The methanol extract from seed of Myristica fragrans (Myristicaceae) demonstrated a potent inhibition on the pro-liferation of cultured human tumor cells such as A549 (non small cell lung), SK-OV-3 (ovary), SK-MEL-2 (melanoma), XF498 (central nerve system) and HCT-15 (colon) in vitro. By the continu...
The methanol extract from seed of Myristica fragrans (Myristicaceae) demonstrated a potent inhibition on the pro-liferation of cultured human tumor cells such as A549 (non small cell lung), SK-OV-3 (ovary), SK-MEL-2 (melanoma), XF498 (central nerve system) and HCT-15 (colon) in vitro. By the continuous effort to purify the active components responsible far the anti-proliferative effect on tumor cell lines, we have isolated eleven kinds of lignan components, i. e., safrole (1), machilin A (2), licarin B (3), macelignan (4), mere-dihydroguaiaretic acid (5), mγnstargenol A (6), methoxyeugenol (7), machilin F (8), licarin A (9), nectandrin B (10), and 2-(4-allyl-2,6-dimethoxyphenoxy)-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propan-1-ol (11) together with a novel furan fatty acid, (E)-3-(3-methyl-5-pentylfuran-2-yl) acrylic acid (12) from seed extract of M. fragrans. Chemical structures of the isolated components (1-12) were established bγ the aid of NMR spectroscopic analyses, i. e., COSY HMQC and HMBC. Each of the Isolates demonstrated a potent inhibition on the proliferation of cultured human tumor cells such as A549 (non small cell lung), SK-OY-3 (ovary), SK-MEL-2 (melanoma) and HCT-15 (colon) in vitro.
The methanol extract from seed of Myristica fragrans (Myristicaceae) demonstrated a potent inhibition on the pro-liferation of cultured human tumor cells such as A549 (non small cell lung), SK-OV-3 (ovary), SK-MEL-2 (melanoma), XF498 (central nerve system) and HCT-15 (colon) in vitro. By the continuous effort to purify the active components responsible far the anti-proliferative effect on tumor cell lines, we have isolated eleven kinds of lignan components, i. e., safrole (1), machilin A (2), licarin B (3), macelignan (4), mere-dihydroguaiaretic acid (5), mγnstargenol A (6), methoxyeugenol (7), machilin F (8), licarin A (9), nectandrin B (10), and 2-(4-allyl-2,6-dimethoxyphenoxy)-1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propan-1-ol (11) together with a novel furan fatty acid, (E)-3-(3-methyl-5-pentylfuran-2-yl) acrylic acid (12) from seed extract of M. fragrans. Chemical structures of the isolated components (1-12) were established bγ the aid of NMR spectroscopic analyses, i. e., COSY HMQC and HMBC. Each of the Isolates demonstrated a potent inhibition on the proliferation of cultured human tumor cells such as A549 (non small cell lung), SK-OY-3 (ovary), SK-MEL-2 (melanoma) and HCT-15 (colon) in vitro.
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문제 정의
전보에 이어 저자 등은 계속적으로 육두구 methanol 추출물로부터 활성유도분획방법에 따라 항암활성성분들을 추적한 결과 전보에 발표한 6종의 lignar계 화합물 이외에 추가적으로 6종의 항암활성 성분들을 분리 정제하였다. 본보에서는 전보에 이어 추가로 분리된 6종의 항암활성 성분들의 이화학적 성상 및 기기분석 자료를 통한 화학구조의 규명 및 각 화합물들의 인체유래 암세포주에 대한 시험관 내 (in vitro) 세포증식저해효과에 대하여 보고하고자 한다. 육두구 (肉苣蔻, Myristica jiagraYis)는 육두구과 (Myristicaceae)에 속하는 상록교목으로 열매를 따서 씨를 꺼내어 말린 후 검은색의 단단한 씨껍질을 벗기고 석회즙에 하룻밤 담갔다가 상온에 말린 것을 육두구(肉苣蔻, Myrsticae Semen)라 칭하고 있으며 한방에서는 주로 위경, 대장경에 작용한다고 알려져 있다.
제안 방법
p data-page="1">저자 등은 이미 전보에서 A549 (인체유래 비소세포암주) 등 5종의 인체유래 암세포주를 이용한 시험관 내 (in vitro) 암세포증식저해활성을 지표로 하여 육두구 methanol 주줄물로부터 safrole (1), machilin A (2), licarin B (3), macelignan (4), mesa-dihydroguaiaretic acid (5) and myrstargenol A (6) 등 6종의 항암활성성분을 분리하고 분리된 각 화합물들의 항암효능을 연구 보고한 바 있다. 전보에 이어 저자 등은 계속적으로 육두구 methanol 추출물로부터 활성유도분획방법에 따라 항암활성성분들을 추적한 결과 전보에 발표한 6종의 lignar계 화합물 이외에 추가적으로 6종의 항암활성 성분들을 분리 정제하였다. 본보에서는 전보에 이어 추가로 분리된 6종의 항암활성 성분들의 이화학적 성상 및 기기분석 자료를 통한 화학구조의 규명 및 각 화합물들의 인체유래 암세포주에 대한 시험관 내 (in vitro) 세포증식저해효과에 대하여 보고하고자 한다.
사용하였다. 선광도는 JASCO DIP-4 digital polarimeter 를 사용하였고, low resolution MS (70 eV) 및 high resolution MS는 JEOL사의 JMS-DX 303 mass s* pectrometer 사용하였으며, column packing용 silica gele Kiesel gel 60 (Merck)를 사용하였고, TLC plate는 Kiesel gel 60F254 (Merck)을 사용하였다. 발색 시약은 10% JSQ 을 사용하였으며 UV 254 nm, 365nm에서 검출하였다.
화합물의 분리 - EtOAc 분획 (60 g)을 silica column chromatography (0-hexane:EtOAc= 10:1~0:1, MeOH)를 실시하여 5개의 분획 (FeI~Fr.5)으로 나누었다. 이 중 Fr.
화합물 은 전보에 보고한 바와 같이 MS, 1H-NMR 및 13C-NMR spectrum data를 종합하여 각각 safrole (1), machilin A (2), licarin B (3), macelignan (4), dihydroguaiaretic acid (5) 및 myristargenol A (6)로 동정하였다"화합물 7은 미황색 oit상 물질로서 MS, 1H-NMR 및 13C-NMR spectrum dats를 검토하고 표품과 비교한 결과 methoxyeu- genoE 동정하였다화합물 ae 미황색 oil상 물질로서 EIMS (M\ 342), 1H-NMR과 13C-NMR d를 통하여 분자식을 C20H22°5로 주정하였으며 !H-NMR spectrum에서 각각 하나의 methoxyl group (6 3.88), methylenedioxyl group (5 5.
대하여 농도 의존적으로 양호한 세포증식 저해효과를 나타내었다. 육두구(肉萱蔻, Myristicae Semei MeOH 추출물을 활성유도 분획법 (Bioactivity-directed fractionation) 에 따라 각종 chromatography로 정제한 결과 11 종의 lignan 계 화합물 (1 ~11) 및 신규 fiiran fatty acid인 (£)-3-(3'-methyl- 5'-pentyIfuran-2f-yl) aciylic acid (12)을 각각 활성성분으로 분리 정제하였다. 분리된 화합물들은 각각 물리화학적 성상과 기기 분석 ('h-nmr, 13c-nmr)소견을 종합한 결과 safrole (1), machilin A (2), licarin B (3), macelignan (4), dihydroguaiaretic acid (5) 및 myrstargenol A (6) methoxyeugenol (7), malilin F (8), licarin A (9), nectandrin B (10), 2-(4-allyl-2, 6-dimethoxyphenoxy)-1 -(4-hydroxy-3- methoxy-phenyl)-propan-1 -ol (11)로 확인 동정되었다.
대상 데이터
실험재료 - 본 실험에 사용된 생약재 육두구 (Myristicae Semen)는 2003년 10월에 시중 건재상에서 구입하여 국민대학교 김 영균 교수의 감정 후 실험에 사용하였으며 표품은 한국화학연구원 (표본번호 KR0197-2003)에 보관되어 있다.
기기 및 시약 - NMRe Brucker의 AM-300과 AMX 500 을 사용하였다. 선광도는 JASCO DIP-4 digital polarimeter 를 사용하였고, low resolution MS (70 eV) 및 high resolution MS는 JEOL사의 JMS-DX 303 mass s* pectrometer 사용하였으며, column packing용 silica gele Kiesel gel 60 (Merck)를 사용하였고, TLC plate는 Kiesel gel 60F254 (Merck)을 사용하였다.
추출, 분획 및 column chromatography용 시약은 1급 시약을 정제 없이 사용하였고 나머지 시약은 특급 시약 혹은 1급 시약을 정제하여 사용하였다. 세포독성 실험은 sulforhodamin B (SRB) assay방법을 응용하여 수행하였다 실험에 사용한 암세포 주들은 A549 (non small cell lung carcinoma), SK-OV-3 (ademoncarcinoma, ovary malignant ascites), SK-MEL-2 (malignant melanoma, metastasis to skin of thigh), XF-498 (central nerve system tumor) 및 HCT-15 (colon adenocar- cinoma)이며 모두 human origin tumor cell line들로써 , 미국의 국립암연구소(NCI)로부터 분양받아 한국화학연구원에서 계대배양 중인 것을 사용하였다.
성능/효과
°5로 주정하였으며 !H-NMR spectrum에서 각각 하나의 methoxyl group (6 3.88), methylenedioxyl group (5 5.95) 및 8 5.66에서 hydroxyl (D2O exchangeable) peak을 관찰할 수 있었다. 한편 13C-NMR spectrum에서는 총 20개의 carbon sigr이 관찰되었으며 각각의 signal을 문헌치와 비교하여 본 결과 화합물 3은 machilin F [7R, 7'S, 8R, 인S]로 동정할 수 있었다.
66에서 hydroxyl (D2O exchangeable) peak을 관찰할 수 있었다. 한편 13C-NMR spectrum에서는 총 20개의 carbon sigr이 관찰되었으며 각각의 signal을 문헌치와 비교하여 본 결과 화합물 3은 machilin F [7R, 7'S, 8R, 인S]로 동정할 수 있었다.
2 (C-7)의 carbon과 각각 상관관계를 보여주었다. 기타 니MQC, HMBC s* pectra 검토하여 본 결과 화합물 12는 furan fatty acid의 일종인 (E)-3- (3'-methyl-5'-pentyl furan-2'-yl) acrylic acid임을 알 수 있었으며 현재까지 보고 된 바 없는 신규화합물임을 알 수있다었다.'
분리 정제된 각 lignan계 화합물(1-11)를 각각 SRB 방법으로 A549(비 소세포폐 암주), SK-OV-3 (난소암주), SK- MEL-2 (피부종양주), XF-498 (중추신경 계종양주) 및 HCT- 15 (직장종양주) 등 5종의 human tumor cells에 대한 시험관내 세포증식 저해효과를 검색하여 본 결과 모든 화합물들이 각각의 인체유래 암세포주에 대하여 농도 의존적으로 우수한 세포증식저해 효과를 보여주었다. 화합물들의 구조에 따른 세포증식저해 효과의 변화 즉 의미있는 구조 활성 상관관계는 관찰되지 못하였다.
육두구(肉萱蔻, Myristicae Semei MeOH 추출물을 활성유도 분획법 (Bioactivity-directed fractionation) 에 따라 각종 chromatography로 정제한 결과 11 종의 lignan 계 화합물 (1 ~11) 및 신규 fiiran fatty acid인 (£)-3-(3'-methyl- 5'-pentyIfuran-2f-yl) aciylic acid (12)을 각각 활성성분으로 분리 정제하였다. 분리된 화합물들은 각각 물리화학적 성상과 기기 분석 ('h-nmr, 13c-nmr)소견을 종합한 결과 safrole (1), machilin A (2), licarin B (3), macelignan (4), dihydroguaiaretic acid (5) 및 myrstargenol A (6) methoxyeugenol (7), malilin F (8), licarin A (9), nectandrin B (10), 2-(4-allyl-2, 6-dimethoxyphenoxy)-1 -(4-hydroxy-3- methoxy-phenyl)-propan-1 -ol (11)로 확인 동정되었다. 한편 분리된 화합물 (1-12) 들을 각각 A549, SK-OV-3, SK-MEL- 2, XF-498 및 HCT-15 등 5종의 human tumor cells에 대한 시험관내 세포증식저해 효과를 검색하여 본 결과 양호한 효과를 나타내었다.
분리된 화합물들은 각각 물리화학적 성상과 기기 분석 ('h-nmr, 13c-nmr)소견을 종합한 결과 safrole (1), machilin A (2), licarin B (3), macelignan (4), dihydroguaiaretic acid (5) 및 myrstargenol A (6) methoxyeugenol (7), malilin F (8), licarin A (9), nectandrin B (10), 2-(4-allyl-2, 6-dimethoxyphenoxy)-1 -(4-hydroxy-3- methoxy-phenyl)-propan-1 -ol (11)로 확인 동정되었다. 한편 분리된 화합물 (1-12) 들을 각각 A549, SK-OV-3, SK-MEL- 2, XF-498 및 HCT-15 등 5종의 human tumor cells에 대한 시험관내 세포증식저해 효과를 검색하여 본 결과 양호한 효과를 나타내었다.
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