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문제 정의
- 본 연구는 방사선 조사에 따른 오가피가 생체면역 증진에 어떠한 효과가 있는지 알아보고자 마우스를 저선량(IGy), 중선량(3Gy), 고선량(10Gy)의 방사선 조사에 I다른 소장음와의 생존률 조혈세포의 생존률, apoptosis 유발, 지질과산화 억제효과 등을 관찰하였다. 장관상피세포내 apoptosis 측정결과 저선량 방사선 조사에 대한 생체면역 증진 효과를 보였으며, 장관상피세포의 음 와 생존률과 지질과산화 억제작용을 검사한 결과 고선량 방사선에 조사 대한 생체면역 증진 효과를 보였다.
제안 방법
- 60Coy선(선량율: 10Gy/min)을 저선량 조사 실험(IGy) 에는 6초간, 중선량 조사 실험(3Gy)과 고선량 조사 실험(10Gy)에는 60초간 각각 1회씩 전신조사 하였다.
- 생성된 lipid peroxide 함량을 측정하였다. 각 실험군은 정상 대조군, 방사선 조사대조군(10Gy), 오가피 투여 및 방사선 조사 군(10Gy)으로 나누었으며, 각 군당 6마리를 할당하였다(Table 4). 빙■사선 조사 4시간 후 일정양의 liver를 homogenizer(Tissue Trearor Homogenizer, biospec product, Ins.
- 방사선 조사 후 12 시간에 각 실험군 마우스를 희생시켜 근위 소장부위를 채취하고, Carnoy怎 solution에 고정하였다. 각 마우스당 1。개의 소장 절편을 제작하여, 파라핀에 포매한 후 DNA fragments 측정을 위한 in situ apoptosis detection kit(Apop S7000, USA)를 사용하여 in situ DNA end-labelling(ISEL)을 실시하였다.
- 고선량 방사선(10Gy) 조사 후 오가피 투여의 생체면역 증진 효과를 알아보기 위하여 내재성 비장집락세포 검사를 오가피 투여 및 방사선 조사군(10Gy)과 방사선 대조군(10Gy), 정상 대조군에서 검사한 결과는 Fig. 2와 같다. 정상 대조군의 Crypt per circumference는 157.
- 고선량(10Gy)에 대한 방사선 방호 효과 관찰을 위한 모델로 Ijiri 등의 방법을 적용하였다也 각 실험군은 정상대조군, 방사선 조사대조군(10Gy), 오가피 투여 및 방사선 조사군(10Gy)으로 나누었으며, 각 군당 6마리를 할당하였다. 방사선 조사 후 4일 째 마우스를 희생시켜 근위 소장 부위를 채취하고, 각 마우스당 8-T0개의 소장편을 통상적인 방법에 따라 파라핀 포매하고 절편을 제작하여 각 마우스당 8개의 종절된 소장 표본의 가장자리에 위치하는 소장음와(crypt)의 수를 광학현미경으로 측정하였다.
- 실험군은 정상대조군, 방사선 조사대조군(IGy), 오가피 투여 및 방사선 조사군(IGy)으로 나누었으며, 각 군당 6마리를 할당하였다(Table 2). 방사선 조사 후 12 시간에 각 실험군 마우스를 희생시켜 근위 소장부위를 채취하고, Carnoy怎 solution에 고정하였다. 각 마우스당 1。개의 소장 절편을 제작하여, 파라핀에 포매한 후 DNA fragments 측정을 위한 in situ apoptosis detection kit(Apop S7000, USA)를 사용하여 in situ DNA end-labelling(ISEL)을 실시하였다.
- 실험군은 정상대조군, 방사선 조사대조군(3Gy), 오가피 투여 및 방사선 조사군(3Gy)으로 나누었으며, 각 군당 6마리를 할당하였다(Table 3). 방사선 조사 후 2 일 째 마우스를 희생시켜 체중과 비장, 간장의 무게를 측정하고, 내재성 비장집락세포 검사는 비장을 채취하여 Bouin's solution에 넣어 24시간 고정 후, 표면에 형성된 조혈집락을 실체 현미경으로 관찰하여, 시각적으로 측정 가능한 colony 수를 계수하였다.
- 각 군당 6마리를 할당하였다. 방사선 조사 후 4일 째 마우스를 희생시켜 근위 소장 부위를 채취하고, 각 마우스당 8-T0개의 소장편을 통상적인 방법에 따라 파라핀 포매하고 절편을 제작하여 각 마우스당 8개의 종절된 소장 표본의 가장자리에 위치하는 소장음와(crypt)의 수를 광학현미경으로 측정하였다.
- 본 연구에서는 방사선 조사 마우스에서 오가피의 면역 활성효과를 알아보기 위하여 방사선 조사 5일 전부터 오가피를 투여하고 저선량QGy), 중선량(3Gy), 고선량(10Gy)의 방사선을 조사한 후 소장 절편을 이용한 apoptosis 측정, 내재성 비장 집락 세포 검사, 장관음와 세포 생존률 관찰, 지질과산화에 대한 영향은 마우스의 간조직에서 TBA(thiobarbituric acid) reaction을 이용하여 확인하였다.
- 각 실험군은 정상 대조군, 방사선 조사대조군(10Gy), 오가피 투여 및 방사선 조사 군(10Gy)으로 나누었으며, 각 군당 6마리를 할당하였다(Table 4). 빙■사선 조사 4시간 후 일정양의 liver를 homogenizer(Tissue Trearor Homogenizer, biospec product, Ins.)를 이용해 균질화시킨 다음 Pierce BCA protein assay kit를 이용하여 단백질을 정량하였다. sample 당 단백질량을 3mg이 되게 균질액을 취하고 여기에 8.
- 실험 후 경추 탈골로 희생시켜 전자저울(Dragon 204/2, Mettler Toledo groups, China)을 사용하여 체중 및 주요 장기 무게를 측정하였다.
- 등의 방법을 적용하였다均. 실험군은 정상대조군, 방사선 조사대조군(3Gy), 오가피 투여 및 방사선 조사군(3Gy)으로 나누었으며, 각 군당 6마리를 할당하였다(Table 3). 방사선 조사 후 2 일 째 마우스를 희생시켜 체중과 비장, 간장의 무게를 측정하고, 내재성 비장집락세포 검사는 비장을 채취하여 Bouin's solution에 넣어 24시간 고정 후, 표면에 형성된 조혈집락을 실체 현미경으로 관찰하여, 시각적으로 측정 가능한 colony 수를 계수하였다.
- 등의 방법을 적용하였다"). 실험군은 정상대조군, 방사선 조사대조군(IGy), 오가피 투여 및 방사선 조사군(IGy)으로 나누었으며, 각 군당 6마리를 할당하였다(Table 2). 방사선 조사 후 12 시간에 각 실험군 마우스를 희생시켜 근위 소장부위를 채취하고, Carnoy怎 solution에 고정하였다.
- 동결건조와 추출물을 실험 사용 전까지 -70 °C로 냉동 보관하였다. 투여 방법은 방사선 조사 전 5일부터 12시간 간격으로, 방사선 조사 후는 부검시까지 구강 내에 50 mg/kg을 경구 투여 하였다.
대상 데이터
- 마우스에 대한 방사선 조사는 실험용 방사선 조사기 (Nordion international Gamma-cell elan 3000, Canada)를 사용하였다. 60Coy선(선량율: 10Gy/min)을 저선량 조사 실험(IGy) 에는 6초간, 중선량 조사 실험(3Gy)과 고선량 조사 실험(10Gy)에는 60초간 각각 1회씩 전신조사 하였다.
- 실험동물은 1。주령의 Balb/c mice(Damul science, Korea) 72마리를 사용하였으며, 1주일간의 실험환경 적응기를 거친 후 실험에 사용하였다. 실험실은 12시간 주기로 명암을 주었고, 실내온도는 23 ± 1 °C를 유지하였으며, 습도 55 ± 5%를 일정하게 유지하였다.
데이터처리
- 0 통계 프로그램을 사용하여 분석하였다. 체중 및 주요장기무게는 일원 배치 분산분석(one-way ANOVA)을 실시하였고, 나머지는 독립표본 t- 검정(Independent t-test)을 실시하였다. p-value는 0.
이론/모형
- 저선량(IGy)에 대한 방사선 방어효과 측정을 위한 모델로 Orazi 등의 방법을 적용하였다"). 실험군은 정상대조군, 방사선 조사대조군(IGy), 오가피 투여 및 방사선 조사군(IGy)으로 나누었으며, 각 군당 6마리를 할당하였다(Table 2).
- Ohakawa 등叨의 방법에 준하여 방사선 조사 마우스 간 조직 내에 생성된 lipid peroxide 함량을 측정하였다. 각 실험군은 정상 대조군, 방사선 조사대조군(10Gy), 오가피 투여 및 방사선 조사 군(10Gy)으로 나누었으며, 각 군당 6마리를 할당하였다(Table 4).
- 중선량(3Gy)에 대한 방사선 방어효과 측정을 위한 모델로 Milas 등의 방법을 적용하였다均. 실험군은 정상대조군, 방사선 조사대조군(3Gy), 오가피 투여 및 방사선 조사군(3Gy)으로 나누었으며, 각 군당 6마리를 할당하였다(Table 3).
성능/효과
- 고선량 방사선 조사 후 소장음와 생존률 측정에서는 오가피투여 및 방사선 조사군(10Gy)은 59.45 ± 1226개로 방사선 대조군 (10Gy) 35.78 ± 9.기개에 비해 유의한 증가를 보였다. 이러한 결과는 김성호 등끼의 연구결과와 일치 하였다.
- 이러한 결과는 김성호 등끼의 연구결과와 일치 하였다. 또한 방사선에 의해 유도되는 산화적 생체 손상에 대한 방호효과로 간 조직에서 일어나는 지질과산화 억제정도를 알아본 결과, 오가피 투여 및 방사선조사군QOGy)은 41.31 ± 0.51 로 방사선 대조군(10Gy) 51.15 ± 1.67 에 비해 유의한 차이를 보였고, 약 51%의 지질과산화 억제 효과를 확인하였다. 이러한 생체막의 주요성분인 지질의 과산화를 효과적으로 억제한 결과는 오헌 등껴의 연구결과와 일치하였다.
- 관찰되지 않았다. 또한 비장과 간의 무게 또한 정상 대조군에 비해 모든 군에서 증가함을 관찰할 수 있었으나 역시 통계학적 유의성은 없었다(Table 1).
- 본 연구는 방사선 조사 후 오가피를 투여한 마우스의 체중, 비장 그리고 간의 중량을 측정한 결과 체중에서 정상 대조군에 비하여 오가피 투여 및 방사선 조사군QOGy)과 오가피 투여 및 방사선 조사군(3Gy)에서 증가를 보였으며, 비장과 간의 중량에서도 오가피 투여 및 방사선 조사군(IGy)에서 유의한 증가를 보였다. 장관음와 조직에서 세포사 발생률을 측정한 결과, 오가피투여 및 방사선 조사군(IGy)이 방사선 대조군(IGy)군과 정상 대조군에 비해 유의한 차이를 보였다.
- 사용하였다. 실험실은 12시간 주기로 명암을 주었고, 실내온도는 23 ± 1 °C를 유지하였으며, 습도 55 ± 5%를 일정하게 유지하였다.
- 대한 억제정도는 Table 4와 같다. 오가피 투여 및 방사선 조사 군(10Gy)은 41.31 ± 0.51 로 방사선 대조군(10Gy) 51.15 ± 1.67 에 비해 유의한 차이를 보였고(p < 0.05), 약 51%의 지질과산화억제 효과를 확인하였다.
- 이상의 결과로 보아 오가피 추출물 투여는 저선량과 고선량 방사선 조사에 의한 면역이 억압된 생체에서 조혈작용 및 생체면역 증진에 효과적인 것으로 사료된다.
- 이러한 생체막의 주요성분인 지질의 과산화를 효과적으로 억제한 결과는 오헌 등껴의 연구결과와 일치하였다. 이상의 결과로 보아 오가피 투여는 생체 면역계에 대해 장관 음 와 세포에서 apoptosis에 의한 세포사를 감소시키고 내재성 비장 집락 세포 증가에 다소의 효과를 나타냈으며, 고선량에서도소장음와의 생존률 증가와 생체막의 주성분인 지질과산화를 효과적으로 억제하여 방사선 조사에 대한 유의성 있는 생체면역증진 효과를 나타내어 오가피 투여가 방사선 조사에 의해 면역이 억압된 생체에서 면역활성 효과가 있음을 확인하였다.
- 관찰하였다. 장관상피세포내 apoptosis 측정결과 저선량 방사선 조사에 대한 생체면역 증진 효과를 보였으며, 장관상피세포의 음 와 생존률과 지질과산화 억제작용을 검사한 결과 고선량 방사선에 조사 대한 생체면역 증진 효과를 보였다. 그러나 비장의 내재성 비장집락세포 분석결과 중선량 방사선에 조사 대한 생체면역 증진 효과는 유의성이 없었다.
- 장관음와 조직에서 세포사 발생률을 측정한 결과, 오가피투여 및 방사선 조사군(IGy)이 방사선 대조군(IGy)군과 정상 대조군에 비해 유의한 차이를 보였다. Apoptosis에 의한 세포사는 DNA 손상에 의한 급성효과의 결과로 인식되고 있으며, 소장의 움 세포는 성숙개체에서 가장 빠르게 증식하는 세포로써 각 움은 250개의 세포로 구성되며 이중 약 150개가 세포증식주기에 포함되어 있다21).
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2. 소장세포의 Apoptosis 측정
정상 대조군은 움당 apoptotic c이1은 0.081 ± 0.042개가 관찰되었으며, 이에 비해 방사선 대조군(IGy)은 apoptotic c이1은 3.139 士 0.024개로 높게 증가됨을 확인하였다. 오가피 투여 및 방사선 조사군(IGy)은 2.
- 중선량 방사선(3Gy) 조사 후 내재성 비장 집락세포수를 비교한 결과 방사선 대조군(3Gy)은 집락세포수가 4.918 ± 0.117개였고, 오가피 투여 및 방사선 조사군(3Gy)의 비장집락 세포 수는 4.108 ± 0.747개로 이러한 결과는 선행 연구에서 김성호 등끄이당귀 천궁, 백작약, 숙지황을 복합처방한 사물탕을 복강으로 투여한 마우스의 생체면역 증진효과를 증명한 결과와 일치하였으나 통계적 유의성은 없었다.
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