fluid에 고정하여 파라핀 절편법에 의해 4~6μm 두께로 연속 박절하는 whole body section을 실시하였다. 조직관찰에 사용한 염색법은 Mayer's hematoxylin과 0.
- )”를 사용하였으며, 비텔로제닌 항체를 이용하는 sandwich ELISA법을 사용하였다. 노출이 종료된 후 시험군 당 5개체의 송사리 larvae를 하나의 tube에 모아 300 μL의 TBST% BSA 버퍼에서 분쇄하여 whole body ho- mogenates를 만든 후 5,000g에서 20분간 원심분리 하였다. 위 과정은 시험군 당 2 반복을 두어 실시하였으며, 원심분리 후 상등액은 새로운 tube에 옮겨 ELISA 시험 전까지 - 20℃에서 보관하였다.
- 노출이 종료된 송사리 몸체(whole body)로부터 QIA-Shredder RNeasy mini-kit(QIAgene Corp.)를 이용하여 total RNA를 추출하였으며, 방법은 제품 메뉴얼에 준하여 실시하였다. 정제한 총 RNA는 흡광도 260 nm의 파장으로 정량한 후 1μg/μL로 희석하여 -70℃에 보관하였다.
- 정제한 총 RNA는 흡광도 260 nm의 파장으로 정량한 후 1μg/μL로 희석하여 -70℃에 보관하였다. RT-PCR 반응의 적정성을 검증하기 위한 양성대조군으로는 송사리 암컷(spawning female) 개체의 간을 사용하였으며, 간적출 및 총 RNA 정제는 위와 동일한 방법을 사용해 실시하였다. RT-PCRe 30℃-10^-, 42℃-30분 99℃-5분의 조건으로 역전사(reverse transcription) 반응을 실시하여 cDNA-t- 합성한 후, 94℃/30초-60℃/30초-72℃/1에서 30회전의 조건으로 PCR 반응을 수행하였다.
- RT-PCR 반응의 적정성을 검증하기 위한 양성대조군으로는 송사리 암컷(spawning female) 개체의 간을 사용하였으며, 간적출 및 총 RNA 정제는 위와 동일한 방법을 사용해 실시하였다. RT-PCRe 30℃-10^-, 42℃-30분 99℃-5분의 조건으로 역전사(reverse transcription) 반응을 실시하여 cDNA-t- 합성한 후, 94℃/30초-60℃/30초-72℃/1에서 30회전의 조건으로 PCR 반응을 수행하였다. PCR에 사용된 VTG 프라이머는 5'-ggggcattgattgcaagcagt-3'(forward), 5'- ctcctgaagaccatggttagg-3'(reverse) 서열을 가지도록 제작하였으며, 대조반응을 위한 유전자로서 house keeping gene인 β-actin의 경우는 5'-cctgaccctga- agtacccca-3'(forward)와 5z-cgtcatgcagctcatagctc- 3'(reverse)의 서열을 갖는 프라이머를 제작하여 사용하였다.
- RT-PCRe 30℃-10^-, 42℃-30분 99℃-5분의 조건으로 역전사(reverse transcription) 반응을 실시하여 cDNA-t- 합성한 후, 94℃/30초-60℃/30초-72℃/1에서 30회전의 조건으로 PCR 반응을 수행하였다. PCR에 사용된 VTG 프라이머는 5'-ggggcattgattgcaagcagt-3'(forward), 5'- ctcctgaagaccatggttagg-3'(reverse) 서열을 가지도록 제작하였으며, 대조반응을 위한 유전자로서 house keeping gene인 β-actin의 경우는 5'-cctgaccctga- agtacccca-3'(forward)와 5z-cgtcatgcagctcatagctc- 3'(reverse)의 서열을 갖는 프라이머를 제작하여 사용하였다. 반응이 끝난 후 1.
- PCR에 사용된 VTG 프라이머는 5'-ggggcattgattgcaagcagt-3'(forward), 5'- ctcctgaagaccatggttagg-3'(reverse) 서열을 가지도록 제작하였으며, 대조반응을 위한 유전자로서 house keeping gene인 β-actin의 경우는 5'-cctgaccctga- agtacccca-3'(forward)와 5z-cgtcatgcagctcatagctc- 3'(reverse)의 서열을 갖는 프라이머를 제작하여 사용하였다. 반응이 끝난 후 1.0% 아가로오스 겔에서 전기영동하고 그 결과를 분석하였다.
- , 2003). 따라서 금번 시험에서는 이러한 생체지표 측정시험 결과와의 비교를 위해 2~200μg/L 범위로 BPA 농도를 설정하였다. 그러나 본 농도범위는 앞서 제시한 larvae에서의 96h-LC50(8.
- 생식소 조직관찰 외에도 노출 종료 후 치어의 몸체로부터 단백질과 총 RNA를 추출하였으며, 정제된 단백질과 RNA로부터 비텔로제닌(VTG)의 발현유도 정도를 각각 측정하였다. 특히, VTG 단백질은 일반적으로 혈액 또는 간 조직으로부터 측정하 는데 본 시험에 사용된 송사리는 부화 후 약 2주된 치어로서 성어(成魚)에 비해 상대적으로 크기가 매우 작기 때문에 혈액 또는 간이 아닌 몸체(whole body)로부터 VTG 단백질을 측정하는 방법을 시도하였다.
- 생식소 조직관찰 외에도 노출 종료 후 치어의 몸체로부터 단백질과 총 RNA를 추출하였으며, 정제된 단백질과 RNA로부터 비텔로제닌(VTG)의 발현유도 정도를 각각 측정하였다. 특히, VTG 단백질은 일반적으로 혈액 또는 간 조직으로부터 측정하 는데 본 시험에 사용된 송사리는 부화 후 약 2주된 치어로서 성어(成魚)에 비해 상대적으로 크기가 매우 작기 때문에 혈액 또는 간이 아닌 몸체(whole body)로부터 VTG 단백질을 측정하는 방법을 시도하였다. 대조군과 처리군에서의 VTG 단백질 측정 결과, BPA 농도가 증가할수록 VTG 수준이 증가하는 용량-반응 양상을 나타내었다(Fig.
- 내분비장애물질로 알려진 bisphenol A(BPA)에 의한 송사리 초기 생장단계에서의 영향을 필수종 말점(core end-point)을 중심으로 조사하였다. 송사리 larvae에 대한 반수치사농도(96-LC50)는 8.
대상 데이터
- 국립환경연구원 어류사육실에서 수온 25±1℃, pH 7.5 ±0.2, 용존산소 7~ 8mg/L 및 광주기 16시간/8시간(명/암)의 조건으로 계대 사육한 일본산 개량송사리(Oryzias latipes, Orange-red type)를 시험에 사용하였다. 먹이는 알테미아를 1일 1회 충분히 공급하였으며 부화 후 5개월 이상된 성숙한 개체중 외형상 기형이 없고, 건강한 것만을 골라 암 : 수, 2 : 1 비율로 수조에 넣은 후 교배ㆍ산란을 유도하여 수정란을 확보하였다.
- , USA)를 증류수에 용해시켜 lOOmg/L의 stock solution을 만든 후 재차 희석수에 일정비율로 희석하여 시험에 적합한 농도로 제조하였다. 희석수는 본 연구실의 사육수로 사용하고 있는 탈염소한 수돗물을 사용하였으며, 이 경우 사육수의 pH는 7.4이며 경도는 CaCO3 환산값 기준으로 68mg/L 이었다.
이론/모형
- 시험도중 치사어는 발견 즉시 제거하였으며, 아가미 호흡이 멈춘 상태를 사망으로 간주하였다. 치사율에 따른 반수 치사농도(LC50)는 Probits 통계처리법을 사용하여 산출하였다.
- 대조군 및 처리군의 생식소 조직을 관찰하기 위해 부화 후 2주일이 경과한 개체들 가운데 시험군 당 10마리 개체씩을 BouiiTs fluid에 고정하여 파라핀 절편법에 의해 4~6μm 두께로 연속 박절하는 whole body section을 실시하였다. 조직관찰에 사용한 염색법은 Mayer's hematoxylin과 0.5% Eosin(H & E)의 비교염색을 실시하였으며, 염색이 완료된 후 광학현미경에서 검경하였다.
- 송사리 비텔로제닌의 측정은 “Medaka vitellogenin ELISA Kit(EnBio Corp.)”를 사용하였으며, 비텔로제닌 항체를 이용하는 sandwich ELISA법을 사용하였다. 노출이 종료된 후 시험군 당 5개체의 송사리 larvae를 하나의 tube에 모아 300 μL의 TBST% BSA 버퍼에서 분쇄하여 whole body ho- mogenates를 만든 후 5,000g에서 20분간 원심분리 하였다.
성능/효과
- 갓 부화한 송사리 larvae에 대한 bisphenol A(BPA)의 급성독성을 알아보기 위해 96시간 동안 BPA를 처리한 결과, 반수치사농도(96h-LC50)는8.2 mg/L로 나타났다. 12.
- 2 mg/L로 나타났다. 12.8 mg/L 농도에서는 24시간 이내에 모든 개체(16마리)가 사망하였으나, 대조군을 비롯한 0.8~3.2 mg/L 범위의 처리군에서는 시 험기간 동안 사망한 개체가 하나도 없었으며, 유영장애 등 특이한 현상도 관찰되지 않았다(Table 1). 과거 연구에 따르면, BPA에 대한 송사리 급성독성은 성어를 대상으로 48h-LC50값이 15 mg/L(Staples et al.
- , 1988). 송사리를 이용한 급성독성시험 결과, 송사리 초기 생장단계의 형태 및 조직학적 영향을 조사하기 위해 설정한 2~200μg/L 범위는 larvae 단계에서 BPA의 급성독성에 따른 치사를 유발하지 않는 농도임을 확인할 수 있었다.
- 1에 나타낸 바와 같이 본 시험농도 범위(0~ 200μg/L)에서는 대조군과 처리군에서 유의한 차이는 나타나지 않았다. 즉, 200μg/L 처리군에서도 부화율이 약 80% 가까이 나타남으로써 시험물질의 농도가 증가할 수로 부화율이 낮거나 부화가 지연되는 현상은 뚜렷이 관찰되지 않았다. 그러나 200 μg/L 처리군에서 부화가 되지 않은 개체는 주로 embryo의 발달과정에서 나타난 장애에 기인하였으며, 증상으로서는 출혈(hemorrhage) 및 혈액순환(blood circulation) 저해 , 안구크기 감소(reduced eyeball)가 관찰되었고 이들은 결국 부화하지 못하고 사망하였다.
- 혈액순환 저해는 대조군의 소수 embryo에서도 관찰되었으나 그 증상은 심하지 않았으며, 추후 회복됨으로써 정상적인 부화가 이루어졌다. 한편 대조군 및 처리군에서 부화된 송사리 larvae는 대부분 건강한 상태를 유지하였으며, 20 및 200μg/L 처리군의 일부 larvae에서 난황흡수가 저해되거나 부종증상(edema)이 발견되었으나 BPA 농도 증가에 따라 기형발생이 증가하는 유의적인 용량-반응 양상은 관찰되지 않았다(Fig. 2). 본 연구실에서는 BPA를 처리한 수컷 송사리에서의 비텔로제닌(VTG) 측정을 실시한 바 있으며, VTG 발현유도에 대한 비스페 놀 A의 NOEC(No observed Effect Concentration)값이 20μg/L으로 산출되었다(Lee ef al.
- 그러나 부화 후 2주 가량 된 개체들은 크기가 매우 작기 때문에 생식소의 외부 형태를 통한 암ㆍ수 구분은 불가능하였다. 노출이 종료된 개체들의 생식소 조직을 관찰한 결과, 대부분의 난소는 결체성 섬유조직으로 구성된 다수의 난소소엽(ovarian lobule)으로 구성되어 있었으며, 소엽에는 핵이 세포의 대부분을 차지하는 난원세포기(oogonial stage)와 핵 내부에 큰 인과 다수의 인이 발견되기 시작하는 난황형성전기(previtello- genic stage) 세포로 이루어져 있음을 관찰할 수 있었다. 대조군에서는 난황형성전기 세포가 난소의 80% 이상을 차지하고 있었으며, 모든 처리군의 난소 조직 역시 대조군과 동일한 양상이 나타남에 따라 내분비계장애물질의 영향이라고 볼 수 있는 증상들은 확인되지 않았다(Fig.
- 노출이 종료된 개체들의 생식소 조직을 관찰한 결과, 대부분의 난소는 결체성 섬유조직으로 구성된 다수의 난소소엽(ovarian lobule)으로 구성되어 있었으며, 소엽에는 핵이 세포의 대부분을 차지하는 난원세포기(oogonial stage)와 핵 내부에 큰 인과 다수의 인이 발견되기 시작하는 난황형성전기(previtello- genic stage) 세포로 이루어져 있음을 관찰할 수 있었다. 대조군에서는 난황형성전기 세포가 난소의 80% 이상을 차지하고 있었으며, 모든 처리군의 난소 조직 역시 대조군과 동일한 양상이 나타남에 따라 내분비계장애물질의 영향이라고 볼 수 있는 증상들은 확인되지 않았다(Fig. 3의 A, B). 수컷의 경우는 Fig.
- 3의 A, B). 수컷의 경우는 Fig. 3의 C와 D에서 보는 바와 같이 모든 정 소 조직은 세포의 90% 이상이 핵으로 구성되어 있는 정원세포(spermatogoium)들이 대부분을 차지하고 있음을 관찰할 수 있었으며, 핵의 크기가 작아지며 염색사들이 분열하는 감수분열 과정은 확인되지 않았다. 즉, 대조군 및 처리군 모두 spermato- genesis의 초기 단계로 나타나 발생단계의 차이는 관찰되지 않았으며, 내분비계장애물질에 의한 증상인 testis-ova를 포함한 생식소 조직의 이상 증상은 발견되지 않았다.
- 3의 C와 D에서 보는 바와 같이 모든 정 소 조직은 세포의 90% 이상이 핵으로 구성되어 있는 정원세포(spermatogoium)들이 대부분을 차지하고 있음을 관찰할 수 있었으며, 핵의 크기가 작아지며 염색사들이 분열하는 감수분열 과정은 확인되지 않았다. 즉, 대조군 및 처리군 모두 spermato- genesis의 초기 단계로 나타나 발생단계의 차이는 관찰되지 않았으며, 내분비계장애물질에 의한 증상인 testis-ova를 포함한 생식소 조직의 이상 증상은 발견되지 않았다.
- 특히, VTG 단백질은 일반적으로 혈액 또는 간 조직으로부터 측정하 는데 본 시험에 사용된 송사리는 부화 후 약 2주된 치어로서 성어(成魚)에 비해 상대적으로 크기가 매우 작기 때문에 혈액 또는 간이 아닌 몸체(whole body)로부터 VTG 단백질을 측정하는 방법을 시도하였다. 대조군과 처리군에서의 VTG 단백질 측정 결과, BPA 농도가 증가할수록 VTG 수준이 증가하는 용량-반응 양상을 나타내었다(Fig. 4). RT-PCR 방법을 사용한 RNA 측정 결과 200μg/L BPA 농도에서 밴드가 관찰되었으며, 단백질 수준에서의 발현유도와 동일한 양상을 나타냄에 따라 VTG의 발현은 전사수준에서 유도되었음을 확인할 수 있었다.
- 4). RT-PCR 방법을 사용한 RNA 측정 결과 200μg/L BPA 농도에서 밴드가 관찰되었으며, 단백질 수준에서의 발현유도와 동일한 양상을 나타냄에 따라 VTG의 발현은 전사수준에서 유도되었음을 확인할 수 있었다.
- 이상의 모든 결과를 종합하였을 때 생체지표인 비텔로제닌은 어류의 초기 생장단계(Early life- stage)에서의 내분비계장애물질에 의한 영향을 스크리닝 하는 과정에서 부화율, 기형 발생, 생식기관 조직 관찰 등의 조직형태학적인 종말점들(end-points)과 비교해 민감한 지표임을 확인할 수 있었다.
- 내분비장애물질로 알려진 bisphenol A(BPA)에 의한 송사리 초기 생장단계에서의 영향을 필수종 말점(core end-point)을 중심으로 조사하였다. 송사리 larvae에 대한 반수치사농도(96-LC50)는 8.2 mg/L로 나타남에 따라 송사리 초기 단계의 영향을 조사하기 위해 설정한 2~200μg/L 범위는 BPA의 급성독성을 유발하지 않는 농도임을 확인할 수 있었다. 상기 농도에 노출된 송사리의 일부 수정란에서는 embryo 단계에서 출혈(hemorrhage), 혈액순환 저해, 안구크기 감소 및 larvae 단계에서 난황흡수가 저해되거나 부종증상(edema)이 발견되었으나 BPA 농도 증가에 따른 용량-반응적 장애 현상은 관찰되지 않았다.
- 상기 농도에 노출된 송사리의 일부 수정란에서는 embryo 단계에서 출혈(hemorrhage), 혈액순환 저해, 안구크기 감소 및 larvae 단계에서 난황흡수가 저해되거나 부종증상(edema)이 발견되었으나 BPA 농도 증가에 따른 용량-반응적 장애 현상은 관찰되지 않았다. 부화 후 2주 가량 된 개체들의 생식소 조직을 관찰한 결과, 모든 시험군에서 생식소 발달과정의 이상 증상은 관찰되지 않았으며, 특히 내분비계장애물질에 의한 대표적 현상인 testis- ova 역시 발견되지 않았다. 이밖에 노출이 완료된 송사리 치어 몸체(whole body)로부터 VTG 단백질을 측정하였으며, BPA 농도가 증가할수록 VTG 수준이 소폭 증가하는 용량-반응 양상을 나타내었다.
- 부화 후 2주 가량 된 개체들의 생식소 조직을 관찰한 결과, 모든 시험군에서 생식소 발달과정의 이상 증상은 관찰되지 않았으며, 특히 내분비계장애물질에 의한 대표적 현상인 testis- ova 역시 발견되지 않았다. 이밖에 노출이 완료된 송사리 치어 몸체(whole body)로부터 VTG 단백질을 측정하였으며, BPA 농도가 증가할수록 VTG 수준이 소폭 증가하는 용량-반응 양상을 나타내었다. 또한 RT-PCR 방법을 사용한 RNA 측정결과, 200 ug/L BPA 농도에서 밴드가 관찰됨에 따라 VTG의 발현은 전사수준에서 유도되었음을 확인할 수 있었다.
- 이밖에 노출이 완료된 송사리 치어 몸체(whole body)로부터 VTG 단백질을 측정하였으며, BPA 농도가 증가할수록 VTG 수준이 소폭 증가하는 용량-반응 양상을 나타내었다. 또한 RT-PCR 방법을 사용한 RNA 측정결과, 200 ug/L BPA 농도에서 밴드가 관찰됨에 따라 VTG의 발현은 전사수준에서 유도되었음을 확인할 수 있었다. 상기 시험 결과, 생체지표인 비텔로제닌은 어류의 초기 생장단계(Early life-stage)에서의 내분비계장애물질에 의한 영향을 스크리닝 하는 과정에서 부화율, 기형발생, 생식기관 조직관찰 등의 조직 형태학적인 종말점들(end-points)과 비교해 민감한 지표임을 확인할 수 있었다.
- 또한 RT-PCR 방법을 사용한 RNA 측정결과, 200 ug/L BPA 농도에서 밴드가 관찰됨에 따라 VTG의 발현은 전사수준에서 유도되었음을 확인할 수 있었다. 상기 시험 결과, 생체지표인 비텔로제닌은 어류의 초기 생장단계(Early life-stage)에서의 내분비계장애물질에 의한 영향을 스크리닝 하는 과정에서 부화율, 기형발생, 생식기관 조직관찰 등의 조직 형태학적인 종말점들(end-points)과 비교해 민감한 지표임을 확인할 수 있었다.
- 본 연구에서 VTG 발현을 조사하기 위해 사용된 송사리 치어의 몸체는 VTG가 유일하게 합성되고 있는 간 조직의 단백질 외에도 다른 내부 장기들의 단백질 성분이 측정시료에 다량 포함되어 있기 때문에 혈액으로부터의 측정에 비해 감도가 떨어지는 단점은 있다. 그러나 몸체로부터의 VTG 단백질 또는 RNA 의 측정 시도는 송사리의 초기 생장 단계에서의 VTG 발현유도를 스크리닝할 수 있는 가능성을 얻은데 의의를 찾을 수 있었다.
후속연구
- , 2001). BPA의 경우 환경 중에서의 박테리아 등에 의한 대사(분해)과정은 알려져 있으나, 어류 생체내에서의 대사과정은 아직 명확히 밝혀져 있지 않으며, 따라서 정확한 독성작용을 알기 위해서는 생체내에서의 BPA의 대사 기작에 대한 연구가 이루어져야 할 것으로 판단된다.
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