선택한 단어 수는 입니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
최소 단어 이상 선택하여야 합니다.
선택한 단어 수는 30입니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
최대 10 단어까지만 선택 가능합니다.
문제 정의
- 따라서 본 연구에서는 환경 호르몬인 다이옥신계 TCDD 독성 중에서 혈액성분조성, 지질대사, 항산화계효소 및 간 독성물질 관련대사에 관한 이상 현상에 대하여 녹차에 의한 방어 효과를 생화학적 연구를 통해 과학적으로 규명하고 그 실용도를 높이고자 하였다.
- 이와 같이 TCDD의 독성이 여러 가지 질병의 근원이 되고 있어 그 방어를 위해 다양한 생리활성을 내는 것으로 알려진 녹차를 고려해 보았다. 녹차의 생리활성을 내는 주체는 주로 catechin류로 알려져 있는데 catechin은 pholyphenol 화합물로서 flavanonol의 유도체이다(17).
가설 설정
-
1.
1)Mean±SD of 9 rats per group
. - 2)ValUes with different superscript letters in the same column are significantly different (p<0.05).
- 2)Values with different superscript letters in the same column are significantly different (p<0.05).
제안 방법
- 다이옥신계 TCDD에 노출된 흰쥐의 지질대사, 및 간 독성물질대사에 있어서 녹차의 방어효과를 알아보고자 Sprague-Dawley rat(수컷, 6주령)를 이용하여 녹차는 건분으로 1%, 3% 첨가식이를 공급하고 TCDD는 실험 초에 복강내 주입하여 3주간 실험하였다. 사육 종료후 혈액조성과 혈청, 간 및 변의 지질을 분석하고 간 조직에서 항산화 효소 활성도와간 독성물질대사 관련효소의 활성도를 즉정하였다.
- 3주간 실험하였다. 사육 종료후 혈액조성과 혈청, 간 및 변의 지질을 분석하고 간 조직에서 항산화 효소 활성도와간 독성물질대사 관련효소의 활성도를 즉정하였다. 체중증가와 식이섭취량이 TCDD투여군 모두에서 감소하였다.
- 실험식이에 사용한 녹차는 분말된 녹차로 산장녹차 식품회사에서 첫물 작설차를 구입하여 이용하였으며 녹차 첨가군의 식이중량조절은 corn starch의 양으로 조절하였다. 실험 동물의 체중과 식이섭취량은 2일에 한번씩 즉정하며 식이와 물은 자유롭게 급여 하고 물은 증류수를 급여 하였 다. 실험종료 전 3일 동안 변을 수집하였다.
- 실험동물 사육실 환경은 온도 22±2℃, 상대습도 65±5%로 유지하고 명암은 12시간 주기로 일정하게 조절하였고 실험기간은 3주간으로 하였다. 실험 종료 후 실험동물을 ether로 마취하여 복부 대동맥에서 혈액을 채취한 다음 혈액성상의 분석과 혈청의 생화학적 성분의 분석을 위해 EDTA 처리된 샘플과 처리되지 않은 샘플에 나누어서 주입하고 EDTA 처리되지 않은 혈액은 3,000 rpm에서 15분간 원심분리시켜 혈청을 분리하였다. 채혈 후간, 고환, 흉선, 뇌를 적출하여 무게를 즉정한 다음 액체질소로 급냉동시킨 후 혈청과 함께 -70℃의 냉동고에 보관하였다.
- 실험종료 전 3일 동안 변을 수집하였다. 실험동물 사육실 환경은 온도 22±2℃, 상대습도 65±5%로 유지하고 명암은 12시간 주기로 일정하게 조절하였고 실험기간은 3주간으로 하였다. 실험 종료 후 실험동물을 ether로 마취하여 복부 대동맥에서 혈액을 채취한 다음 혈액성상의 분석과 혈청의 생화학적 성분의 분석을 위해 EDTA 처리된 샘플과 처리되지 않은 샘플에 나누어서 주입하고 EDTA 처리되지 않은 혈액은 3,000 rpm에서 15분간 원심분리시켜 혈청을 분리하였다.
- 실험묭 동물로 체중 약 211 g 되는 Sprague-Daw ley(수컷흰쥐) 36마리를 대한 바이오링크에서 구입하여 4일간 상업묭 고형 배합사료로 환경에 적응시킨 후 4군으로 분배하여 대조군, TCDD군, TCDD +녹차 1%군, TCDD +녹차 3% 군으로 하였고 TCDD(ACCU Standard Inc., USA)는 corn oil: 아세톤을 9:1의 비율로 된 용액에 녹여 50 pg/kg BW 수준으로 실험 초에 복강내 주입하였고 대조군은 placebo로 corn oil:아세톤(9:1) 용액만을 동일수준으로 주입하였다(Fig. 1). 실험식이는 AIN-93G(32)를 기준으로 하였다(Table 1).
- 혈액성분 분석: 적혈구(red blood cells, RBC) 수, 백혈구 (white blood cells, WBC)수, 헤마토크리트(hematocrits), 헤모글로빈(hemoglobin, Hb) 농도 및 혈소판(platelets, PLT) 수의 즉정을 위해 항응고제인 EDTA가 처리된 튜브에 혈액을 채취한 다음 혈액자동분석기(NE-8000, TOA Medical Co., LTD, Japan)를 이용하여 즉정하였고, 혈청의 glutamic oxaloacetic transaminase(GOT), glutamic pyruvic trans- aminase(GPT) 및 alkaline phosphatase(ALP)의 활성도는 생화학자동분석기 (Hitachi-7150, Hitachi Medical Co., LTD, Japan)를 이용하여 분석하였다.
- 혈청, 간 및 변의 지질분석: 혈청 의 cholesterol, triglyceride, HDL-cholesterol, LDL-cholesterol 농도는 생화학 자동분석기를 이용하여 분석하였다. 간조직과 변 중의 총 지질함량은 Folch 등(33)의 방법으로, cholesterol 함량은 Sperry 와 Webb(34)의 방법으로, triglyceride 함량은 Fletcher(35)의 방법으로 정량하였다.
대상 데이터
- 실험식이는 AIN-93G(32)를 기준으로 하였다(Table 1). 실험식이에 사용한 녹차는 분말된 녹차로 산장녹차 식품회사에서 첫물 작설차를 구입하여 이용하였으며 녹차 첨가군의 식이중량조절은 corn starch의 양으로 조절하였다. 실험 동물의 체중과 식이섭취량은 2일에 한번씩 즉정하며 식이와 물은 자유롭게 급여 하고 물은 증류수를 급여 하였 다.
데이터처리
- 산출하였다. 각 군 간의 분석항목별 유의성 검증은 ANOVA test 후, Duncan's multiple range test로 검증하였다. 그 결과는 p<0.
- 실험결과는 SAS program을 이용하여 평균과 표준편차를 산출하였다. 각 군 간의 분석항목별 유의성 검증은 ANOVA test 후, Duncan's multiple range test로 검증하였다.
이론/모형
- 의 흐!], NADPH cytochrome P-450 reductase 활성 도는 Williams와 Kamin(41)의 방법에 의해, ethoxycoumarin- o-deethylase(ECOD)의 활성도는 Greenlee와 Poland(42)의 방법에 의해, benzphetamin-N-demethylase(BPND)의 활성도는 Thomas(43)의 방법에 의해 분석하고 마이크로좀 단백질 함량을 기준하여 계산하였으며 구체적인 분석방법은 본 저자의 선행연구(14)와 동일하게 하였다.
- 이용하여 분석하였다. 간조직과 변 중의 총 지질함량은 Folch 등(33)의 방법으로, cholesterol 함량은 Sperry 와 Webb(34)의 방법으로, triglyceride 함량은 Fletcher(35)의 방법으로 정량하였다. 변 중의 담즙산 함량은 Tokunaga(36)의 방법으로 변에서 담즙산을 추출한 후 담즙산 kit(Wako Co.
- 간조직과 변 중의 총 지질함량은 Folch 등(33)의 방법으로, cholesterol 함량은 Sperry 와 Webb(34)의 방법으로, triglyceride 함량은 Fletcher(35)의 방법으로 정량하였다. 변 중의 담즙산 함량은 Tokunaga(36)의 방법으로 변에서 담즙산을 추출한 후 담즙산 kit(Wako Co.)를 사용하여 즉정하였다.
- 1). 실험식이는 AIN-93G(32)를 기준으로 하였다(Table 1). 실험식이에 사용한 녹차는 분말된 녹차로 산장녹차 식품회사에서 첫물 작설차를 구입하여 이용하였으며 녹차 첨가군의 식이중량조절은 corn starch의 양으로 조절하였다.
- 항산화효소활성도 측정: 간 cytosol에서 superoxide disinutase(SOD)의 활성도는 Lee와 Yu(37)의 방법을 이용하여 즉정하였으며, 간 cytosol의 단백질함량을 Lowry 등(38)의 방법 에 의해 bovine serum albmnin(BSA)을 표준물질로 사용하여 즉정한 후 이를 기준하여 활성도를 산출하였다.
성능/효과
- 혈소판에서는 TCDD투여에 의해 대조군에 비하여 현저히 저하하였으나 녹차 3% 첨가식이에 의해 증가되는 경향을 보여 주었다(Table 3). Neutrophill% 는 염증에 상관성이 있는 것으로 TCDD 단독 투여군에서 대조군에 비하여 높은 수준이었고, 녹차 첨가군에서는 TCDD군에 비하여 약간 낮게 나타났다. 면역성에 관련되는 lymphocyte%는 대조군에 비하여 TCDD투여군에 의해 유의 적으로 감소하였으나 녹차 첨가량에 따라 개선되는 경향을 보였다(Fig.
- 간 마이크로좀의 cytochrome p-450(CYP)는 대조군에 비하여 TCDD 투여군에서 모두 증가되 는 경 향이 었고 NADPH CYP reductase는 TCDD 단독 투여군에 비하여 TCDD투여하고 녹차 3% 첨가식 이 한 군에서 유의적 감소되어 녹차에 의한 개선의 효과를 보여주었다(Table 4). Park(51)도 당뇨 상태의 쥐에서 녹차의 catechin이 CYP의 활성을 정상군 수준으로 개선시켰다고 하였다.
- 체중증가와 식이섭취량이 TCDD투여군 모두에서 감소하였다. 간과 뇌 및 고환의 중량은 TCDD투여군에서 모두 유의적으로 증가하였는데 흉선의 무게는 TCDD투여군 모두에서 대조군의 1/3 정도로 현저하게 감소하였고 녹차에 의한 효과는 보이지 않았다. 혈액성분에서 적혈구, 백혈구의 수와 헤모글로빈, 헤마토크리트의 값은 군 간에 유의적인 차이가 없었다.
- 혈청 triglyceride는 녹차 첨가식이에 의해 저하되는 경향을 보였다. 간의 콜레스테롤 및 triglyceride 함량은 TCDD투여에 의해 2배정도의 상승을 보였는데 녹차 3%첨가에 의해 억제작용이 나타났다. 변의 총 배설량과 총지질, 총콜레스테롤의 배설량이 녹차 첨가에 의해 현저하게 많았으며 특히 콜레스테롤 배설이 녹차 3% 첨가식이에 의해 유의적으로 증가하였다.
- 간의 콜레스테롤과 triglyceride 함량을 보면 대조군에 비하여 TCDD 투여군에서 2배 이상의 높은 수치를 나타내었는데 녹차 3% 혼합식이에 의해 콜레스테롤 및 triglyceride 수준이 저하되는 경향을 보였다(Fig. 6). Kiin(47)의 연구에서도 녹차 건분이 간 triglyceride와 콜레스테롤의 저하효과를 보였다고 하였다.
- 변의 총 배설량과 총지질, 총콜레스테롤의 배설량이 녹차 첨가에 의해 현저하게 많았으며 특히 콜레스테롤 배설이 녹차 3% 첨가식이에 의해 유의적으로 증가하였다. 따라서 녹차의 성분이 지질흡수를 저하시키고 배설을 촉진하는 작묭이 확인되었다. 항산화효소인 SOD의 활성도가 다른 군보다 녹차 3% 첨가식이군에서 유의적으로 높아 녹차의 항산화성 이 높은 것으로 나타났으며 간의 독성물질대사 효소 활성도에서 TCDD투여에 의한 NADPH cytochrome p-450 re- ductase의 상승을 녹차 3%첨가 식이에 의해, 그리고 cytochrome p-450 의존성 monooxigenase인 BPND는 KDD 투여에 의한 상승을 녹차 1% 첨가식이에 의해 유의적으로 감소시켰다.
- Neutrophill% 는 염증에 상관성이 있는 것으로 TCDD 단독 투여군에서 대조군에 비하여 높은 수준이었고, 녹차 첨가군에서는 TCDD군에 비하여 약간 낮게 나타났다. 면역성에 관련되는 lymphocyte%는 대조군에 비하여 TCDD투여군에 의해 유의 적으로 감소하였으나 녹차 첨가량에 따라 개선되는 경향을 보였다(Fig. 3).
- 7). 변 중 총 콜레스테롤 함량은 다른 군에 비하여 녹차 3% 첨가식이 군에서 유의적으로 높아 녹차의 콜레스테롤 배설효과도 명확하였다. 변 중 담즙산 배설량은 녹차 3%에서 약간 높은 경향을 보였다.
- 간의 콜레스테롤 및 triglyceride 함량은 TCDD투여에 의해 2배정도의 상승을 보였는데 녹차 3%첨가에 의해 억제작용이 나타났다. 변의 총 배설량과 총지질, 총콜레스테롤의 배설량이 녹차 첨가에 의해 현저하게 많았으며 특히 콜레스테롤 배설이 녹차 3% 첨가식이에 의해 유의적으로 증가하였다. 따라서 녹차의 성분이 지질흡수를 저하시키고 배설을 촉진하는 작묭이 확인되었다.
- 항산화효소인 SOD의 활성도가 다른 군보다 녹차 3% 첨가식이군에서 유의적으로 높아 녹차의 항산화성 이 높은 것으로 나타났으며 간의 독성물질대사 효소 활성도에서 TCDD투여에 의한 NADPH cytochrome p-450 re- ductase의 상승을 녹차 3%첨가 식이에 의해, 그리고 cytochrome p-450 의존성 monooxigenase인 BPND는 KDD 투여에 의한 상승을 녹차 1% 첨가식이에 의해 유의적으로 감소시켰다. 이상의 결과에서 녹차가 TCDD투여 에 의한 간지질의 축적을 억제시키고 변으로 지질배설량을 증가시켰으며 간 기능에 관련된 효소활성도를 정상화시키는 경향이 있었고 항산화효소인 SOD 활성도를 상승시켜 항산화성을 높이는 것이 확인되었다.
- 일일 변 배설량은 군 간에 유의적인 차이는 없었으나 녹차 3% 첨가 식이군에서 다른 군에 비하여 약간 높은 경향을 보였고, 변 중 총지질 배설량은 대조군에 비하여 녹차 첨가군에서 모두 유의적으로 증가하여 녹차에 의한 지질배설 효과가 뚜렷하게 나타났다(Fig. 7). 변 중 총 콜레스테롤 함량은 다른 군에 비하여 녹차 3% 첨가식이 군에서 유의적으로 높아 녹차의 콜레스테롤 배설효과도 명확하였다.
- 체중 100 g당 장기 무게를 보면 TCDD 투여군 모두에서 간과 뇌및 고환무게가 유의적으로 증가되었고 흉선의 무게는 대조군의 1/3정도로 현저하게 감소하였다(Fig. 2). Harris 등(4)도 TCDD가 면역의 중심기관인 흉선을 심하게 위축 시켜 면역기능을 억제한다고 하였다.
- 체중증가와 식이섭취량이 TCDD 투여군에서 모두 유의적으로 감소되었다.
- Park(51)도 당뇨 상태의 쥐에서 녹차의 catechin이 CYP의 활성을 정상군 수준으로 개선시켰다고 하였다. 한편 TCDD에 의해 유도된 CYP 동위효소의 유형을 확인하기 위해 CYP1A, CYP1A1 specific monooxygenase 로 알려진(52) 7-ethoxycoumarino-deethylase(ECOD)와 CYP2B Specific monooxygenase로 알려진(52) benzphetamine N-demethylase(BPND)의 활성도를 Table 4에서 보면 ECOD 활성도는 녹차 3% 첨가식이에서 높은 반면 BPND 활성도는 TCDD 단독 투여군에서 유의적으로 높았는데 녹차 1% 첨가식이에 의해 현저하게 감소되었다. 이들의 활성도가 TCDD투여에 의해 상승된 것은 Kang(53)의 연구에서도 유사한 결과이었다.
- 따라서 녹차의 성분이 지질흡수를 저하시키고 배설을 촉진하는 작묭이 확인되었다. 항산화효소인 SOD의 활성도가 다른 군보다 녹차 3% 첨가식이군에서 유의적으로 높아 녹차의 항산화성 이 높은 것으로 나타났으며 간의 독성물질대사 효소 활성도에서 TCDD투여에 의한 NADPH cytochrome p-450 re- ductase의 상승을 녹차 3%첨가 식이에 의해, 그리고 cytochrome p-450 의존성 monooxigenase인 BPND는 KDD 투여에 의한 상승을 녹차 1% 첨가식이에 의해 유의적으로 감소시켰다. 이상의 결과에서 녹차가 TCDD투여 에 의한 간지질의 축적을 억제시키고 변으로 지질배설량을 증가시켰으며 간 기능에 관련된 효소활성도를 정상화시키는 경향이 있었고 항산화효소인 SOD 활성도를 상승시켜 항산화성을 높이는 것이 확인되었다.
- 항산화효소인 간조직의 superoxide dismutase(SOD)의 활성도를 보면 대조군과 TCDD 단독 투여군에 비하여 TCDD 처 리하고 녹차 3%를 공급한 군에서 유의적으로 높게 나타났다(Table 4). Kim(47)의 연구에서도 녹차 건분군에서대조군에 비하여 SOD활성도가 유의적으로 높았으며 Chang 과 Ryu(50)의 연구에서는 녹차 분말군과 녹차의 에탄올 추출물군에서 SOD활성도가 대조군에 비하여 유의적인 차이는 없었지만 높은 경향을 보여주었다고 하였다.
- 혈액성분에서 적혈구, 백혈구의 수와 헤모글로빈, 헤마토크리트의 값에서는 군 간에 유의적인 차이가 없고, 정상수준의 범위를 나타내었다. 혈소판에서는 TCDD투여에 의해 대조군에 비하여 현저히 저하하였으나 녹차 3% 첨가식이에 의해 증가되는 경향을 보여 주었다(Table 3).
- 간과 뇌 및 고환의 중량은 TCDD투여군에서 모두 유의적으로 증가하였는데 흉선의 무게는 TCDD투여군 모두에서 대조군의 1/3 정도로 현저하게 감소하였고 녹차에 의한 효과는 보이지 않았다. 혈액성분에서 적혈구, 백혈구의 수와 헤모글로빈, 헤마토크리트의 값은 군 간에 유의적인 차이가 없었다. 혈소판의 수와 lymphocyte%가 TCDD투여에 의해 저하되었다가 녹차 3% 첨가군에서 증가되어 개선되는 경향을 보였다.
- 혈청 GOT활성도는 대조군에 비하여 TCDD 투여군에서 약 2배 정도 증가하였다가 녹차첨가군에 의해 현저히 저하되어 개선시켰고, 혈청 ALP활성도도 대조군에 비하여 TCDD투여군에서 유의적으로 높았고 녹차첨가에 의해 저하되어 개선되는 경향을 보였으며 혈청 GPT활성도는 군 간에 유의적인 차이가 없었다(Fig. 4). Kien과 G anther(44)는 간 기능이 손상되면 혈청 총 단백질 또는 알부민농도가 감소하고 GOT, GPT 및 ALP 등의 활성도가 상승한다고 보고하였다.
- 혈청 총 콜레스테롤과 HDL-, LDL-콜레스테롤함량이 대조군에 비하여 TCDD투여군에서 모두 상승하였으며 특히 HDL-콜레스테롤함량은 유의적인 차이를 나타냈다(Fig. 5). Tomita 등(2D은 녹차가 총콜레스테롤을 저하시켰다고 하였는데 본 연구에서는 TCDD의 콜레스테롤 상승작용에 대하여 녹차의 저하작용이 보이지 않았다.
- 간 기능 지표가 되는 효소인 혈청 GOT와 ALP활성도에서는 TCDD투여에 의한 상승을 녹차첨가에 의해 저하시켜 개선되었다. 혈청 총콜레스테롤과 HDL-, LDL-콜레스테롤함량은 모두 대조군보다 TCDD 투여군에서 모두 높은 경향을 보였으며 녹차의 콜레스테롤 저하효과는 나타나지 않았다. 혈청 triglyceride는 녹차 첨가식이에 의해 저하되는 경향을 보였다.
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.