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문제 정의
- 2004). 본 연구에서는 단백질 합성에 필수적인 리보솜의 구성 단백질들의 발현이 손상기 중에서도 특히 24시간에 증가하는 것을 관찰 하였다. 리보솜의 대 단위체(large subunit)를 구성하는 Rpl6(Rn.
제안 방법
- , 2005), 단회 투여 후 최대 72시간까지만 관찰하여 독성이 일어날때의 유전자 발현 변화만을 보았다. 본 연구에서는 랫드에 APAP를 1 g/kg body weight로 투여한 후 24, 48시간후의 손상(injury)을 보고, 2주 후의 재생(regeneration) 상태까지 관찰하여, APAP에 의한 손상기-재생기 모델을확립 하였을 뿐만 아니라 각 단계에서의 유전자 발현 변화를 조사함으로써 손상기 특이적, 재생기 특이적 유전자를 선별하였다. 더불어 기존에 보고된 유전자의 발현 양상 외에 단백질 대사나 스트레스에 반응하는 유전자의 변화를 보았다.
- 본 연구에서는 랫드에 APAP를 1 g/kg body weight로 투여한 후 24, 48시간후의 손상(injury)을 보고, 2주 후의 재생(regeneration) 상태까지 관찰하여, APAP에 의한 손상기-재생기 모델을확립 하였을 뿐만 아니라 각 단계에서의 유전자 발현 변화를 조사함으로써 손상기 특이적, 재생기 특이적 유전자를 선별하였다. 더불어 기존에 보고된 유전자의 발현 양상 외에 단백질 대사나 스트레스에 반응하는 유전자의 변화를 보았다.
- , 2005), 2주는 임의로 결정하였다. 희생 즉시 말초 혈액을 채취하고, 간 조직을 적출하였다.
- 혈청 생화학적 분석으로 alanine aminotransferase (ALT)와 aspartate aminotransferase(AST)의 활성을 측정하였다. 조직 병리학적 분석은 간 조직 절편의 H&E 염색을 통해 관찰하였다.
- 조직 병리학적 분석은 간 조직 절편의 H&E 염색을 통해 관찰하였다. 자세한 방법은 기존 문헌을 따랐다(Chung et al.
- 다섯 마리의 한 군당 혈청 생화학 및 조직 병리학적 분석을 통해 일관된 결과를 보여준 세 마리의 간 조직으로부터 total RNA< 추출한 후 혼합하여(pooled), 조건 당 6회의 잡종화(hybridization)를 실시하였다. RNA 추출, rat custom cDNA chip, 형광표지 탐식의 방법, 잡종화, 마이크로어레이 분석법 등은 기존의 방법과 동일하다 (Chung et al.
대상 데이터
- 5주령의 Sprage-Dawley 랫드를 구입하여(Orient; Seoul, Korea) 한양대학교 의과대학 시험동물실의 SPF 시설에서 1주간 순화한 후 5마리를 한 군으로 하여 1 g/kg body weight의 APAP(Sigma-Aldrich; St. Louis, MO, U.S.A.) 를 경구 투여했다. 실험동물은 IACUC 및 AAALAC의 실험동물 취급 규정을 준수하였다.
- 625배)인 경우만을 특이적으로 발현한 것으로 정의하였다. 손상기와 재생기 특이적 유전자는 기존 문헌과 동일한 방법으로 선별하였으며(Chung et a/., 2005a), 각각 297개와 149개였다. 297/fl clone 중 169개는 손상기에 그 발현이 감소하였으나, 128개는 증가하였다.
이론/모형
- ) 를 경구 투여했다. 실험동물은 IACUC 및 AAALAC의 실험동물 취급 규정을 준수하였다. 투여 량은 LD5o(2.
- 조직 병리학적 분석은 간 조직 절편의 H&E 염색을 통해 관찰하였다. 자세한 방법은 기존 문헌을 따랐다(Chung et al., 2005b).
성능/효과
- 2). ALT와 AST의 변화도 24 및 48시간에만 약하게 관찰되었고, 2주에는 정상 수준으로 낮아졌다 (data not shown). 이와 같은 관찰 결과를 토대로 APAP 투여 후 24, 48시간은 손상기 , 2주 후는 재생기로 구분할수 있었다.
- ALT와 AST의 변화도 24 및 48시간에만 약하게 관찰되었고, 2주에는 정상 수준으로 낮아졌다 (data not shown). 이와 같은 관찰 결과를 토대로 APAP 투여 후 24, 48시간은 손상기 , 2주 후는 재생기로 구분할수 있었다.
- 1998). 본 연구에서는 CYP1A2의 발현이손상기의 두 시간대에서 모두 감소하였으나, 나머지 두유전자의 발현은 확인할 수 없었다. Cyp1a2 유전자가 인위적으로 손상된 knockout 생쥐는 wild type 에 비해 APAP에 의한 간 손상에 더 저항성을 가지는 것으로 보고된 바 있는데(Liang et at.
- 본 연구에서 사용된 APAP에 의해 간 세포에서 다수의 스트레스 관련 유전자의 발현 변화가 나타났다. 산화적 (oxidative) 스트레스에 의해 발현이 조절되는 것으로 알려진 carbonic anydrase 3(Ca3, Rn.
- , 2005a), 독성에 대한 간 세포의 방어기전의 일부로 생각된다. 한편 단백질의 분해에 관여하는 유전자의 발현변화도 관찰되었는데 ubiquitin C(Ubc, Rn.3761)의 발현은 손상기의 48시간에 감소하였으나, 프로테아솜 소단위체(proteasome subunit, Ps)인 Psma1(Rn.2668), Psma4 (Rn.11076), Psmb3(Rn.232)의 발현은 손상기의 24시간에 모두 증가하였다. 지방산(fatty acid)의 대사에 관여하는 유전자 중(fatty acid Coenzyme A ligase, long chain 2(Acsl1, Rn.
- 손상기와 재생기에 각각 특이적으로 변화하는 유전자를 선별하였으며, cytochrome P450 유전자 군, 스트레스 반응에 관여하는 유전자 군, 단백질 및 지질의 대사에 관여하는 유전자 군에 특이적인 발현 변화가 있음을 보았다. 향후 고밀도의 유전자 칩을 이용하고, 다수의 독성 물질에대한 연구를 수행함으로써 APAP 독성에 대한 특이 지표를 결정할 수 있을 것으로 기대된다.
후속연구
- 손상기와 재생기에 각각 특이적으로 변화하는 유전자를 선별하였으며, cytochrome P450 유전자 군, 스트레스 반응에 관여하는 유전자 군, 단백질 및 지질의 대사에 관여하는 유전자 군에 특이적인 발현 변화가 있음을 보았다. 향후 고밀도의 유전자 칩을 이용하고, 다수의 독성 물질에대한 연구를 수행함으로써 APAP 독성에 대한 특이 지표를 결정할 수 있을 것으로 기대된다.
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