황금 (Scutellaria baicalensis Gergi)에 함유된 항산화 억제활성 물질을 분리하고 항산화 효과에 대하여 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 황금 500g을 100% MeOH로 추출하여 150g의 수율을 얻었으며, 다시 분획하여 Ethyl ether 13.2g과 n-BuOH 10.3g, Water 126.5g을 얻었다. 2. Ethyl ether 분획을 Column chromatography, TLC 및 HPLC를 이용하여 xanthine oxidase 억제활성을 가진 compound I을 분리하였다. 3. $^1H-NMR,\;^{13}C-NMR$, MS spectrometer 등 분광학적 방법을 이용하여 Compound I의 구조를 규명한 결과, flavonoid 물질로서 compound I은 구조식이 3,5,7-trihydroxy-2'-methoxy-flavanone로 확인되었다.
황금 (Scutellaria baicalensis Gergi)에 함유된 항산화 억제활성 물질을 분리하고 항산화 효과에 대하여 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 황금 500g을 100% MeOH로 추출하여 150g의 수율을 얻었으며, 다시 분획하여 Ethyl ether 13.2g과 n-BuOH 10.3g, Water 126.5g을 얻었다. 2. Ethyl ether 분획을 Column chromatography, TLC 및 HPLC를 이용하여 xanthine oxidase 억제활성을 가진 compound I을 분리하였다. 3. $^1H-NMR,\;^{13}C-NMR$, MS spectrometer 등 분광학적 방법을 이용하여 Compound I의 구조를 규명한 결과, flavonoid 물질로서 compound I은 구조식이 3,5,7-trihydroxy-2'-methoxy-flavanone로 확인되었다.
Root of Scutellaria baicalensis G. was extracted with methanol and water to give the yield of 30.0% in order to find the antioxidant substance. The extract was fractionated with diethyl ether, n-butanol and water to test the inhibitive activity against xanthine oxidase. Three fractions inhibited the...
Root of Scutellaria baicalensis G. was extracted with methanol and water to give the yield of 30.0% in order to find the antioxidant substance. The extract was fractionated with diethyl ether, n-butanol and water to test the inhibitive activity against xanthine oxidase. Three fractions inhibited the activities of xanthine oxidase by 48.2%, 10.2% and 2.8%, respectively, at the amount of $0.1\;{\mu}g$. A component that exhibited strong inhibition of xanthine oxidase was isolated from diethyl ether fraction (SE Fr.) by silica gel column chromatography and HPLC, and then identified by $^1H-NMR$, $^{13}C-NMR$ and MS spectrophotometry. EDA (Electron Donating ability) of the compound was 28.5% at the concentration $100\;{\mu}g/3\;ml$. That was identified to be 3,5,7-trihydroxy-2'-methoxyflavanone by spectrophotometric analysis using $^1H-NMR,\;^{13}C-NMR$ and Mass spectrophotometry.
Root of Scutellaria baicalensis G. was extracted with methanol and water to give the yield of 30.0% in order to find the antioxidant substance. The extract was fractionated with diethyl ether, n-butanol and water to test the inhibitive activity against xanthine oxidase. Three fractions inhibited the activities of xanthine oxidase by 48.2%, 10.2% and 2.8%, respectively, at the amount of $0.1\;{\mu}g$. A component that exhibited strong inhibition of xanthine oxidase was isolated from diethyl ether fraction (SE Fr.) by silica gel column chromatography and HPLC, and then identified by $^1H-NMR$, $^{13}C-NMR$ and MS spectrophotometry. EDA (Electron Donating ability) of the compound was 28.5% at the concentration $100\;{\mu}g/3\;ml$. That was identified to be 3,5,7-trihydroxy-2'-methoxyflavanone by spectrophotometric analysis using $^1H-NMR,\;^{13}C-NMR$ and Mass spectrophotometry.
* AI 자동 식별 결과로 적합하지 않은 문장이 있을 수 있으니, 이용에 유의하시기 바랍니다.
제안 방법
2. Ethyl ether 분획을 Column chromatography, TLC 및 HPLC를 이용하여 xanthine oxidase 억제활성을 가진 com pound I을 분리하였다.
Column chromatography0!] 의해 분획한 fraction^ xanthine oxidase 억제작용이 가장 크게 나타났던 fraction III을 가지고 Table 1의 조건으로 Ptep-LC를 이용하여 분획함으로써 8개의 분획을 얻었다. 각 분획에서 농도에 따른 xanthine oxidase 저해작용을 살펴본 결과, fraction 6에서 xanthine oxidase 억제 활성이 100㎕에서 36.
건조된 분말시료 황금 500 g을 methanol 31로 환류 냉각하에 4시간 추출하고 다시 물 3L로 추출하여 150 g의 MeOH 추출물 (SM)을 얻었으며, 이것을 물에 용해한 후 다시ethyl ether, n-butanol로 추출 분획하여 황색의 분말 (SE) 13.2 g, 갈색의 분말 (SB) 10.3 g 및 황색의 분말 (SW) 126.5 g 을 얻었다 (Table 2).
이중 Fr. 으로부터 prep-HPLC를 이용하여 Xanthine oxidase 억제활성을 가진 물질을 분리하였다. 이 때 사용한 HPLC 조건은 Table 1과 같다.
이에 본 연구에서는 황금에서 xanthine oxidase 억제 효과를 가진 flavonoids 물질을 추출하여 그추출물의 xanthine oxidase 저해작용, DPPH (a, a-Diphenyl-0-picryl hydrazyl)의 radical에 대한 소거작용 측정을 통하여 항산화 능력을 측정하고, HPLC를 사용하여 분리 정제한 후 NMR, MS을 통하여 flavonoids의 구조특성을 확인하였다.
전자공여작용은 Blois의 방법(Blois, 1958)을 변형하여 최종 compound가 a, a-Diphenyl-[3-piciyl hydrazyl (DPPH) radical 에 대한 전자공여효과로서 화합물의 환원력을 측정하였다.
즉, 0.1 mM phosphate buffer (pH7.4)을 조제하여 750 fA 을 첨가한 후 여기에 기질인 1m M xanthine 150㎕을 혼합한 다음 ethanol에 일정농도로 용해한 시료를 혼합하여 250mU/㎕로 조제한 효소액 (xanthine oxidase)을 첨가한 후 실온에서 UV 295nm에서 흡광도를 측정하였다. control 구는 시료 대신 ethanol을 첨가 후 상기 동일한 조건에서 실시하였고, blank는 contr이구에서 xanthine oxidase를 제거한 것을 사용하여 상기와 동일하게 행하였다.
즉, Fig. 2와 같이, 황금으로부터 얻어진 SE 분획을 감압 농축하고 용출 용매에 용해한 후, 김 (1995)과 우 (1984) 등의 방법을 변형하여 silica gel (63-200 um, Merck Co.) 600 g을 ID 45 x 700 mm 크기 의 glass column에 중전하고 CHCl, CH3OH (100:0~0:100)을 용출시켜 7개의 분획을 얻었다. 이중 Fr.
즉, 최종 compound 500 μg 에 2.5 mM DPPH 용액 (99% ethanol] 용해) 2.4 를 가한 후 vortex mixer로 10초간 진탕하고 20분 후 517nm 에서 흡광도를 측정하였다. 전자공여효과는 시료첨가구와 시료 무첨가구의 흡광도값의 차이를 이용하여 백분율로 나타내었다.
황금으로부터 분획된 ethyl ether 분획 (SE 분획)을 가지고 column chromatograpy 및 HPLC 에 의해 xanthine oxidase 억제효과를 가진 성분을 분리하였다.
황금의 용매에 의한 분획의 xanthine oxidase 억제 효과를 조사하기 위하여 건조된 분말시료 500g을 Fig. 1과 같이 methanol 3 L로 환류냉각 하에 4시간 추출한 다음, 물 3 L로 추출하여 농축하였다. 이 농축물을 물 1 L에 용해하여 분획여 두에 넣고 ethyl ether 1 L로 3회 추출 분획한 후 다시 aqueous layer를 n-butanol 1 L로 3회 주줄 분획하였다 (Fig.
대상 데이터
황금 (Scutellaria baicalensis Gorgi)은 20()1년 금산 약재시장에서 2년근 황금을 구입한 후 열풍건조하여 사용하였다.
이론/모형
항산화 활성의 측정은 Packer 등의 방법 (Packer, 1994) 에따라 xanthine을 기질로 하여 생성된 urate를 spectrophoto- metry법으로 측정하였다.
성능/효과
1H-NMR spectrum은 3.86 ppm에서 1개의 -OCR를 나타내는 수소 signal이 보였고, 4.62 ppm과 4.65 ppm에서 각각 1H의 singlet signal이 확인되었으며, 5.48 ppm과 5.52 ppm에서 1H의 singlet signal이 확인되었다. 6.
3. ifLNMR, 5*******13 C-NMR, MS spectrometer^ 분광학적 빙법을 이용하여 Compound I의 구조를 규명한 결과, flavonoid 물질로서 compound I은 구조식이 3, 5, 7-trihydroxy-2'-methoxy- flavanone로 확인되었다.
Compound I의 전자공여 작용은 100㎍에서 28.5%, 50 ㎍ 의 농도에서는 12.5%의 DPPH radical 소거효과를 나타냄으로써 본 방법에 의한 항산화 활성의 세기는 그다지 높지 않은 것으로 판단된다.
저해작용이 낮게 나타났다. Table 3과 같이, 각 분획 중 xanthine oxidase 저해작용이 가장 높은 분획은 Ethyl ether 분획으로서 100㎍/㎖, 10㎍/㎖, 1㎍/㎖ 의 농도에서 각각 100%, 87.7%, 48.2%의 xanthine oxidase 억제활성을 나타내었다. water 분획은 100㎍/㎖, 10㎍/㎖, l㎍/㎖ 의 농도에서 각각 35.
2%의 xanthine oxidase 억제활성을 나타내었다. water 분획은 100㎍/㎖, 10㎍/㎖, l㎍/㎖ 의 농도에서 각각 35.3%, 8.7%, 2.8%로 3개의 분획 중 가장 낮게 나타났으며 n-BuOH 분획은 농도가 줄어들수록 다른 분획보다 현저히 낮아지는 결과를 보였다.
얻었다. 각 분획에서 농도에 따른 xanthine oxidase 저해작용을 살펴본 결과, fraction 6에서 xanthine oxidase 억제 활성이 100㎕에서 36.3%로 가장 높게 나타났으며 이 fraction 을 compound으로 하였다.
각 분획에서 농도에 따른 xanthine oxidase 저해작용을 살펴본 결과, 각 분획은 모두 농도가 감소할수록 xantiiine oxidase 저해작용이 낮게 나타났다. Table 3과 같이, 각 분획 중 xanthine oxidase 저해작용이 가장 높은 분획은 Ethyl ether 분획으로서 100㎍/㎖, 10㎍/㎖, 1㎍/㎖ 의 농도에서 각각 100%, 87.
27 ppm에서 -OCH3에 해당하는 탄소 signal을 확인하였고, 192.01 ppm에서 C-4 위치의 C = O에 해당하는 탄소 signal0! 확인되었으며, 156.20 ppm, 163.18 ppm, 165.44 ppm 및 166.34 ppm에서 산소와 결합을 이루고 있는 4개의 signal 이 나타났다. 또한 115.
후속연구
이상의 spectral data를 종합해 볼 때, 이 화합물의 구조식은 3, 5, 7-trihydroxy-2'methoxyflavanone으로 논문에 발표되지 않은 물질로 더 많은 연구가 필요할 것으로 생각된다 (Table 6).
참고문헌 (20)
Blois MS (1958) Antioxidant determination by the use of a stable free radical. Nature 181:1199
Kubo M, Batsuda H, Tanaka M, Kimura Y, Okuda H, Higashino M, Tani T, Namba K (1984) Studies on Scutellaria Radix. VII, anti-arthritic and Anti-inflammatory Actions of Methanolic Extract and Flavonoid Components from Scutellaria radix. Chem. Pharm. Bull., 32(7):2724-2729
Middleton Jr. E, Harborne JB and Beretz (des.) A (1988) Plant Flavonoids in Biology and Medicine II, Biochemical, Cellular and Medicineal Properties. Alan R. Liss, New York, 61-65
Middleton Jr. E, Harborne(des.) JB (1986) Plant flavonoids in Biology and Medicine, Biochemical, Pharmacological, StructureActivity Relationship. Alan R. Liss, New York, 429-440
Simic MG, Karel M (1980) Autooxidation in Food and Biological Systems, Is Peroxidation Important in the Cancer Process. Plenum Press, New York, 639-649
Simic MG, Karel M (1980) Autooxidation in Food and Biological Systems, Possible Role of Oxidized Lipids in Atherosclerosis. Plenum Press, New York, 599-611
Simic MG, Karel M (1980) Autooxidation in Food and Biological Systems, Biological effects of some products of cholesterol autooxidation. Plenum Press, New York, 589-597
Simic MG, Karel M (1980) Autooxidation in Food and Biological Systems, Natural antioxidants. Plenum Press, New York, 261-282
Wagner H (1986) Antihepatotoxic flavonoids, In Cody, Middleton Jr. E, Harborne (des.) JB, Plant Flavonoids in Biology and Medicine, Biochemical, Pharmacological and Structure-Activity Relationships. Alan R. Liss, New York, 545-558
Yun HS, Yoo KS, Chung SH, Yang HS, Choi JJ, Kim YJ (1992) Flavonoids with Bradykinin Antagonistic Effects from Scutellaria Radix. Kor. J. Pharmacogn., 23(4):234-239
※ AI-Helper는 부적절한 답변을 할 수 있습니다.