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문제 정의
- 관한 보고는 거의 없는 실정이다. 본 연구는 체외 수정란의 현장 적용 측면을 중심으로, 한우 체외 수정란의 발생 단계, 일자 및 등급이 젖소대리모에 이식 후 임신과 유산, 분만과 관련된 임신기간, 생시체중, 난산 및 쌍자율을 조사하였다. 또한 단자 및 쌍자 분만에 따른 임신기간, 생시체중, 성비 및 폐사율을 분석하였다.
제안 방법
- 2 mg/ml pyru-vate (Sigma, P3662), 1 μg/ml FSH(Sigma, F8174), 10 μg/ml LH(Sigma, L9773) 및 10% FBS(Sigma, F0643) 가 첨가된 TCM-199(Gibco, 12340-030)용액, 체외 수정용은 6 mg/ml BSA와 10 μg/ml he-parin (Sigma, H3149)이 첨가된 TALP 용액, 체외배양용은 3 mg/ml BSA 또는 10% FBS가 첨가된 CRlaa 용액을 각각 이용하였다. 그리고 실험에 제공되는 배양액의 미세 소적은 mineral oil(Sigma, M8410)을 도포하여 39℃, 5% CO2 배양기에서 최소한 4시간 이상 평형을 하였다.
- 9% 생리식염 수(3O~33℃)가 들어있는 보온병에 담아 2~3시간에 실험실로 운반하였다. 난소는 penicillin G(Sig-ma, P3032)가 첨가된 생리식염수로 3~4회 세척하여, 18G 주사침이 부착된 10 ml 주사기를 이용하여 직경 2~8 tnm의 가시난포로부터 난포란을 회수하였다. 회수된 난포란은 실체 현미경하에서 난구 세포의 부착 상태가 치밀한 것만을 선별하여, 50 μl의 체외 성숙용 배지에 15개 난포란을 옮겨 22시간 동안 39℃, 5% CO2 배양기에 배양함으로써 체외성숙을 유도하였다.
- 난소로부터 난포란의 회수 및 세척용은 25 mM HEPES와 3 mg/ml BSA(Sigma, A6003)가 첨가된 Hepes-TALP 용액, 체외 성숙용은 0.2 mg/ml pyru-vate (Sigma, P3662), 1 μg/ml FSH(Sigma, F8174), 10 μg/ml LH(Sigma, L9773) 및 10% FBS(Sigma, F0643) 가 첨가된 TCM-199(Gibco, 12340-030)용액, 체외 수정용은 6 mg/ml BSA와 10 μg/ml he-parin (Sigma, H3149)이 첨가된 TALP 용액, 체외배양용은 3 mg/ml BSA 또는 10% FBS가 첨가된 CRlaa 용액을 각각 이용하였다. 그리고 실험에 제공되는 배양액의 미세 소적은 mineral oil(Sigma, M8410)을 도포하여 39℃, 5% CO2 배양기에서 최소한 4시간 이상 평형을 하였다.
- 수정란 이식은 준비된 한우 배반포를 이식기(MVE, France)에 장착하여 황체가 존재하는 자궁각에 이식하였다. 대 리모의 발정은 자연 또는 PGF2a 2회 투여로유도하였다.
- 본 연구는 체외 수정란의 현장 적용 측면을 중심으로, 한우 체외 수정란의 발생 단계, 일자 및 등급이 젖소대리모에 이식 후 임신과 유산, 분만과 관련된 임신기간, 생시체중, 난산 및 쌍자율을 조사하였다. 또한 단자 및 쌍자 분만에 따른 임신기간, 생시체중, 성비 및 폐사율을 분석하였다.
- 또한 분만한 송아지를 쌍자와 단자로 구분하여 임신 기간, 생시 체중, 성비 및 폐사율을 검토하였다.
- 배양 7일 또는 8일째의 배반포를 blastocyst(B),Expanded Blastocyst(ExB) 및 Hatched Blastocyst(HB)로 구분하여 각각 2개씩을 이식하였다.
- 본 연구는 2003년부터 2004년까지 2년간 수행한 800여건의 수정란 이식과 106건의 분만을 분석하여, 이식에 제공하는 배반포의 발생 단계, 일령 및 품질이 대리모의 임신과 유산에 미치는 효과를 분석하였고, 임신한 대리모의 분만 이력을 조사하여 임신 기간, 생시 체중, 난산 및 쌍자율을 조사하였다. 또한 분만한 송아지를 쌍자와 단자로 구분하여 임신 기간, 생시 체중, 성비 및 폐사율을 검토하였다.
- 본 연구는 수정란이식의 현장 적용 측면을 중심으로, 한우 체외 수정란의 발생 단계, 일자 및 등급 이 젖소 대리모에 이식 후 임신과 유산, 분만과 관련된 임신기간, 생시체중, 난산 및 쌍자율을 조사 하였다. 또한 단자 및 쌍자 분만에 따른 임신기간, 생시체중, 성비 및 폐사율을 분석하였다.
- 판정하였다. 임신이 확인된 수란우가 재발정 및 태아 또는 태반의 배출이 확인된 경우에 직장검사를 다시 실시하여 태아의 존재 유무와 자궁변화의 소견을 기초로 유산을 판정하였다.
- 정자괴는 2 ml의 신선 체외수정용액으로 350 g에서 10분간 원심 분리함으로써 정자를 세척하였다. 정자 농도를 25×106 sperms/ml가 되도록 조절하여, 15개씩의 난포란이 함유되어져 있는 46 μl의 체외 수정 용액에 heparin 2 μl와 정자 2 μl를 각각 첨가하여(최종 정자 농도1x106 sperms/ml) 39℃, 5% CO2 배양기에 20시간동안 배양함으로써 체외 수정을 유도하였다.
- 체외 배양 7일, 8일 또는 9일째의 ExB 단계의 배반포 2개씩을 이식하였다.
- 체외 수정 후 형태적으로 정상이라고 판단된 수정란만을 회수하여, 15개씩의 수정란(배양 1일)을 3 mg/ml BSA가 첨가된 CRlaa 용액 20 μl에 넣고, 39℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였으며, 배양 3일째와 5일째에는 10% FBS가 첨가된 CRlaa 용액으로 교환하여 배양하였다.
- 한우 수정란을 이식한 후 60일에 직장 검사로 임신을 판정하였다. 임신이 확인된 수란우가 재발정 및 태아 또는 태반의 배출이 확인된 경우에 직장검사를 다시 실시하여 태아의 존재 유무와 자궁변화의 소견을 기초로 유산을 판정하였다.
대상 데이터
- 결과는 Table 3과 같다. 단자 분만 76건과 쌍자 분만 30건을 분석하였고, 분만된 송아지는 단자 76두와 쌍자 60두로서 총 136두였다. 임신기간은 단자가 평균 278.
- 대리모는 경상북도 남부 지역의 젖소 사육 농가에서 사육중인 홀스타인을 이용하였다. 수정란 이식은 준비된 한우 배반포를 이식기(MVE, France)에 장착하여 황체가 존재하는 자궁각에 이식하였다.
- 도축 한우에서 난소를 적출하여 25 μg/ml gentamycin(Sigma, G1264)이 첨가된 0.9% 생리식염 수(3O~33℃)가 들어있는 보온병에 담아 2~3시간에 실험실로 운반하였다. 난소는 penicillin G(Sig-ma, P3032)가 첨가된 생리식염수로 3~4회 세척하여, 18G 주사침이 부착된 10 ml 주사기를 이용하여 직경 2~8 tnm의 가시난포로부터 난포란을 회수하였다.
- Table 1과 같다. 발생 단계는 472두, 발생일령은 511두 및 등급은 658두에서 조사하였다. 발생 단계에 따른 임신율은 B 단계가 64.
데이터처리
- 실험 결과 중에서 임신, 유산, 난산, 쌍자, 성비 및 폐사율에 대한 통계 학적 분석은 x2-test를 이용하였다. 임신 기간과 체중에 대한 통계학적 분석은 SAS package를 이용하여 분산 분석을 실시하였고, 군 간의 유의성은 Duncan's 다중 검정을 이용하였다.
- 임신 기간과 체중에 대한 통계학적 분석은 SAS package를 이용하여 분산 분석을 실시하였고, 군 간의 유의성은 Duncan's 다중 검정을 이용하였다. 유의성 검정은 P<0.
이론/모형
- 배양 7일령인 배반포의 등급을 Linder와 Wright(1983)의 기준에 의하여 grade 1, 2 및 3로 분류하였고, 각 등급의 배반포 2개씩을 이식하였다.
성능/효과
- 5%로서 차이가 없었다. 발생 단계에 따른 임신기간, 송아지의 체중 및 난산율은 비슷한 경향이었으나, 쌍자율은 HB 단계가 44%로서 배반포 단계의 15.8%보다 유의하게 높았다(p<0.05). 발생 일령에 따른 임신 기간, 난산율 및 쌍자율은 차이가 없었으나, 송아지의 체중은 9일령의 것이 평균 35.
- 발생 단계는 472두, 발생일령은 511두 및 등급은 658두에서 조사하였다. 발생 단계에 따른 임신율은 B 단계가 64.4%로서 ExB 및 HB 단계의 각각 42.2 및 39.3%보다 유의하게 높았다(p<0.05). 유산율은 HB 단계가 21.
- 또한 단자 및 쌍자 분만에 따른 임신기간, 생시체중, 성비 및 폐사율을 분석하였다. 발생 단계에 따른 임신율은 배반포 단계(64.4%), 유산율은 부화 배반포(HB) 단계(21.4%)가 유의하게 높았다(P<0.05). 발생 일령에 따른 임신율은 7일령 배가 49.
- 05). 발생 일령에 따른 임신 기간, 난산율 및 쌍자율은 차이가 없었으나, 송아지의 체중은 9일령의 것이 평균 35.5 kg으로서 7일령 및 8일령의 평균 25.2 및 26.2kg보다 유의하게 무거웠다(p<0.05). 등급에 따른 임신 기간은 1등 및 2등급이 평균 278.
- 05). 발생일령에 따른 임신율은 7일령의 임신율이 49.0%로서 가장 높았고, 특히 발생 일령이 높아질수록 임신율이 유의하게 낮아졌다(p<0.05). 유산율은 7일령이 10.
- 화우의 신선란을 홀스타인에 2개씩 이식하는 것이 쌍자 생산에 효과적이고, 분만율이 40% 이상 되어야 이용 가능성이 있다고 하였다(Numabe 등, 2000). 본 연구에서 수정란의 조건에 따른 쌍태율은 약 16%에서 50%로 다양하였다. 특히 발생단계 중에서 HB 단계가 임신율은 낮았으나, 쌍자율은 높은 경향이었다.
- 등, 2002)에 따라 차이가 있다. 본 연구에서는 발생 단계와 일령에 따른 임신기간의 차이는 없었으나, 배 등급이 낮을수록 임신기간이 짧았다. 또한 쌍자 분만에서 짧은 임신기간(Table 3)은 Sa-kaguchi 등(2002)의 보고와 유사한 경향이었다.
- 배의 등급은 good 등급 이상 또는 grade 1 등급 배의 임신율이 대체로 높은 경향이었으나(Hasler 2001; Farin과 Farin, 1995), 차이가 없다는 보고도 있다(박 등, 2005; Spell 등, 2001; Linder와 Wright,1983). 본 연구에서는 배 발생 단계로는 배반포, 발생 일령으로는 7일째의 임신율이 높은 경향이었으나, 등급에 따른 차이는 없었다. 이와 같이 발생 7일령 및 배반포 단계가 임신율이 높은 원인은 다른 시기의 것에 비하여 많은 세포수를 가지고 있기 때문인 것으로 생각된다(Park 등, 2005).
- 쌍자 생산시 체중은 단자보다 10-20% 정도 가벼우며, 수란우의 나이, 영양상태, 종모우의 영향 및 수란우의 사양관리에따라 달라질 수 있다고 하였다(Bellows 등, 1974).본 연구의 결과에서도 쌍자와 단자 분만을 비교하면 단자가 임신기간 및 생시 체중이 높았고, 특히생후 30일령의 생존율이 높았다.
- 05). 분만율은 ExB 단계가 90.7%로서 B 단계(84.2%)와는 유사하였으나, HB 단계(7&6%)보다 유의하게 높았다(p<0.05). 발생일령에 따른 임신율은 7일령의 임신율이 49.
- 05), 체중, 난산율 및 쌍자율은 차이가 없었다. 분만한 송아지의 개체 수에 따른 임신기간은 단자가 평균 278.5일로서 쌍자의 평균 272.5일보다 유의하게 길었다(p<0.05). 생시 체중도 단자가 평균 29.
- 05). 생시 체중도 단자가 평균 29.6 kg으로서 쌍자의 평균 22.3 kg에 비하여 유의하게 무거웠다(p<0.05). 한편 성비는 단자의 수컷 비율이 높았으나 유의차는 없었다.
- 9일로서 유사한 경향이었다. 송아지의 체중은 HB 단계에서 유래한 송아지의 체중이 평균 29.8 kg으로 무거웠고, 난산율도 36%로서 높은 경향이었으나 유의차는 인정되지 않았다. 한편 쌍자율은 HB 단계가 44%로서 B 단계의 15.
- 05). 유산율은 HB 단계가 21.4%로서 높은 경향이었고 ExB 단계의 9.3%와는 유의차가 인정되었다(p<0.05). 분만율은 ExB 단계가 90.
- 이상의 결과에서 이식에 제공하는 체외 수정란의 품질은 등급보다는 발생 일령과 단계를 고려하여 선발하는 것이 좋을 것이며, 한우 쌍자의 생산은 여러 가지 문제가 있으나 총 산자수와 생존에 따른 경제적 이익을 고려한다면 충분히 권장할 방법이라고 생각된다.
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