[논문]Evodiamine의 Monoamine Oxidase 활성 저해작용

이상선; 황방연; 노재섭; 이명구

Evodiamine의 Monoamine Oxidase 활성 저해작용
Inhibition of Monoamine Oxidase by Evodiamine 원문보기

생약학회지, v.37 no.4 = no.147, 2006년, pp.320 - 323

이상선 (충북대학교 약학대학) , 황방연 (충북대학교 약학대학) , 노재섭 (충북대학교 약학대학) , 이명구 (충북대학교 약학대학)

Abstract ▼ AI-Helper

The effects of evodiamine on monoamine oxidase (MAO) activity were investigated. MAO was purified from mouse brain and the $K_m\;and\;V_{max}$ values of MAO were $78.5{\pm}5.28{\mu}M$ and $0.68{\pm}0.07$ nmol/min/mg protein, respectively (n=4). Evodiamine at $30-120{\mu}M$ showed an inhibitory effect on MAO activity using a substrate kynuramine with an $IC_{50}$ value of $104.2{\mu}M$ (n=4). Evodiamine also exhibited a non-competitive inhibition on MAO. The $K_i$ value for evodiamine was $72.5{\pm}10.8{\mu}M$ (n=4). These results suggest that evodiamine partially contributes to the regulation of monoamine content.

주제어

AI 본문요약
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문제 정의

본 연구에서는 isoquinoline 및 indole 화합물의 monoamine oxidase 활성 저해작용을 검색하는 과정에서, evodiamine이, 그의 다양한 생리활성 작용이외에, MAO 활성 저해작용을 나타내어 이에 대한 작용기전을 진행하였다. 효소 MAO는 mouse의 뇌로부터 부분 정제하여 사용하였으며,17) MAO 활성은 기질 kynuramine을 사용하여 측정하였다.

제안 방법

Kynuramine(500 μM, 200 ㎕)을 가하여 효소반응을 진행시키고 30분후 10% ZnSO₄ 250 ㎕와 1N NaOH 50 ㎕를 가하여 종결하였다. 반응액을 3,000×g로 5분간 원심분리하고 상등액 700㎕에 1N NaOH 1.4 ml를 가한 다음, 반응생성물 4-hydroxyquinoline의 농도를 형광광도계(Model F-3000, Hitachi, Tokyo, 일본)(λex/λem : 315 nm/380 nm)로 측정하고, 이를 표준곡선을 사용, 정량하여 MAO 활성을 측정하였다. Km 및 Vmax 값은 Lineweaver-Burk 법으로 계산하였다.

대상 데이터

Louis, MO, USA)로부터 구입하였으며, 그 이외의 시약은 특급을 사용하였다. Evodiamine은 충북대학교 약학대학 생약학교실에서 분리하였으며 기증받아 사용하였다.
MAO는 mouse brain을 사용하여 부분정제 하였으며, 실험에 사용된 대조군 MAO의 활성은 0.321±0.015nmol/min/mg protein이 되도록 조정하여 사용하였다. 또한, 대조군 MAO는 Km및 Vmax의 값은 각각 78.
이에 대한 작용기전을 진행하였다. 효소 MAO는 mouse의 뇌로부터 부분 정제하여 사용하였으며,17) MAO 활성은 기질 kynuramine을 사용하여 측정하였다.17,20-24)

데이터처리

Inhibition of MAO by evodiamine added in the enzyme reaction mixture. The data were plotted by linear regression analysis. Evodiamine concentrations (μM): 1, 0; 2, 50; 3, 100.
통계처리 - 실험결과는 means±SEM으로 나타내었으며, 시료에 의한 효과는 Student' t-test를 사용하여 유의차 검정을 하였다.

이론/모형

4 ml를 가한 다음, 반응생성물 4-hydroxyquinoline의 농도를 형광광도계(Model F-3000, Hitachi, Tokyo, 일본)(λex/λem : 315 nm/380 nm)로 측정하고, 이를 표준곡선을 사용, 정량하여 MAO 활성을 측정하였다. Km 및 Vmax 값은 Lineweaver-Burk 법으로 계산하였다.
MAO 활성 측정 - MAO의 활성은 Kraml의 방법에 준하여 측정하였다.17,20) 반응용기에 0.
4)을 넣고 현탁시킨 다음 MAO 효소원으로 하였다. MAO 효소원은 -20℃에 보관하였으며, 단백질 함량은 표품 소혈청 albumin을 사용하여 Lowry 등의 방법25)으로 측정하였다.
MAO 효소원의 부분정제 - MAO 시료는 Naoi의 방법에 준하여 부분 정제하였다.17) Mouse를 단두하고 뇌를 분리하여 세절한 후(8.

성능/효과

결합부위에 필요하다고 제안되었다.27) Evodiamine은 소수성 부위(-CH3) 및 친핵성 위치(indole ring)를 가지고 있으며, 이 부위가 MAO 활성 저해작용에 관여하고 있을 것으로 사료된다.
4; MAO)는 세포내의 미토콘드리아 외막에 존재하여, monoamine 계열 신경전달물질인 catecholamines(dopamine, norepinephrine 및 epinephrine)및 serotonin(5-hydroxytryptamine) 등을 불활성화시키는 PAD 함유효소이다.6)중추성 MAO의 활성은 우울증(depression) 등의 정신질환과, 말초에서는 고혈압(hypertension) 등의 질환과 관련이 되어 있다. MAO는 기질 및 저해제의 특이성에 따라 A 및 B type(MAO-A 및 MAO-B)으로 분류된다.
Evodiamine이 MAO-A 및 -B에 대한 저해작용을 검토한 결과로부터 MAO-A(저해제 deprenyl 사용) 및 MAO-B(저해제 clorgyline 사용)에 대한 IC₅₀ 값은 각각 98.5±7.8 μM 및 112.6±12.1 μM을 나타내어 MAO-A 및 MAO-B에 대한 저해작용의 특이성을 나타내지 않았다. 그러므로 evodiamine은 MAO 저해작용을 가지고 있는 것으로 사료된다.
2 μM이었다(Table Ⅰ). 또한, evodiamine은 Lineweaver-Burk 방법에 의하여 검토한 결과 비상경적 저해작용(non-competitive inhibition)을 나타내 었으며(Fig. 1), 저해상수 Ki 값은 72.5±10.8 μM 이었다 (n=4).
본 연구에 의하면, evodiamine은 MA0 활성 저해작용을 가지고 있으며, 주성분으로 evodiamine 및 quinolone을 함유하고 있는 오수유(E. rutaecarpa)는 monoamine 함량 조절작용이 있음을 나타내고 있다. MAO-A 저해제는 항우울제 또는 항스트레스제의 개발에 응용되며, MAO-B 저해제는 파킨슨병과 같은 신경계 질환에 응용되고 있다.

후속연구

MAO-A 저해제는 항우울제 또는 항스트레스제의 개발에 응용되며, MAO-B 저해제는 파킨슨병과 같은 신경계 질환에 응용되고 있다.11-13)따라서 오수유(E. rutaecarpa)의 MAO 활성 저해작용을 응용한 in vivo 생리학적 연구가 진행되어야 할 것으로 사료된다.
1 μM)(미발표 자료), 이는 MA0 저해작용과 유사한 친화력을 가지고 있음을 의미하고 있다. 따라서 evodiamine은 indole 계열 화합물로서 isoquinoline 또는 quinolone 계열 화합물에 비하여 MAO 활성 저해작용은 미약한 것으로 나타났으며, evodiamine을 포함한 알카로이드에 대한 dopamine 생합성 및 대사효소에 대한 친화력 및 기전에 대한 연구가 필요할 것으로 사료된다.

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표제어: PCR

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용어 설명 출처 목록 (6)

용어 설명: PCR은 세균 특이성이 있는 primer를 이용하여 적은 수의 세균이 있을지라도 쉽게 검출할 수 있는 유용한 방법이며, 이를 이용하여 구강 내 치면세균막이나 타액에서 직접 세균을 검출할 수 있게 되었다[8].

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