인삼의 부위별 페놀성 성분 함량 및 멜라닌 생성억제효과 Quantitative Analysis of Phenolic Compounds in Different parts of Panax ginseng C.A. Meyer and Its Inhibitory Effect on Melanin Biosynthesis원문보기
국내산 인삼의 부위별 quercetin, p-coumaric acid, maltol, esculetin의 함량을 측정한 결과 잎에서는 quercetin과 esculetin이 주근에서는 p-coumaric acid가 다량 함유되어 있었다. 이중잎의 EA 분획물은 melan-a 세포주에서 뛰어난 멜라닌 생성억제 활성을 보였으며, 이의 주요성분인 quercetin과 esculetin이 tyrosinase 활성억제도, melan-a 세포주에서의 멜라닌 생성억제도, UV-흡수도 측정에서 모두 우수한 활성을 나타내는 결과로 미루어 인삼의 잎은 피부미백을 목적으로 하는 기능성 소재로 이용될 수 있는 가능성을 가지는 것으로 사료된다.
국내산 인삼의 부위별 quercetin, p-coumaric acid, maltol, esculetin의 함량을 측정한 결과 잎에서는 quercetin과 esculetin이 주근에서는 p-coumaric acid가 다량 함유되어 있었다. 이중잎의 EA 분획물은 melan-a 세포주에서 뛰어난 멜라닌 생성억제 활성을 보였으며, 이의 주요성분인 quercetin과 esculetin이 tyrosinase 활성억제도, melan-a 세포주에서의 멜라닌 생성억제도, UV-흡수도 측정에서 모두 우수한 활성을 나타내는 결과로 미루어 인삼의 잎은 피부미백을 목적으로 하는 기능성 소재로 이용될 수 있는 가능성을 가지는 것으로 사료된다.
Comparison of four phenolic compounds among three different parts of Panax ginseng C.A. Meyer was performed in this study. Contents of esculetin, p-coumaric acd, quercetin, maltol in the ethyl acetate fraction were determinated by HPLC analysis. The main root has a highest concentration of p-coumari...
Comparison of four phenolic compounds among three different parts of Panax ginseng C.A. Meyer was performed in this study. Contents of esculetin, p-coumaric acd, quercetin, maltol in the ethyl acetate fraction were determinated by HPLC analysis. The main root has a highest concentration of p-coumaric acid and the leave has a highest concentration of quercetin and esculetin. This ethyl acetate fraction of the leaves exhibited higher depigmenting activity and lower cell toxicity than the other parts of ginseng. In addition, it showed that quercetin and esculetin among phenolic compounds highly inhibited melanin biosynthesis in ginseng. It implies that leaves of ginseng may be used as skin whitening herb. Quercetin and esculetin proved to be active compounds in the leaves of ginseng.
Comparison of four phenolic compounds among three different parts of Panax ginseng C.A. Meyer was performed in this study. Contents of esculetin, p-coumaric acd, quercetin, maltol in the ethyl acetate fraction were determinated by HPLC analysis. The main root has a highest concentration of p-coumaric acid and the leave has a highest concentration of quercetin and esculetin. This ethyl acetate fraction of the leaves exhibited higher depigmenting activity and lower cell toxicity than the other parts of ginseng. In addition, it showed that quercetin and esculetin among phenolic compounds highly inhibited melanin biosynthesis in ginseng. It implies that leaves of ginseng may be used as skin whitening herb. Quercetin and esculetin proved to be active compounds in the leaves of ginseng.
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문제 정의
, 2000). 본 연구에서는 인삼의 부위에 따른 페놀성 화합물의 함량을 정량, 비교하였으며, 이중 인삼 잎 추출물의 미백 활성을 발견하여 보고하는 바이다. 본 연구에서 쓰여진 미백 활성 측정 방법으로는 tyrosinase 억제활성, melan-a 세포주에서의 세포독성과 멜라닌 생성량에 미치는 영향, UV 흡수도 측정 등을 사용하였다.
제안 방법
8에 녹임) 120 ㎕와 methanol 40㎕에 녹인 여러 농도의 검색시료를 96- well microplate에 넣고 tyrosinase (125 U/ml) 40㎕ 를 가하였다. 37℃에서 20분간 incubation한 후 생성된 dopa chrome의 양을 ELISA reader (E09090, Molecular devices co.)를 사용하여 492 run 에서의 흡수도를 측정하였다 (Shin et al., 1998).
Melanin 생성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 배지 제거 후 PBS로 washing 하고 1 N NaOH 1 를 가하여 melanin 을 녹인 후 400 run 에서 UV 흡수도를 측정하였다 (Choi et al., 2002; Choi et al., 2006).
건조 인삼을 마쇄하고 80% 메탄올을 사용하여 추출한 후 EA 가용성 분획과 물 가용성 분획으로 나누어 완전 감압농축한 각각의 시료의 추출수율은 Table 1과 같다. TLC (전개용매: EA/Hexane = 1/1)를 이용하여 물에 불용성 인 이들 4종의 미백활성성분이 모두 EA 분획으로 전이되고 물 분획에는 거의 존재하지 않음을 확인한 후, 각 인삼시료의 EA 분획물의 활성성분함량을 HPLC를 이용하여 정량하였다. 표준물질인 maltol, /?-coumaric acid, esculetin, quercetin 등을 메탄올에 녹인 후 Bondapak C18 column을 사용하여 제시된 조건으로 용출시켰을 때 각각 9.
건조 인삼을 마쇄한 후 80% 메탄올/증류수 혼합용매를 사용하여 상온에서 1시간 씩 3회 초음파 추출한 후 감압 농축하여 추출물을 제조하였다. 제조된 추출물을 ethyl acetate (EA) 가용성 분획과 h2o 가용성 분획으로 나누어 완전농축하여 사용하였다.
본 연구에서는 인삼의 부위에 따른 페놀성 화합물의 함량을 정량, 비교하였으며, 이중 인삼 잎 추출물의 미백 활성을 발견하여 보고하는 바이다. 본 연구에서 쓰여진 미백 활성 측정 방법으로는 tyrosinase 억제활성, melan-a 세포주에서의 세포독성과 멜라닌 생성량에 미치는 영향, UV 흡수도 측정 등을 사용하였다.
세포생존율에 미치는 영향을 측정하기 위하여 배지제거 후 PBS로 washing하고 crystal violet (CV 0.1%, 10% EtOH, 나머지 PBS)를 200㎕ 첨가하였다. 5분간 상온에서 incubation 한 후 물로 2번 washing 하였다.
시료의 자외선 흡수도는 검색시료를 methan이에 10 ppm으로 녹여 200 nm~600nm에서 UV 흡수도를 측정 하여 실시 하였다 (Matsuda et al., 1996).
추출물을 제조하였다. 제조된 추출물을 ethyl acetate (EA) 가용성 분획과 h2o 가용성 분획으로 나누어 완전농축하여 사용하였다.
대상 데이터
(Japan)의 분석 용 liquid chromatogra phy를 사용하였다. Column은 Bondapak C18 (4"m, 300x 3.9 mm)을 사용하였고, 이동상은 2% acetic acid가 함유된 water (용액 A)와 0.5% acetic acid가 함유된 50% acetonitrile (용액을 초기 10% 용액 B에서 60분 후 55% 용액 B로 gradient 를 주어 0.8M/min의 속도로 용출하였다. Column의 온도는 40°C로 유지 하였으며 시료의 검출은 280 ran 에서 측정하였다.
bovine serum 과 1% penicillin-streptomycin. 200 nM 의 phorbol 12-myristate 13-acetate/} 함유된 RPMI 1640 배지를 사용하여 37°C, 5% CO2 조건에서 배양하였다.
HPLC는 Jasco Co. (Japan)의 분석 용 liquid chromatogra phy를 사용하였다. Column은 Bondapak C18 (4"m, 300x 3.
본 연구에 사용된 인삼 (Panax ginseng C.A. Meyer)은 2005 년에 충청도 금산에서 채취된 수삼 5 kg을 수집하여 증류수로 세척 후 주근 (뿌리), 세근 (잔뿌리), 잎 부분으로 분리하고 45°C에서 36시간 열풍 건조하여 사용하였고 esculetin, p-coumaric acid, quercetin, maltol은 Sigma-Aldrich co. (USA) 에서 구입하여 사용하였다.
데이터처리
45 /zm syringe filter (Millipse)로 여과하여 사용하였다. 모든 시료는 3회 반복 실험하여 평균치를 산출하였고 표준물질과의 co-injection^- 실시하여 peak의 일치를 확인하였다.
성능/효과
1994) 는세포생존율 대비 멜라닌생성을 억제시키지 못하였다. 인삼에 함유된 성분 중에는 100"g/mC 이상의 농도에서는 색소로 인해 효과를 측정할 수 없었으나 quercetin이 10"g/mC의 농도에서 유의적인 멜라닌 감소효과를 나타냈으며, esculetin은 고농도인 100㎍/㎖ 농도에서 세포 생존율 대비 멜라닌 감소 효과를 보였다. 이밖에 p-coumaric acid와 maltol은 유의적인 효과를 나타내지 않았다.
21%로 세근이나 잎에 비해 주근에 가장 많이 함유되어 있었다. Esculetin의 함량은 주근과 세근에 비해 잎에 0.64%로 비교적 많이 함유되어 있는 결과를 보였으며, quercetin 또한 주근과 세근에는 거의 함유되어 있지 않았으며 잎에 0.16%가 함유되어 있었다. Maltol의 경우는 홍삼의 제조 과정 중 열처리에 의해 2차적으로 생성되는 홍삼특유의 성분으로서 (Yoo et al.
반면 UV-B (270~290nm) 영역은 UV-A에 비해 파장이 짧아 피부 깊숙이 침투하지 않지만 에너지가 높아 일광화상을 유발시키며 노출 후 72시간 이후부터 색소침착이 나타나는 지연형 색소침착을 일으킨다. 각 시료의 200~500 nm 영역의 흡수도를 측정했을 때각 인삼 EA 분획물 시료는 100 ppm 농도까지 UV-A와 UV- B 영역에서 특징적인 흡수를 나타내지 못하였으나 단일성분인 quercetin은 10 ppm 농도에서 UV-A 영역과 UV-B 영역 모두에서 흡수도를 보였고, esculetin은 UV-A영역에서 특징적인 흡수를 나타내어 (Fig. 4) 피부에 도포시 UV 차단효과를 기대할 수 있을 것으로 판단된다.
, 1987). 각각의 인삼시료와 활성물질들을 melan-a 세포주에서 1㎍/㎖, 10/zg/m^, 100㎍/㎖의 농도로 3일간 처리 후 세포의 생존율과 멜라닌 생성량에 미치는 영향을 측정한 결과 양^ 대조군인 phenyl thiourea (PTU)는 100㎍/㎖에서 약 25%의 세포독성을 보였으나 멜라닌 생성률을 74.7% 감소시켰다. 한편 대조물질로써 사용된 kqjic acid (Cabanes et al.
국내산 인삼의 부위별 quercetin, p-coumaric acid, maltol, esculetin의 함량을 측정한 결과 잎에서는 quercetin과 esculetin 이 주근에서는 p-coumaric acid가 다량 함유되어 있었다. 이중 잎의 EA 분획물은 melan-a 세포주에서 뛰어난 멜라닌 생성억제 활성을 보였으며, 이의 주요성분인 quercetin과 esculetin이 tyrosinase 활성억제도, melan-a 세포주에서의 멜라닌 생성억제도, UV-흡수도 측정에서 모두 우수한 활성을 나타내는 결과로 미루어 인삼의 잎은 피부미백을 목적으로 흐}는 기능성 소재로 이용될 수 있는 가능성을 가지는 것으로 사료된다.
이중 잎의 EA 분획물은 melan-a 세포주에서 뛰어난 멜라닌 생성억제 활성을 보였으며, 이의 주요성분인 quercetin과 esculetin이 tyrosinase 활성억제도, melan-a 세포주에서의 멜라닌 생성억제도, UV-흡수도 측정에서 모두 우수한 활성을 나타내는 결과로 미루어 인삼의 잎은 피부미백을 목적으로 흐}는 기능성 소재로 이용될 수 있는 가능성을 가지는 것으로 사료된다.
2와 같다. 인삼에 함유된 미백활성 물질 중에서는 esculetin이 가장 우수한 tyrosinase 저해 활성을 나타내었으며 quercetin, maltol, p- coumaric acid의 순서로 나타났다. Esculetin과 quercetin을 고함 유한 잎의 EA분획시료는 200 ppm 농도일 때 20.
참고문헌 (25)
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